牛妊娠相关糖蛋白20真核表达及其结构与功能预测

旨在真核表达牛妊娠相关糖蛋白20(bovine pregnancy associated glycoproteins 20,BoPAG20),并对蛋白质结构与功能进行预测。参考GenBank中BoPAG20基因密码子进行优化并合成,构建真核表达载体pcMV3-BoPAG20,转染至293F细胞中进行瞬时表达。SDS-PAGE和Western blot检测表达效果,Ni^(2+)亲和磁珠纯化蛋白,用纯化后的蛋白免疫小鼠验证免疫原性,并对BoPAG20结构与功能进行预测分析。结果:优化后的BoPAG20基因长度为1143 bp,编码380个氨基酸残基,密码子适用指数(CAI)由原来的0.77提高到0.96,GC含量由48.91%提高到55.29%;成功构建了pcMV3-BoPAG20真核表达载体,转染至293F细胞中成功表达,获得BoPAG20蛋白相对分子量约为58 kDa;纯化后BoPAG20蛋白免疫小鼠,34 d后测定血清效价达到1∶10^(5);BoPAG20蛋白无跨膜螺旋区,为分泌性蛋白,信号肽是N端15个氨基酸,存在6个糖基化位点(Ser^(36)、Ser^(56)、Ser^(57)、Ser^(76)、Ser^(80)、Thr^(115))和8个B细胞抗原表位,二级结构由α-螺旋(18.68%)、无规则卷曲(45%)和延伸链(30.79%),无β-转角;与BoPAG20互作蛋白包括β-淀粉样蛋白(APP)和β-淀粉样前体样蛋白2(APLP2)。本研究成功表达并纯化出BoPAG20蛋白,证实其具有良好的免疫原性,并进行了结构和功能预测,为该蛋白的结构和功能研究奠定基础。