人源化抗Siglec-9抗体Fab片段的制备及鉴定

目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体p ETDUET-1重组,转入表达感受态Escherichia coli BL21中,通过蛋白纯化系统AKTA和His-trap Lambda Fab纯化。使用SDS-PAGE、ELISA以及Western blot鉴定和分析。采用实时荧光定量PCR初步检测抗Siglec-9抗体Fab段对炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量的影响。结果:成功获得抗体轻链和重链,构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达系统,经SDS-PAGE、Western blot、ELISA检测证实抗Siglec-9抗体Fab段与Siglec-9抗原特异性结合。抗Siglec-9抗体Fab段可抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量。结论:人源化抗Siglec-9抗体Fab段进行了原核系统表达、纯化和鉴定,并初步验证可抑制炎性细胞因子的mRNA表达量,为进一步研究该抗体的生物学特性及应用奠定基础。

抗Siglec-9抗体Fab段对LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应的作用研究

目的初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段在小鼠巨噬细胞上对LPS诱导的炎症反应的作用及其机制。方法将小鼠巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+Ab组、Ab组,采用实时荧光定量PCR技术检测TNF-α、IFN-β、IL-1、IL-6等炎性细胞因子的mRNA水平;采用ELISA检测炎性细胞因子的蛋白水平;通过Western blot初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段影响炎性细胞因子表达量的作用机制。结果与LPS组相比,抗Siglec-9抗体Fab段抑制炎性细胞因子的mRNA和蛋白水平,降低TLR4信号通路磷酸化水平。结论抗Siglec-9抗体Fab段通过阻断TLR4信号传导通路抑制炎性细胞因子的m RNA和蛋白水平,在感染性疾病中具有潜在的应用价值。

替诺福韦治疗慢性乙型肝炎出现皮疹、皮肤瘙痒1例

患者男性,50岁。于2007年体检发现HBsAg（＋）,肝功能正常,平素无自觉不适,未定期随访及诊治。2012年因乏力至当地医院查肝功能异常ALT88 U/L,AST61 U/L,HBV DNA6.0×10^7 IU/mL,始用拉米夫定抗病毒治疗,3个月后查HBV DNA〈50 IU/mL,病情一直稳定。2016年11月出现肝区隐痛不适,至当地医院就诊,查HBV DNA2.09×10^4 IU/mL.

艾米替诺福韦治疗65岁以上慢性乙型肝炎及肝硬化患者的有效性及安全性

目的探讨艾米替诺福韦(TMF)在治疗65岁以上慢性乙型肝炎及肝硬化患者中的有效性及安全性。方法纳入临沂市人民医院45例慢性乙型肝炎及肝硬化患者,TMF治疗48周比较治疗第12、24、48周时病毒学应答率、HBV DNA较基线下降水平,治疗前后乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肾小球滤过率(eGFR)、肌酐、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及血磷、血脂的变化及48周时ALT复常率变化。以P<0.05表示差异具有统计学意义。结果入组患者年龄为69.0(67.0,72.5)岁。TMF治疗12、24、48周的完全病毒学应答率为32.4%(12/37)、70.0%(28/40)、84.6%(33/39),HBV DNA较基线有明显下降(P值均<0.05)。治疗48周后HBsAg水平下降(P<0.05),未出现HBsAg转阴及血清转换患者。治疗48周后ALT水平下降(P<0.05)。治疗48周时ALT复常率分别为88.9%(16/18)、70.4%(19/27)。基线与治疗48周后的eGFR、肌酐、磷、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平差异无统计学意义(P值均>0.05),暂未观察到严重不良反应事件发生。结论对于65岁以上慢性乙型肝炎及肝硬化患者,TMF可显著抑制HBV DNA复制,且ALT复常率高、耐受性好。

唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素9:调节中性粒细胞凋亡的一种新型分子

唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(Siglec)是免疫受体超家族中的主要成员,表达于各类免疫细胞,能够识别特定的唾液酸。中性粒细胞作为重要的天然免疫细胞,参与早期炎症反应的发生、发展,细胞凋亡在调节中性粒细胞数量的过程中发挥着关键作用。本文就Siglec-9在调节中性粒细胞的招募、凋亡,影响其炎症应答,促进细胞自噬以及Siglec-9在中性粒细胞引起临床疾病方面的研究进展作一综述。

Siglecs家族在脓毒症中的研究进展

Siglecs家族是表达于免疫细胞表面的跨膜受体,在感染性疾病中发挥调节免疫平衡的作用。脓毒症是炎症诱导的器官功能障碍,其发病机理包括免疫调节紊乱、炎症反应以及凝血功能障碍等。本文主要就Siglecs家族在脓毒症发病机理中的作用进行综述。Siglec-1、Siglec-5和Siglec-14通过启动炎症反应和免疫反应发挥双向效应。Siglec-2通过调节B细胞和T细胞在脓毒症中调节免疫平衡。Siglec-9通过Toll样受体4(TLR4)的内吞作用调节巨噬细胞的极化现象,进而抑制中性粒细胞的作用。Siglec-10抑制危险相关分子模式(DAMP),帮助T细胞启动抗原抗体反应,减少B细胞数量从而减弱炎症反应。Siglecs在脓毒症不同阶段的功能具有潜在治疗意义。

生物活性透明质酸对脂多糖诱导的人树突状细胞和巨噬细胞炎症应答作用

目的探讨经人透明质酸酶PH20特异处理的重组HA,即生物活性透明质酸(B-HA)对脂多糖(LPS)诱导的人树突状细胞(DC)和巨噬细胞炎症应答的影响。方法 DC细胞和人急性单核细胞白血病单核细胞株(THP-1)经不同浓度的B-HA预先处理,加入LPS刺激不同时间,收集细胞和培养上清,采用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测细胞因子mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 THP-1细胞实验中,与LPS组相比,B-HA 20 mg/ml不仅能够显著降低促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的表达量,同时能够显著增加抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)的表达量。其细胞中TNF-α、IL-8和IL-10 mRNA表达水平分别为24.41±1.94、35.76±4.19和14.99±0.07,而LPS组分别为38.48±1.47、62.7±1.93和2.27±0.16,差异均具有统计学意义(t=5.781、P=0.0290,t=5.695,P=0.0300,t=15.20、P=0.0040)。细胞上清中三者蛋白表达水平分别为(1 609.00±75.66)pg/ml、(213.10±9.14)pg/ml和(496.3±41.92)pg/ml,LPS组分别为(3 018±102.8)pg/ml、(587.4±3.140)pg/ml和(243.3±20.23)pg/ml,差异均具有统计学意义(t=11.04、P=0.0080,t=38.74、P=0.0007,t=5.434、P=0.0320)。在人外周血分化的DC细胞实验中,B-HA对细胞因子TNF-α、IL-8和IL-10的表达均无显著影响(P均>0.05)。结论 B-HA能有效调节人巨噬细胞炎性因子的表达,抑制其炎症反应;对人DC细胞的炎症反应无显著影响,提示B-HA对人炎性免疫细胞的炎症反应作用具有选择性。