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新城疫C3d-P29分子佐剂F基因疫苗的构建
被引量:
5
1
作者
褚新星
彭军
+2 位作者
翁立雪
朱瑞良
牛钟相
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期234-238,共5页
C3d是补体C3的裂解产物之一,与抗原相连时可以明显提高抗原分子的免疫原性。CR2/CD21在其功能发挥过程中起到重要作用,P29为编码C3d与CR2结合区域的基因。从健康AA肉鸡肝脏中RT-PCR克隆C3d CDNA,设计引物克隆P29至pUC19载体,利用同裂酶B...
C3d是补体C3的裂解产物之一,与抗原相连时可以明显提高抗原分子的免疫原性。CR2/CD21在其功能发挥过程中起到重要作用,P29为编码C3d与CR2结合区域的基因。从健康AA肉鸡肝脏中RT-PCR克隆C3d CDNA,设计引物克隆P29至pUC19载体,利用同裂酶BamHⅠ和BglⅡ构建pUC-P29.n。酶切获得P29.n,将其克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)。最后RT-PCR扩增新城疫F基因,定向克隆至真核表达载体pCDNA-P29.n中P29.n的上游,构建完成新城疫F基因疫苗。3周龄SPF鸡进行基因免疫,结果pCDNA-F-P29.4、pCDNA-F-P29.6较pCDNA-F都能够提高HI抗体水平及保护力,虽然HI抗体水平不及灭活苗,但是能够抵抗致死量病毒的攻击,并且pCDNA-F-P29.6效果更好。目前发表的关于C3d的佐剂作用的文章多是关于鼠C3d,相应的抗原不能够自然感染鼠类,关于鸡C3d的报道较少。研究结果为进一步开发和利用鸡C3d奠定了基础。
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关键词
鸡C3d
pUC—P29n
HI
F基因疫苗
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职称材料
AA肉鸡补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
2
作者
褚新星
翁立雪
+2 位作者
彭军
牛钟相
姜世金
《山东农业大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008年第4期549-552,共4页
为获得鸡C3d基因的cDNA,从鸡肝细胞提取总RNA,通过RT-PCR扩增出C3d基因的cDNA,脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。通过琼脂糖凝胶电泳证明有1.0 kb左右的PCR扩增...
为获得鸡C3d基因的cDNA,从鸡肝细胞提取总RNA,通过RT-PCR扩增出C3d基因的cDNA,脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。通过琼脂糖凝胶电泳证明有1.0 kb左右的PCR扩增片段,序列测定表明为C3d基因的cDNA。通过RT-PCR法从鸡肝细胞RNA中成功地扩增到鸡C3d基因的cDNA,为进一步构建基于C3d基因内佐剂的疫苗奠定了基础。
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关键词
AA肉鸡C3d
RT—PCR
基因克隆
序列分析
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职称材料
己烯雌酚酶联免疫检测方法的建立
被引量:
11
3
作者
邴爱英
成连贵
+1 位作者
褚新星
牛钟相
《西南农业学报》
CSCD
2006年第6期1159-1161,共3页
建立灵敏度高和特异性强的己烯雌酚残留检测分析方法。用人工合成的己烯雌酚免疫原多次免疫家兔,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记,可同辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体。...
建立灵敏度高和特异性强的己烯雌酚残留检测分析方法。用人工合成的己烯雌酚免疫原多次免疫家兔,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记,可同辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体。加入不同浓度的己烯雌酚标准品后,再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法检测灵敏度为0.125ng/mL,可定量检测范围为0.25~15.60ng/mL。该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足实践中一般样品的残留检测。
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关键词
己烯雌酚
酶联免疫分析
生物素-亲和素
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职称材料
酸奶中快速分离嗜热链球菌的新方法
4
作者
聂玉霞
肖连明
褚新星
《山东畜牧兽医》
2008年第1期13-13,共1页
本文研究了从酸奶中快速分离嗜热链球菌的新方法。新方法具有高效、经济、快速的特点。同时采用新方法对市售酸奶进行了菌体计数,结果显示市售某品牌酸奶的乳酸菌在108cfu/ml左右。
关键词
分离
快速
嗜热链球菌
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职称材料
融合蛋白C3d提高新城疫灭活苗的免疫原性
5
作者
李艳梅
褚新星
+2 位作者
吴春涛
聂玉霞
肖连明
《西南农业学报》
CSCD
2008年第4期1126-1130,共5页
补体C3d是补体系统(complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。本试验利用RT-PCR技术从AA肉鸡肝脏总RNA中扩增C3d cDNA,测序证实为C3d基因。然后将其连接至表达载体pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3),1%IPTG诱导表达。SDS-PAGE、West...
补体C3d是补体系统(complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。本试验利用RT-PCR技术从AA肉鸡肝脏总RNA中扩增C3d cDNA,测序证实为C3d基因。然后将其连接至表达载体pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3),1%IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blotting证实目的蛋白为C3d。亲和层析分离C3d融合蛋白,与纯化新城疫病毒(Lasota株)经戊二醛连接后免疫SPF鸡。血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体水平,MTT法检测胸腺T淋巴细胞转化率。结果表明C3d融合蛋白能够提高特异性抗体水平以及细胞免疫水平,本研究为进一步研究、利用鸡补体C3d奠定了基础。
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关键词
C3D
RT—PCR
亲和层析
MTT
血凝抑制试验
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职称材料
题名
新城疫C3d-P29分子佐剂F基因疫苗的构建
被引量:
5
1
作者
褚新星
彭军
翁立雪
朱瑞良
牛钟相
机构
山东农业大学动物科技学院
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期234-238,共5页
基金
山东省财政支持项目(SDGP2004-54-O)~~
文摘
C3d是补体C3的裂解产物之一,与抗原相连时可以明显提高抗原分子的免疫原性。CR2/CD21在其功能发挥过程中起到重要作用,P29为编码C3d与CR2结合区域的基因。从健康AA肉鸡肝脏中RT-PCR克隆C3d CDNA,设计引物克隆P29至pUC19载体,利用同裂酶BamHⅠ和BglⅡ构建pUC-P29.n。酶切获得P29.n,将其克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)。最后RT-PCR扩增新城疫F基因,定向克隆至真核表达载体pCDNA-P29.n中P29.n的上游,构建完成新城疫F基因疫苗。3周龄SPF鸡进行基因免疫,结果pCDNA-F-P29.4、pCDNA-F-P29.6较pCDNA-F都能够提高HI抗体水平及保护力,虽然HI抗体水平不及灭活苗,但是能够抵抗致死量病毒的攻击,并且pCDNA-F-P29.6效果更好。目前发表的关于C3d的佐剂作用的文章多是关于鼠C3d,相应的抗原不能够自然感染鼠类,关于鸡C3d的报道较少。研究结果为进一步开发和利用鸡C3d奠定了基础。
关键词
鸡C3d
pUC—P29n
HI
F基因疫苗
Keywords
C3d pUC- P29.n
HI
F DNA Vaccine
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
AA肉鸡补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
2
作者
褚新星
翁立雪
彭军
牛钟相
姜世金
机构
山东农业大学动物科技学院
出处
《山东农业大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008年第4期549-552,共4页
基金
山东省财政支持项目(SDGP2004-54-O)
文摘
为获得鸡C3d基因的cDNA,从鸡肝细胞提取总RNA,通过RT-PCR扩增出C3d基因的cDNA,脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。通过琼脂糖凝胶电泳证明有1.0 kb左右的PCR扩增片段,序列测定表明为C3d基因的cDNA。通过RT-PCR法从鸡肝细胞RNA中成功地扩增到鸡C3d基因的cDNA,为进一步构建基于C3d基因内佐剂的疫苗奠定了基础。
关键词
AA肉鸡C3d
RT—PCR
基因克隆
序列分析
Keywords
AA Chickens C3d
polymerase chain reaction (RT- PCR)
genecloning
sequencing
分类号
S832 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
己烯雌酚酶联免疫检测方法的建立
被引量:
11
3
作者
邴爱英
成连贵
褚新星
牛钟相
机构
山东农业大学动物科技学院
滨州职业学院生物工程系
出处
《西南农业学报》
CSCD
2006年第6期1159-1161,共3页
基金
山东省财政支持项目(SDGP2004-54-0)
文摘
建立灵敏度高和特异性强的己烯雌酚残留检测分析方法。用人工合成的己烯雌酚免疫原多次免疫家兔,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记,可同辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体。加入不同浓度的己烯雌酚标准品后,再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法检测灵敏度为0.125ng/mL,可定量检测范围为0.25~15.60ng/mL。该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足实践中一般样品的残留检测。
关键词
己烯雌酚
酶联免疫分析
生物素-亲和素
Keywords
diethylstilbestrol
ELISA
biotin-avidin
分类号
S816.73 [农业科学—饲料科学]
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职称材料
题名
酸奶中快速分离嗜热链球菌的新方法
4
作者
聂玉霞
肖连明
褚新星
机构
山东省蚕业研究所
山东农业大学动物科技学院
出处
《山东畜牧兽医》
2008年第1期13-13,共1页
文摘
本文研究了从酸奶中快速分离嗜热链球菌的新方法。新方法具有高效、经济、快速的特点。同时采用新方法对市售酸奶进行了菌体计数,结果显示市售某品牌酸奶的乳酸菌在108cfu/ml左右。
关键词
分离
快速
嗜热链球菌
分类号
S855.11 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
融合蛋白C3d提高新城疫灭活苗的免疫原性
5
作者
李艳梅
褚新星
吴春涛
聂玉霞
肖连明
机构
东营职业学院
山东农业大学动物科技学院
山东省蚕业研究所
出处
《西南农业学报》
CSCD
2008年第4期1126-1130,共5页
文摘
补体C3d是补体系统(complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。本试验利用RT-PCR技术从AA肉鸡肝脏总RNA中扩增C3d cDNA,测序证实为C3d基因。然后将其连接至表达载体pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3),1%IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blotting证实目的蛋白为C3d。亲和层析分离C3d融合蛋白,与纯化新城疫病毒(Lasota株)经戊二醛连接后免疫SPF鸡。血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体水平,MTT法检测胸腺T淋巴细胞转化率。结果表明C3d融合蛋白能够提高特异性抗体水平以及细胞免疫水平,本研究为进一步研究、利用鸡补体C3d奠定了基础。
关键词
C3D
RT—PCR
亲和层析
MTT
血凝抑制试验
Keywords
C3d
RT-PCR
affinity chromatography
MTT
HI
分类号
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新城疫C3d-P29分子佐剂F基因疫苗的构建
褚新星
彭军
翁立雪
朱瑞良
牛钟相
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
下载PDF
职称材料
2
AA肉鸡补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
褚新星
翁立雪
彭军
牛钟相
姜世金
《山东农业大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
3
己烯雌酚酶联免疫检测方法的建立
邴爱英
成连贵
褚新星
牛钟相
《西南农业学报》
CSCD
2006
11
下载PDF
职称材料
4
酸奶中快速分离嗜热链球菌的新方法
聂玉霞
肖连明
褚新星
《山东畜牧兽医》
2008
0
下载PDF
职称材料
5
融合蛋白C3d提高新城疫灭活苗的免疫原性
李艳梅
褚新星
吴春涛
聂玉霞
肖连明
《西南农业学报》
CSCD
2008
0
下载PDF
职称材料
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