阿霉素前药纳米粒/姜黄素联合递送系统的构建及其抗肿瘤研究

目的以酸敏感阿霉素前药纳米粒为基础,通过负载姜黄素构建联合递送系统,从而在提高抗肿瘤细胞增殖效果的同时降低由阿霉素引起的心肌细胞毒性。方法利用阿霉素(doxorubicin,DOX)的氨基与醛基化聚乙二醇(PEG-CHO)的醛基进行席夫碱反应得到PEG-DOX前药聚合物,通过疏水作用将疏水性抗肿瘤药物姜黄素(curcumin,Cur)负载到PEG-DOX的疏水内核中,最后通过纳米沉淀技术得到同时负载两种药物的前药纳米粒PEG-DOX/Cur NPs。通过核磁(1H-NMR)对PEG-DOX前药进行结构表征,利用动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)对PEG-DOX/Cur NPs的粒径和形貌进行表征;利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)研究PEG-DOX/Cur NPs在酸性条件下的药物释放行为;利用MTT法研究PEG-DOX/Cur NPs的肿瘤细胞(H1975)增殖抑制效果以及评价PEG-DOX/Cur NPs对心肌细胞(H2C9)的毒性;通过H2C9细胞内的氧化自由基(ROS)水平检测(2',7'-二氯荧光素二乙酸盐法,DCFH-DA法)揭示PEG-DOX/Cur NPs对DOX心肌细胞毒性改善的机理。结果 PEG-DOX/Cur NPs为直径约90 nm的均一的球形结构,在酸性条件下能够同步释放DOX和Cur;MTT结果表明PEG-DOX/Cur NPs的H1975细胞增殖抑制效果优于DOX和PEG-DOX NPs(P<0.05),且PEG-DOX/Cur NPs对H2C9细胞的毒性明显低于DOX和PEG-DOX NPs(P<0.05);H2C9细胞ROS含量检测结果表明PEG-DOX/Cur NPs处理的心肌细胞具有最低的ROS水平(P<0.05),由此说明PEG-DOX/Cur NPs较低的心肌细胞毒性可能源于Cur引起的胞内ROS的降低所致。结论基于DOX前药纳米粒负载Cur构建联合递送系统在实现了理想的肿瘤细胞增殖抑制效果的同时,明显的降低了由DOX引起的心肌细胞毒性,实现了联合治疗的效益最大化。

体外急性心肌梗死早期诊断方法的研究

从人心肌中提取心肌肌凝蛋白轻链(CMLC),免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞做常规融合,制备单克隆抗体。通过抗人心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体的相加指数、亲和常数测定和抗体夹心实验,筛选到配对较好的两对单抗,在此基础上建立起轻链夹心ELISA方法,为临床急性心肌梗死早期诊断方法研究提供条件。

转变中的家庭

转变中的家庭褚丽萍中国的改革开放使社会经济生活发生了全方位的改变，作为社会细胞的家庭更是如此，在新的历史时期遇到了前所未有的挑战。家庭转变理论认为：家庭转变的主要特征是，在人口转变的第一阶段，家庭平均规模趋于扩大，大家庭数量略有增加；在人口转变的后期...

CMLC夹心酶联免疫分析的建立及初步应用

目的建立人心肌肌凝蛋白轻链（CMLC）夹心酶联免疫分析方法并初步进行应用研究。方法通过对鼠抗人CMLC单克隆抗体（McAb）的相加指数、亲和常数进行测定和夹心实验,筛选到配对较好的两对CMLC单抗,在此基础上建立了CMLC夹心酶联免疫分析方法,用该方法对心肌梗塞病人和正常人血清CMLC进行测定。结果最佳CMLC单抗包被浓度为5～7μg/mL,CMLC抗原在1～50ng/mL范围内标准曲线线性良好。血清CMLC测定OD值：正常人（20名）为（0.875±0.162）,心肌梗塞病人（30名）为（1.463±0.473）。结论此方法可以检测出人血清中CMLC的含量,重复性好,灵敏度高,是临床诊断心肌梗塞的良好方法。

定量分析柑桔黄龙病菌在沙糖桔中的分布

在广东清远感染柑桔黄龙病的沙糖桔园采带果枝条,分部位取样提取总DNA,并通过实时荧光PCR检测"Candidatus Liberibacter asiaticus"浓度。结果表明,不同部位的黄龙病菌浓度存在较大差异。其中,果实桔络的黄龙病菌含量最高,且黄龙病菌在果实中呈现富集状态。

雾化吸入干扰素α1b在兔体内的分布及代谢途径

目的研究雾化吸入与肌内注射干扰素α1b(IFNα1b)在兔体内分布及代谢的差异,考察雾化吸入干扰素治疗肺部疾病的优越性。方法将干扰素α1b进行125I标记,选用新西兰大耳白兔,以肌内注射为对照,采用雾化吸入的方式给药,不同时间点取血,γ计数仪测定血药浓度,通过小动物活体成像系统和γ计数仪检测肺组织不同部位的药物分布情况和主要代谢脏器肝和肾中的药物含量。结果与肌内注射比较,雾化吸入给药后肺组织中的干扰素含量更高,肺组织内滞留时间长,血药浓度达峰时间为8 h,明显延迟,而肾组织中的药物含量始终维持较低浓度。结论与常规肌内注射给药相比,雾化吸入干扰素α1b肺组织药物含量高,药物体内循环时间长,是干扰素治疗肺部疾病更为有效的给药途径。

肿瘤靶向药物载体的肿瘤细胞靶向性研究

目的研究多肽介导的肿瘤靶向药物载体的制备及其细胞摄取性能。方法以丁二酸酐为手臂将SP5-52多肽共价结合到第4代聚酰胺-胺(PAMAM)型树枝状高分子材料(G4)上,荧光分子异硫氰酸荧光素(FITC)为检测探针,以SP5-52多肽连接G4制备靶向药物载体G4-FITC-SP5-52,以阿霉素(DOX)为模型药物,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色试验检测载体的细胞毒性,流式细胞术比较连接SP5-52前后细胞对载体的吸收情况,倒置荧光显微镜观察肿瘤细胞对载体及药物的吸收情况。结果经乙酰化修饰的靶向载体具有良好的生物相容性,在4μmol/L浓度下24h的细胞存活率高于80%;流式细胞仪检测结果表明靶向载体对非小细胞肺癌H460细胞具有良好的靶向性,游离SP5-52多肽可以抑制载体的靶向性;靶向载体可以通过物理包埋的方式载阿霉素,并对阿霉素的释放具有缓释作用;倒置荧光显微镜观察结果显示靶向载体可以使阿霉素更大量的进入肿瘤细胞。结论 G4-FITC-SP5-52体外展示出了良好的肿瘤靶向性,有可能成为临床肿瘤治疗的靶向药物载体。

甲状腺功能低下对大鼠小脑细胞凋亡的影响

目的 观察发育期大鼠小脑细胞程序化死亡（ Ｐ Ｃ Ｄ）的发生及甲状腺素（ Ｔ４）对大鼠小脑 Ｐ Ｃ Ｄ 的影响。方法 用丙基硫氧嘧啶（ Ｐ Ｔ Ｕ）复制甲状腺功能低下的大鼠动物模型，然后用原位末端标记方法检测 Ｐ Ｃ Ｄ 阳性细胞。结果 （１） Ｐ Ｔ Ｕ 组母鼠和各日龄仔鼠血清 Ｔ４ 水平明显低于对照组（ Ｐ＜ ０．０１ 或 Ｐ ＜ ０．０５）； Ｐ Ｔ Ｕ＋ Ｔ４ 组仔鼠用 Ｔ４ 替代后血清 Ｔ４ 水平恢复正常； Ｐ Ｔ Ｕ 组 Ｔ３ 代偿性升高；（２）正常小脑各层内均有散在的凋亡细胞，以内颗粒层最多；正常小脑生后 １０ 天和 ２０ 天有两个 Ｐ Ｃ Ｄ高峰；甲低使小脑各层结构内 Ｐ Ｃ Ｄ 数量均增加，而且 Ｐ Ｃ Ｄ 峰分别延迟到生后 １５ 天和 ３０ 天；补充 Ｔ４后 Ｐ Ｃ Ｄ 数量及峰值基本恢复正常。结论 Ｔ４ 不但促进发育期脑细胞的增殖、迁移和分化，对脑细胞的 Ｐ Ｃ Ｄ 也有明显影响。

抗纤维蛋白-抗尿激酶双特异性单克隆抗体的体内外溶栓效果的研究

目的研究抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单克隆抗体在体内外的溶栓效力。方法通过分泌抗纤维蛋白单抗的杂交瘤细胞（变异株）与尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，获得分泌双特异性单抗（ｂｓＭｃＡｂｓ）杂交－杂交瘤细胞。采用ＥＬＩＳＡ法检测该ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶的结合力。用１３１Ｉ血浆－血浆凝块溶解率法测定体外溶栓效力。用兔血栓模型测定体内溶栓效力。结果获得８株分泌抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单抗的杂交－杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶均有很强的结合力。体外溶栓实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ可使尿激酶的溶栓效力增强１５．５％。体内溶栓实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ的溶栓效力为尿激酶的１．６～２．１倍。结论单抗导向溶栓剂具有高度特异性和局部溶栓效力强等优点，值得进一步研究。

酸敏感阿霉素前药纳米粒的合成及其在治疗脑胶质瘤中的作用

目的合成一类新的具有酸敏感性能的阿霉素前药纳米粒(PEG-DOX NPs),对其结构进行表征,并研究其在体外抗脑胶质瘤中的作用和透过血脑屏障的效率。方法通过席夫碱反应合成具有酸敏感的聚乙二醇-阿霉素(PEG-DOX)单体,通过自组装制备PEG-DOX NPs。利用动态光散射(DLS)和核磁对单体进行结构表征,通过透射电镜(TEM)对纳米粒的微观形貌进行观察,紫外检测法测定PEG-DOX NPs在酸性条件下的释放行为,荧光显微镜观察脑胶质瘤细胞对PEG-DOX NPs的摄取行为。利用MTT法测定PEG-DOX NPs与阿霉素(DOX)对脑胶质瘤细胞的杀伤作用。PEG-DOX NPs修饰吐温80(PS-80)获得PS80-PEG-DOX NPs。将9只BALB/c小鼠随机均分为Free DOX组、PEG-DOX NPs组和PS80-PEG-DOX NPs组,利用小动物活体成像系统比较其修饰前后脑及主要脏器内DOX的荧光强度。结果 PEG-DOX能够自组装成直径100 nm左右的纳米粒;在酸性条件下PEG-DOX NPs能够快速释放DOX,肿瘤细胞对PEG-DOX NPs的摄取虽然比DOX慢,但蓄积时间更长;PEG-DOX NPs和Free DOX对C6细胞的增殖抑制均呈现浓度依赖性,PEG-DOX NPs组细胞增殖抑制率在各个浓度下均低于Free DOX组。PS-80修饰后,PS80-PEG-DOX NPs透过血脑屏障的效率显著高于DOX和PEG-DOX NPs组。结论 PEG-DOXNPs具有良好的体外抗肿瘤作用,修饰后可高效透过血脑屏障,使其体内治疗脑胶质瘤成为可能。

RGD功能化多肽纳米纤维的制备及其体内肿瘤靶向性研究

目的制备肿瘤靶向RGD多肽纳米纤维,研究其体内分布和肿瘤靶向性。方法通过多肽固相合成法制备靶向多肽Nap-GFFYGRGD(RGD-肽)和对照多肽Nap-GFFYGRGE(RGE-肽),利用核磁和质谱对多肽的分子结构进行表征。多肽溶液经煮沸后冷却可自组装形成纳米纤维(RGD-纤维和RGE-纤维),通过透射电镜(TEM)对纳米纤维的微观形貌进行观察。采用氯胺-T法对多肽进行125I标记,利用放射性HPLC对标记多肽进行分离纯化。建立BALB/c小鼠皮下乳腺癌肿瘤模型,125I标记的多肽自组装形成纳米纤维后经尾静脉注射,分别于注射后1、3、6、12 h进行眼球取血并处死小鼠,取肿瘤、心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、肌肉和脑等,用γ计数仪测量各组织放射性信号强度。结果 RGD-肽和RGE-肽均可自组装形成直径约为10~20 nm的纳米纤维。RGD-纤维和RGE-纤维在注射后各个时间点在体内主要脏器的分布规律相似,主要分布于胃中,其次是肠。但2者在肿瘤组织的分布规律存在显著性差异,RGD-纤维注射后6 h内在肿瘤组织中呈现出一个逐渐积累的过程,而RGE-纤维在3 h时达最高浓度,在6 h 2者差异达到最大,分别为6.25%ID/g和2.79%ID/g(P<0.01)。结论肿瘤靶向肽RGD能明显提高多肽纳米纤维在体内的肿瘤靶向分布,为该载体作为抗肿瘤药物载体用于肿瘤靶向治疗提供了强有力的数据支持。

ROS响应性纳米前药的制备及其体外抗肿瘤研究

目的设计合成一类新的具有活性氧自由基(ROS)响应性的紫杉醇前药纳米粒,对其结构进行表征,并研究其稳定性、体外响应性释药行为、细胞摄取情况和体外抗肿瘤作用。方法通过硫醚间隔基(2S)连接亲水性的聚乙二醇(PEG)与疏水性的紫杉醇(PTX),得到前药聚合物PEG-2S-PTX单体,通过自组装制备前药纳米粒PEG-2S-PTX NPs。同时合成以丁二酸酐(SA)为间隔基的PEG-SA-PTX单体,并制备前药纳米粒PEG-SA-PTX NPs作为对照。利用核磁(1H-NMR)对前药进行结构表征,利用动态光散射(DLS)对纳米粒的粒径进行表征并考察其稳定性。采用高效液相色谱法(HPLC)研究纳米粒在氧化条件下的释放行为,通过荧光显微镜观察人乳腺癌MCF-7细胞对纳米粒的摄取行为,利用MTT法比较纳米粒对MCF-7的增殖抑制效果。结果 PEG-2S-PTX、PEG-SA-PTX能够分别自组装成粒径为(92.15±12.42)nm、(113.20±12.16)nm的纳米粒;在氧化条件下PEG-2S-PTX NPs能够快速响应性释放PTX,而PEG-SA-PTX NPs只产生微弱的响应性;PEG-2S-PTX NPs较PEG-SA-PTX NPs能被MCF-7细胞更快速地摄取,对MCF-7细胞增殖抑制均呈浓度依赖性,当浓度为0.05、0.1、5、10、50、100 mg/L时PEG-2S-PTXNPs体外细胞毒性强于PEG-SA-PTX NPs(P<0.05)。结论 PEG-2S-PTX NPs作为具有ROS响应性的紫杉醇前药纳米粒,能在被摄取进入细胞后以ROS响应的方式在肿瘤细胞内快速释放PTX,发挥良好的体外抗肿瘤作用。

乙酰化可降低聚酰胺-胺的细胞毒性

背景:聚酰胺-胺型树枝状高分子纳米材料已被广泛应用于药物载体的研究,但由于整代聚酰胺-胺表面有大量带正电荷的氨基,具有一定的细胞毒性。目的:观察乙酰化对聚酰胺-胺细胞毒性的影响。方法:①细胞增殖检测:采用MTT法检测在含0,0.125,0.25,0.5,1,2,4μmol/L乙酰化聚酰胺-胺的培养液中人胚肾293T细胞的增殖。②细胞形态:倒置荧光显微镜观察在含4μmol/L乙酰化聚酰胺-胺的培养液中人胚肾293T细胞的形态。③细胞周期:流式细胞术检测在含0,5,10,15,20mg/L乙酰化聚酰胺-胺的培养液中人胚肾293T细胞的细胞周期。结果与结论:聚酰胺-胺对293T细胞具有一定的细胞毒性,在4μmol/L浓度下48h的细胞存活率仅为52%,而乙酰化可显著降低聚酰胺-胺的细胞毒性(P<0.01);聚酰胺-胺孵育的细胞发生团缩,伸展性变差,而乙酰化聚酰胺-胺孵育的293T细胞与正常培养细胞基本一致,具有良好的伸展性;乙酰化聚酰胺-胺对细胞周期无影响,而聚酰胺-胺在20mg/L较高质量浓度时可使细胞S期产生阻滞。表明乙酰化可以降低聚酰胺-胺的细胞毒性。

SB203580对受照小鼠免疫细胞的作用研究

目的:探讨p38抑制剂SB203580(SB)在免疫细胞辐射损伤中的作用。方法:将C57BL/6小鼠分为对照组、照射组、SB组。对照组接受假照射,对其余两组进行4G y全身照射。SB203580 15m g/kg腹腔注射,照射24h后开始给药,隔日给药共给药5次。SB末次给药24h后处死小鼠,取外周血进行分型CD4、CD8、B220检测,取骨髓测定ROS。结果:SB组与照射组比较,外周血白细胞增加,骨髓ROS水平与照射组比较有所下降(P<0.05)。结论:p38抑制剂能降低受照小鼠骨髓细胞的ROS水平,对4G y照射后的外周血无显著保护作用。

RRx-001作为放射治疗增敏剂的研究进展

放疗是治疗恶性肿瘤的主要手段之一,但由于放疗抵抗现象的存在,放疗效果并不尽如人意。为缓解放疗抵抗,提高放疗效果,放疗增敏剂应运而生。RRx-001作为新近被发现的放疗增敏剂,表现出了良好的临床应用前景。本文就RRx-001的来源、安全性、放疗增敏活性及相关机制的研究进展进行综述。

RGD修饰树枝状高分子PAMAM药物靶向传输实验研究

制备了RGD靶向修饰的聚酰胺-胺(PAMAM)树枝状聚合物,以阿霉素为药物模型研究了载体的载药性能、体外释放行为及对Hela细胞的毒性.利用激光共聚焦显微镜观察了Hela细胞对药物和材料的摄取行为.结果显示,载体具有良好的生物相容性,Hela细胞对PAMAM-Ac-FITC-RGD的摄取效率≥95%,而对PA-MAM-Ac-FITC的摄取效率<40%,293T细胞对两种材料的摄取效率均低于30%.阿霉素可以通过物理包埋的方法固定,其释放受pH、离子强度等因素的影响较大.共聚焦结果显示,载体可以在较短的时间内携带药物进入Hela细胞.RGD修饰PAMAM使载体获得了靶向性,提高了药物传输效率.

肿瘤放射性受体显像剂奥曲肽的固相合成

采用苏氨酸转变为苏氨酸乙酯,再用LiAlH4还原该乙酯合成了苏氨醇,用自动多肽合成仪和Fmoc(9-芴甲基羰基)保护的氨基酸合成了7肽—树脂;再用三氟醋酸铊(Tl(Tfa)3)在7肽—树脂上形成7肽的二硫键;用苏氨醇氨解法裂解肽—树脂并在7肽链上接上苏氨醇形成八肽;然后用三氟乙酸脱去氨基酸侧链保护基团,用高效液相色谱法纯化八肽,得到了奥曲肽(OCT)。

心肌肌球蛋白及其重链的研制、特性鉴定和应用

目的分离、提纯人心肌肌球蛋白(HCM)及其重链(HCMHC),为心肌显像及其显像剂抗HCMHC抗体的研究打基础。方法参考猪心肌肌球蛋白制备方法,做了较大改进后,提取了HCM,用盐酸胍裂解HCM制备了HCMHC。用SDS-PAGE(梯度)电泳测定分子质量,用检测无机磷的方法测定HCM的ATP酶活力,用Ellman氏试剂测定游离巯基。将HCMHC免疫动物,用ELISA法测定了血清抗体效价。结果HCMHC的相对分子量为200×103,纯度大于80%;被免疫的BALB/C小鼠血清的抗体滴度最高达107,细胞融合率达80%。结论研制的HCMHC具有良好的免疫学活性,为下一步抗HCMHC单链可变区抗体(ScFv)及其放射性核素受体显像的研究打下了基础。

17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯联合化疗抗肿瘤作用研究

目的:观察17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯及其联合化疗对EC901食管癌的抑制作用。方法:将接种EC901瘤细胞的裸鼠分为对照组、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯联合5-Fu组,连续给药9d,分别检测肿瘤抑制率、外周血常规、骨髓有核细胞计数、肿瘤病理等指标。结果:17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯治疗组瘤重明显小于对照组,联合5-Fu组肿瘤生长分别低于5-Fu组和照射组。结论:17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯联合5-Fu对EC901食管癌的抑制具有增效作用。

时间分辨荧光免疫分析技术研究

时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)是一种全新的国际上公认的最有发展前途的非同位素免疫分析技术.镧系元素(Eu、Tb、Sm、Dy等)螯合物有突出的固有特点:激发最大波长到发射最大波长之间的Stokes位移很大,前者对后者无干扰.激发光谱段较宽,可增加激发能;发射光谱带窄,50%发射谱带宽度不足10nm,本底荧光很小;荧光衰变时间很长,有的达1ms.