南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对胃癌细胞BGC-823增殖和凋亡的作用

目的探讨南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响,以期为进一步开发南蛇藤多萜成为抗肿瘤药物奠定更加坚实的理论和实验基础。方法实验分为空白组,南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物组(28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid, 10、20、40、80、160μmol·L;)。细胞计数试剂盒(cell count kit, CCK-8)检测南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞增殖能力的影响,并确定南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物的用药浓度,高内涵成像进一步观察南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物的对BGC-823细胞分裂增殖能力的影响,线粒体膜电位检测试剂盒检测南蛇藤提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞线粒体膜电位水平的影响,磷脂酰丝氨酸蛋白抗体-异硫氰基荧光素/碘化丙啶(Annexin V-fluoresceine isothiocyanate/Propidium Iodide, Annexin V-FITC/PI)法检测南蛇藤提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞凋亡的影响,免疫印迹法(Western Blot)检测南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物对BGC-823细胞相关凋亡蛋白的表达水平。结果与空白组比较,随着南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物用药浓度的升高,BGC-823细胞增殖分裂能力逐渐降低(P<0.01),根据CCK-8实验结果计算出半抑制浓度(IC_(50)),筛选出新的南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物组(28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid, 40、80、160μmol·L^(-1))。该三萜化合物还能够使线粒体膜电位水平下降,诱导细胞凋亡(P<0.05),同时抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达(P<0.01),促进Bcl-2相关X蛋白(BCL2-Associated X, Bax)和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)蛋白表达(P<0.01)。结论南蛇藤茎提取物齐墩果烷型三萜化合物能够抑制胃癌BGC-823细胞分裂和增殖,诱导细胞凋亡,该过程可能与降低线粒体膜电位水平,同时下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。

茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制

目的:探讨茯苓中的三萜类化合物茯苓酸(PA),对肾癌侵袭转移的作用及机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)试剂盒检测PA(0、20、40、80、160μmol·L^(-1))对细胞存活率的影响,并筛选PA浓度用于后续实验。采用克隆形成实验评估PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞增殖的作用。细胞黏附实验用来观察PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞黏附能力的效果。划痕实验和Transwell侵袭实验用来检测PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞侵袭转移的影响。高内涵成像技术进一步动态观察和验证PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞运动的抑制作用。PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞中侵袭转移相关蛋白基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子(MMP/TIMP)和相关通路关键蛋白Smads表达的影响通过蛋白免疫印迹法(Western blot)来检测。结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,PA组细胞存活率显著降低(P<0.01),24 h时PA对ACHN细胞的半数抑制浓度(IC50)为70.42μmol·L^(-1)。克隆形成实验显示,与空白组比较,PA组细胞克隆群数目显著减少(P<0.01)。细胞黏附实验显示,与空白组比较,PA组细胞的黏附数量显著减少(P<0.01)。划痕实验表明,与空白组比较,PA组细胞的划痕愈合率降低(P<0.05,P<0.01)。Transwell侵袭实验显示,与空白组比较,PA组细胞的穿膜数量减少(P<0.01)。高内涵成像技术表明,与空白组比较,PA组细胞累计迁移距离更短(P<0.01)。Western blot结果表明,与空白组比较,PA组MMP-2、MMP-9蛋白的表达降低(P<0.01),TIMP-1蛋白的表达升高(P<0.01)。此外,与空白组比较,PA组Smad2、Smad3蛋白的表达降低(P<0.01)。结论:PA可抑制肾癌细胞的增殖、侵袭转移,其机制可能是通过Smad2/3调控MMP/TIMP的稳态平衡。

南蛇藤提取物通过破坏线粒体结构促进胃癌AGS细胞凋亡的机制

目的观察南蛇藤提取物(COE)对胃癌细胞的抑制作用,探讨COE通过影响线粒体结构和功能促进胃癌凋亡的一种全新的作用机制,为南蛇藤的进一步开发和临床应用提供实验依据。方法5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)染色联合流式细胞实验用来检测不同质量浓度COE(20、40、80 mg·L^(-1))对胃癌细胞增殖的影响。通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)染色实验联合流式细胞术检测COE对胃癌细胞凋亡的影响,用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对胃癌细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,用透射电镜检测COE处理后的胃癌细胞线粒体微观结构的变化,包括线粒体膜完整性和内部嵴的变化。COE处理后,Western blot检测胃癌细胞线粒体标志蛋白超氧化物歧化酶1(SOD1)、电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)、抗增殖蛋白1(PHB1)和热休克蛋白60(HSP60)水平的变化。结果Brdu染色显示,与空白组比较,COE组(40、80 mg·L^(-1))胃癌细胞的增殖比例明显下降(P<0.05)。AnnexinV-FITC染色显示,与空白组比较,COE组(40、80 mg·L^(-1))胃癌细胞的凋亡数量明显增加(P<0.05)。JC-1线粒体膜电位检测显示,COE处理后组胃癌细胞的线粒体膜电位水平明显降低。Western blot结果显示,与空白组比较,COE组(20、40、80 mg·L^(-1))促进胃癌凋亡的相关蛋白Bax和Caspase-3表达明显增加(P<0.05,P<0.01),COE组(40、80 mg·L^(-1))胃癌细胞凋亡抵抗相关蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达显著降低(P<0.01)。透射电镜结果显示,与空白组比较,COE组胃癌细胞的微观结构发生了明显变化,细胞膜内出现了很多空泡,线粒体结构出现破坏,线粒体内出现空泡。Western blot结果显示,与空白组比较,COE组(20、40、80 mg·L^(-1))胃癌细胞中与应激反应有关的蛋白SOD1表达增高(P<0.05,P<0.01),COE组(80 mg·L^(-1))与线粒体稳定和通透性相关的蛋白VDAC、PHB1和HSP60表达均显著下降(P<0.01)。结论COE能够显著抑制胃癌细胞的增殖,促进胃癌细胞的凋亡,其机制可能与COE破坏胃癌细胞线粒体结构和功能从而激活细胞线粒体凋亡途径有关。

中医药治疗胃癌淋巴转移的研究进展

胃癌的发病率和死亡率在所有肿瘤中均较高,我国因为胃癌死亡的人数每年高达49.8万人。由于早期胃癌的发病特征不明显,多数到医院治疗的患者均已是中晚期胃癌,给家庭和社会都带来了沉重的负担。中晚期胃癌的术后生存期显著低于早期胃癌,其中最重要的原因在于胃癌的淋巴转移。淋巴转移是胃癌的主要转移途径,进展期胃癌的淋巴转移率高达70%左右,早期胃癌也可有淋巴转移。胃癌的淋巴结转移率和癌灶的浸润深度呈正相关。目前的治疗手段除手术切除、淋巴化疗及分子靶向治疗外,中医药因其中毒性低、治疗效果好、价格低的优势也发挥了重要的作用。中医认为胃癌的发生多因饮食不洁、情志失调、素体亏虚而致痰凝、气阻、血瘀与胃发为本病,病机总属本虚标实,临床中医治疗多以化痰解毒、健脾益气、温中散寒为主。近年来,多项研究证明中医药治疗胃癌淋巴转移在临床中疗效显著、作用广泛,其可能通过抑制基质金属蛋白酶对基底膜和细胞外基质(ECM)的水解,激发肿瘤失巢凋亡,抑制淋巴管新生,调控与肿瘤相关基因的表达等途径来治疗胃癌淋巴转移。文章从近年来中医药在治疗胃癌淋巴转移中的理论研究、实验研究以及临床研究的进展进行综述,揭示中药作用的机制及其作用靶点,以期为中医药治疗胃癌淋巴转移的深入研究以及临床上的应用提供科学依据。

南蛇藤及其有效成分抗胃癌作用机制的研究进展

随着中医药抗肿瘤研究的深入,越来越多的中药被发现并证实具有很好的抗肿瘤效果。其中南蛇藤及其有效成分抗肿瘤的研究已近20年,许多研究已经证实南蛇藤及其有效成分具有很好的抗胃癌活性。已经被分离和证实具有抗肿瘤活性的成分包括萜类化合物、脂肪类化合物和苷类化合物等,其中萜类化合物的抗肿瘤活性最强。南蛇藤及其有效成分抗胃癌的主要作用为抑制胃癌细胞的增殖、诱导胃癌细胞凋亡、抑制胃癌细胞侵袭转移和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)、抑制胃癌血管生成和逆转胃癌多药耐药等。这些研究结果对深入挖掘南蛇藤抗胃癌活性成分和分子机制具有非常重要意义。从南蛇藤抗胃癌的有效成分及其南蛇藤抗胃癌的作用机制研究2个方面对南蛇藤抗胃癌的相关研究进行综述,为今后南蛇藤的进一步开发和利用提供参考。