儿童免疫性血小板减少症复发危险因素的调查及其预测模型的构建

目的调查儿童免疫性血小板减少症(ITP)复发情况,并建立其预测模型。方法选择2018年1月至2022年4月苏州市吴江区儿童医院(苏州大学附属儿童医院吴江院区)及苏州大学附属儿童医院接诊的ITP患儿288例进行研究。收集可能影响儿童ITP复发相关因素,将模型组患儿根据有无复发分为2组,比较2组各指标,并以LASSO回归筛选出潜在影响因素后以Logstic回归分析筛选出儿童ITP患者复发的独立性影响因素,采用R语言构建列线图模型并进行验证。结果模型组201例患者中共有37例(18.47%)出现复发,复发组与未复发组患者年龄、血型、治疗前病程、前驱感染、出血情况、初始治疗方案、抗核抗体、初诊血小板计数、初诊平均血小板体积、初诊血小板分布宽度、初诊外周血淋巴细胞计数、治疗后血小板计数升至有效时间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。LASSO回归基础上行多因素Logistic回归分析:血型、治疗前病程、前驱感染、初始治疗方案、初诊外周血淋巴细胞计数、治疗后血小板计数升至有效时间为儿童咳嗽变异性哮喘转为典型哮喘的独立性影响因素。根据多因素分析结果,以R语言建立儿童ITP复发预测列线图模型。接受者操作特征曲线(ROC)分析结果显示,模型组列线图模型预测儿童ITP复发的AUC为0.867[95%CI(0.796,0.938)]灵敏度为84.2%,特异度为73.1%;验证组曲线下面积(AUC)为0.838[95%CI(0.765,0.911)]灵敏度为82.3%,特异度为78.4%。采用Bootstrap法重复抽样1000次,并以验证组进行验证,校准曲线结果显示:模型组与验证组预测曲线与标准曲线基本拟合,提示模型预测准确度较高。模型组决策曲线分析结果显示:当该列线图模型预测儿童ITP复发的概率阈值为0.15~0.75时,患者的净受益率大于0。结论儿童ITP复发主要受患者年龄、血型、治疗前病程等因素的影响,根据上述因素建立的列线图模型用于育儿儿童ITP复发具有较高的准确度与区分度。

淋巴细胞亚群联合趋化因子对儿童原发免疫性血小板减少症诊断价值研究

目的探讨淋巴细胞亚群联合趋化因子对儿童原发免疫性血小板减少症(ITP)的诊断价值。方法收集拟诊为ITP的132例患儿,根据ITP相关的临床诊断标准诊断结果将患儿分为ITP组与非ITP组。抽取外周静脉血6 ml,以流式细胞仪对CD4^(+)、CD8^(+)及CD3^(+)水平进行检测,以酶联免疫吸附法检测CC类趋化因子配体5(CCL5)、CC类趋化因子配体11(CXCL11)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,以全自动细胞分析仪对血小板计数(PLT)进行检测。比较2组患儿淋巴细胞亚群及趋化因子水平,并对淋巴细胞亚群及趋化因子水平与PLT进行相关性分析;采用ROC法评估各指标单独检测与联合检测对ITP的诊断效能。结果ITP组患者CD4^(+)和CD3^(+)水平低于非ITP组,CD8^(+)水平高于非ITP组(P<0.05);ITP组患者CCL5、CXCL11和MCP-1水平均高于非ITP组(P<0.05);相关性分析结果显示ITP组患者CD4^(+)和CD3^(+)与PLT呈正相关(P<0.05),CD8^(+)、CCL5、CXCL11、MCP-1与血小板计数呈负相关(P<0.05);ROC分析结果显示,CD4^(+)、CD8^(+)、CD3^(+)、CCL5、CXCL11和MCP-1对儿童ITP诊断的截断值值分别为27.13%、24.02%、59.88%、41.02 ng/L、30.18 ng/L和188.27 ng/L,AUC分别为0.893、0.880、0.629、0.801、0.892和0.751,六者并联诊断(指并联检测时CD4^(+)、CD3^(+)中的一项及以上低于截断值和/或CD8^(+)、CCL5、CXCL11和MCP-1中的一项及以上高于截断值)的AUC为0.967,其诊断效能高于各指标单独检测(P<0.05)。结论儿童ITP患者与非ITP患者淋巴细胞亚群及趋化因子均具有差异,CD4^(+)、CD8^(+)、CD3^(+)、CCL5、CXCL11和MCP-1可用于儿童ITP的诊断,各指标联合检测可提高检测效能。

作者更正

由于作者疏忽,发表在《基础医学与临床》2024年1月第44卷第1期第84⁃91页的文章(沈晨涛等,儿童免疫性血小板减少症复发危险因素的调查及其预测模型的构建)中部分表述有误,现做如下更正:第84页摘要第9行、第87页右栏倒数第2行、第89页右栏倒数第10行中“儿童咳嗽变异性哮喘转为典型哮喘的独立性影响因素”改为“儿童ITP复发的独立影响因素”。

2021年某院细菌培养阳性病原菌分布及耐药性分析

目的为临床感染性疾病的诊治提供参考。方法采用质谱分析仪鉴定江苏省苏州市吴江区儿童医院和苏州大学附属儿童医院(以下称为该院)2021年1月至12月收治的年龄不超过16岁患儿的细菌培养标本,依据美国临床和实验室标准协会(CLSI)抗菌药物的药物敏感性试验执行标准判定检测结果,并分析细菌培养阳性病原菌的分布及耐药性。结果共收到送检标本37976份,主要来源于血液(49.19%)、痰液(19.83%)、粪便(14.81%)、中段尿液(13.00%);分离出可能致病菌3980株,标本来源阳性检出率排前3位的分别为脓性分泌物(80.57%)、耳朵分泌物(50.48%)、痰液(23.94%),其中革兰阳性菌1842株(46.28%)、革兰阴性菌2053株(51.58%)、真菌85株(2.14%)。革兰阳性菌中,排前3位的分别为肺炎链球菌(32.79%)、金黄色葡萄球菌(31.54%)、屎肠球菌(14.17%);革兰阴性菌中,排前3位的分别为沙门菌属(35.36%)、大肠埃希菌(15.20%)、流感嗜血杆菌(13.20%)。药物敏感性试验结果显示,沙门菌属对庆大霉素、阿米卡星、头孢唑林、氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林他唑巴坦、亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为100.00%,100.00%,100.00%,75.62%,75.62%,5.92%,4.41%,4.41%;大肠埃希菌对氨苄西林、美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮舒巴坦的耐药率分别为85.58%,14.42%,14.10%,0;肺炎链球菌对头孢呋辛、头孢曲松、头孢哌酮舒巴坦、万古霉素、利奈唑胺的耐药率分别为48.01%,44.04%,3.31%,0,0;金黄色葡萄球菌对头孢西丁、氨苄西林、青霉素、利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁、氯霉素的耐药率分别为100.00%,100.00%,89.85%,0,0,0,0。结论该院感染性疾病的送检标本以血培养为主,但阳性检出率以脓性分泌物最高;革兰阴性菌为主要致病菌,对β-内酰胺类抗菌药物较敏感;革兰阳性菌对万古霉素、利奈唑胺较敏感。临床用药时应根据药物敏感性试验结果进行个体化用药,以减少耐药的产生。

以PBL为基础的情景模拟教学在儿童血液科沟通能力培训中的应用

目的探讨以PBL为基础的情景模拟教学在儿童血液科沟通能力培训中的应用。方法对在苏州大学附属儿童医院血液科进行住院医师规范化培训的学员进行医患沟通能力的培训。所有学员采用抽签的方式随机分为对照组24人及观察组24人。对照组采用传统的讲述式教学;观察组采用PBL联合情景模拟教学。应用利物浦医师沟通能力评价量表(Liverpool communication skills assessment scale,LCSAS)中文修订版评估比较两组自身在培训前及培训后的差异,以及两组在培训后的差异;并调查学员对这两种教学方法的认可程度;最后通过出科考试成绩评估医师对儿童血液科知识的掌握程度。通过SPSS 20.0软件进行卡方检验和t检验。结果培训前两组的LCSAS评分分别为(11.61±2.21)、(11.95±2.22),差异无统计学意义(P>0.05);观察组采用以PBL为基础的情景模拟教学培训后,观察组的LCSAS评分为(27.41±2.53)、对照组为(23.30±1.81),两组差异具有统计学意义(P<0.05)。问卷调查结果显示,以PBL为基础的情景模拟教学的好评率为91.67%(22/24),较传统讲述式教学高[62.50%(15/24)],差异具有统计学意义(P<0.05)。出科考试显示,学员经过以PBL为基础的情景模拟教学培训后,对知识的掌握程度更好,分数更高,优秀率为91.67%(22/24),较对照组高[66.67%(16/24)],差异具有统计学意义(P<0.05)。结论采用以PBL为基础的情景模拟教学更能提高儿童血液科住院医师规范化培训学员的沟通能力,提高其对于专业知识的掌握程度,学员对此教学方法的满意度较高。

EBV-IM患儿外周血EBV-DNA载量与Th1/Th2相关细胞因子及临床特征的关系

目的 探讨EB病毒(EBV)感染的传染性单核细胞增多症(IM)患儿EBV-DNA载量与外周血辅助型T细胞(Th)1/Th2型相关因子及临床特征的关系。方法 选取2020年1月-2021年7月在吴江区儿童医院确诊为EBV-IM患儿73例作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测患儿外周血中EBV-DNA。根据病毒拷贝数,将所有患儿分为低载量组(n=17),中载量组(n=35)和高载量组(n=21)。检测三组患儿相关生化指标[白细胞(WBC)、血沉(ESR)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸肌酶同工酶(CK-MB)]、Th1/Th2型细胞标志物[白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-6、IL-10]及淋巴细胞亚群水平[CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(8)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、CD_(19)^(+)、CD16^(+)+CD_(56)^(+)];观察三组患儿的临床特征。结果 中、高载量组WBC、ESR、ALT、IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6水平均高于低载量组,IL-4、IL-10水平均低于低载量组(P<0.05);中、高载量组CD_(3)^(+)、CD_(8)^(+)水平高于低载量组,CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、CD_(19)^(+)、CD16^(+)+CD_(56)^(+)水平低于低载量组(P<0.05);高载量组发热时间和住院时间均长于低载量和中载量组(P<0.05);高载量组咽峡炎发生率高于低载量组(P<0.05),肝脾肿大发生率均高于低载量和中载量组(P<0.05)。结论 不同EBV-DNA载量患儿外周血Th1/Th2细胞因子表达水平和临床特征存在差异,且EBV-DNA载量与Th1/Th2细胞因子存在相关性,可以反映疾病的严重程度。

急性B淋巴细胞白血病患儿外周血IL-7、NK细胞表达对化疗效果的预测价值

目的分析急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿外周血白细胞介素-7(IL-7)、自然杀伤(NK)细胞表达对化疗效果的预测价值,为临床治疗B-ALL提供经验指导。方法采用前瞻性研究方法,研究对象来源2015年4月—2020年2月治疗的B-ALL患儿,所有患儿均采用VDLD方案(长春新碱+柔红霉素+门冬酰胺酶+地塞米松)化疗,化疗前检测外周血IL-7、NK细胞水平,化疗33 d后统计化疗效果。比较不同化疗效果中B-ALL患儿性别、年龄、临床危险度、IL-7、NK细胞等资料,分析B-ALL患儿外周血IL-7、NK细胞表达对化疗效果的预测价值。结果本研究共纳入308例B-ALL患儿进行研究,300例按规定完成33 d的规范治疗,其中完全缓解140例(46.67%),部分缓解98例(32.67%),疾病进展36例(12.00%),疾病复发26例(8.67%)。缓解组白细胞计数、IL-7低于未缓解组,纤维蛋白原、D-二聚体及NK细胞水平高于未缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。经点二列相关性分析显示,B-ALL患儿IL-7水平与化疗效果呈正相关(r=0.350,P<0.05),NK细胞水平与化疗效果呈负相关(r=-0.342,P<0.05)。经Pearson相关性分析显示,B-ALL患儿外周血IL-7与NK细胞呈负相关(r=-0.191,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线,结果显示化疗前IL-7、NK细胞单独及联合预测B-ALL患儿化疗效果的曲线下面积分别为0.722、0.739、0.768,均有一定预测价值,当IL-7与NK细胞临界值分别取15.590 pg/mL、7.185时预测价值最佳。结论B-ALL患儿外周血IL-7水平升高、NK细胞水平降低,外周血IL-7、NK细胞可作为化疗效果的预测指标。

长链非编码RNA0610009 E02 Rik／Notch1腺病毒载体构建及其在原代肝细胞中的表达

目的构建长链非编码RNA-0610009 E02 Rik（长链非编码RNA-0610009 E02 Rik，简称Rik）重组腺病毒载体，制备一定滴度含Rik基因的重组腺病毒，为后续研究Rik的生物学功能提供实验工具。方法①应用分子克隆技术以Rik的cDNA为模板，PCR扩增，酶切。将酶切后的目的基因连接到腺病毒穿梭质粒GV315上，产生0610009E02Rik腺病毒表达载体，连接好的产物转化感受态大肠埃希菌进行克隆，对阳性克隆进行酶切鉴定并测序；②重组腺病毒穿梭质粒和辅助包装质粒pBHG在人胚胎肾293细胞中包装、扩增、纯化并测定病毒滴度；③将构建好的腺病毒感染原代肝细胞．Real．timePCR检测原代肝细胞内Rik的相对表达水平。结果①成功构建Rik重组腺病毒穿梭载体；②重组病毒经扩增、纯化，最终滴度测定约为2×10^10PFU／ml：③Real-timePCR检测过表达组肝细胞内Rik的表达量约为对照组的2440＋0．36倍（P〈0．05），差异有统计学意义。结论构建含Rik基因的腺病毒载体，在小鼠原代肝细胞内成功实现了Rik基因的表达上调，为后续开展有关Rik生物学功能及分子机制研究奠定基础。

竞争抑制0610009E02Rik长链非编码RNA重组腺病毒穿梭载体的构建与鉴定

目的 构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码RNA（lncRNA）的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病（HVOD）肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法 采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小鼠尾进行基因组DNA的提取,通过PCR扩增出0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠的1 000 bp基因序列,并连接入经BamHⅠ/Nhe Ⅰ双酶切后的腺病毒穿梭载体GV359;竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与辅助包装质粒pBHG共转染HEK293细胞,并对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒进行包装、扩增,采用氯化铯（CsCl）不连续密度梯度离心与连续密度梯度离心2个步骤对重组腺病毒进行浓缩纯化,并对重组腺病毒滴度进行测定;测定不同感染复数（MOI）竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35的感染效率,并采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blotting对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35与同步培养的对照肝细胞中竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段、Notch1 mRNA及0610009E02Rik lncRNA相对表达水平及其蛋白表达水平,并进行统计学分析.结果 ①经基因序列比对分析发现0610009E02Rik与Notch1的第34个外显子存在分子量为1 000 bp的重叠序列,依据0610009E02Rik与Notch1基因序列设计含BamH Ⅰ/Nhe Ⅰ酶切位点特异性引物,通过PCR扩增出片段长度为1 000 bp的0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠序列的竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段,DNA测序结果显示竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与理论预期序列构建成功.②将竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体转染HEK293细胞后第12天,约90％细胞出现细胞病变（CPE）,收集细胞获取病毒液.浓缩纯化病毒液经梯度稀释在感染HEK293细胞后第10天,于显微镜下观察稀释梯度1∶ （10～1010）均出现CPE,病毒滴度约为5.01×109 PFU/mL.③当竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒MOI为80,感染肝细胞株H2.35 48 h后感染效率高达95％.收集经竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染后肝细胞,通过RT-PCR检测竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段相对表达水平为同步培养肝细胞株H2.35对照的3.13±0.83倍,且差异有统计学意义（P=0.047）;Notch1 mRNA相对表达水平为对照细胞的（0.38±0.08）倍,且差异亦有统计学意义（P=0.010）;0610009E02Rik lncRNA相对表达水平为对照细胞的（1.04±0.26）倍,但差异无统计学意义（P＞0.05）.经Western blotting检测发现,重组腺病毒感染后肝细胞Notch1蛋白表达水平较对照肝细胞减低,与Notch1 mRNA相对表达水平检测结果相一致.结论 成功构建竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体,重组腺病毒感染肝细胞H2.35后,可下调肝细胞内Notch1 mRNA表达水平及其蛋白表达水平,这为HVOD肝细胞损伤修复的深层机制研究奠定实验数据基础.

肝细胞Notch1基因敲除小鼠模型的建立

目的繁育和鉴定Notch 1基因敲除小鼠。方法用B6.Notch 1flox/flox和B6.Alb-Cre转基因小鼠进行饲养和杂交;将繁育出的第1代小鼠再进行相互交配,得到第2代小鼠。通过PCR鉴定出基因型为B6.Notch 1flox/flox.Alb-Cre的第2代小鼠。采用Western blot法检测Notch 1蛋白在肝脏中有无表达。结果两种转基因小鼠繁殖产生的第2代小鼠基因型符合孟德尔遗传定律,可通过该方法获得较多的B6.Notch 1flox/flox.Alb-Cre小鼠。该基因型小鼠肝脏中不表达Notch 1蛋白。结论应用Cre-loxp系统可以成功地敲除小鼠Notch 1基因。

"薛绒花" 盛开百姓心头

“永远感党恩、跟党走!我们要发展壮大队伍,带动更多人参与进来!”在枣庄市薛城区新时代文明实践中心,主任吴娜正对“舞前十分钟·文明讲场”志愿服务骨干宣传员进行培训。当前,薛城区正全面擦亮“舞前十分钟·文明讲场”宣讲品牌,依托一支支扎根基层、贴近群众的宣讲队伍,用百姓喜闻乐见的形式推动党的理论政策“飞入寻常百姓家”。