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Let-7a负性调控肺癌A549细胞中NIRF基因的表达
被引量:
2
1
作者
何晓燕
陈俊霞
+2 位作者
褚颖豪
张政
彭惠民
《第四军医大学学报》
北大核心
2009年第23期2702-2706,共5页
目的:探讨肺癌A549细胞中let-7a对其靶基因NIRF表达的调控作用.方法:运用生物信息学方法对let-7a进行靶基因预测并分析其靶基因NIRF;构建含有NIRF 3′UTR全长的荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR;将pRL-TK或pRL-TK-NIRF 3′UTR与pGL3-...
目的:探讨肺癌A549细胞中let-7a对其靶基因NIRF表达的调控作用.方法:运用生物信息学方法对let-7a进行靶基因预测并分析其靶基因NIRF;构建含有NIRF 3′UTR全长的荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR;将pRL-TK或pRL-TK-NIRF 3′UTR与pGL3-control,及let-7a mimics或control mimics共转染A549细胞,双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定转染后A549细胞中荧光素酶的表达;A549细胞分别转染let-7a mimics和control mimics,Western Blot检测NIRF蛋白的表达.结果:NIRF3′UTR含有一个let-7a结合位点,而且该结合位点在多个物种高度保守;经测序证实荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR构建成功;共转染let-7amimics,pRL-TK-NIRF3′UTR与pGL3-control的A549细胞组,荧光素酶活性明显降低(P<0.01),为对照组(共转染pRL-TK与pGL3-control的A549细胞组)的50%;Western Blot检测显示,与未转染的A549细胞相比,转染let-7a mimics的A549细胞中NIRF蛋白的表达显著降低(P<0.01),而转染control mimics的A549细胞中NIRF表达无明显变化(P>0.05).结论:肺癌A549细胞中,let-7a可以结合到NIRF 3′UTR,负性调控NIRF的表达.
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关键词
微RNA
let-7a
肺癌
NIRF
基因表达
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职称材料
重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒的构建及表达
被引量:
1
2
作者
褚颖豪
欧阳溪
+3 位作者
何晓燕
陈俊霞
高娟
朱军
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010年第8期834-838,共5页
目的构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor,RI)基因的重组腺相关病毒,并在膀胱癌细胞T24中表达。方法 Trizol法提取人脐静脉内皮细胞ECV30总RNA,经RT-PCR扩增RI基因,克隆至pUCm-T质粒中,再亚克隆至pAAV-IRES-hrGFP...
目的构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor,RI)基因的重组腺相关病毒,并在膀胱癌细胞T24中表达。方法 Trizol法提取人脐静脉内皮细胞ECV30总RNA,经RT-PCR扩增RI基因,克隆至pUCm-T质粒中,再亚克隆至pAAV-IRES-hrGFP载体,构建pAAV-IRES-hrGFP-RI重组质粒,与pAAV-RC和pAAV-Helper质粒共转染HEK293细胞,包装并扩增腺相关病毒RI-AAV,检测其感染性滴度,并转染T24细胞,采用RT-PCR检测RI基因mRNA的转录水平,Westernblot检测RI蛋白的表达水平。结果重组质粒pAAV-IRES-hrGFP-RI经酶切及测序鉴定构建正确;重组腺相关病毒RI-AAV的感染性滴度为1.1×1010U/ml;RI-AAV转染的T24细胞RI基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平较未转染组及空病毒转染组均显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建人RI基因重组腺相关病毒,为进一步研究RI对膀胱癌细胞的侵袭和转移的作用奠定了基础。
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关键词
核糖核酸酶抑制因子
腺相关病毒
膀胱肿瘤
原文传递
RI基因siRNA干扰质粒的构建及其对人膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响
被引量:
7
3
作者
欧阳溪
陈俊霞
+2 位作者
何晓燕
褚颖豪
夏俊
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2009年第5期431-437,共7页
目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通...
目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测干扰的有效性。光镜及HE染色观察细胞形态的改变,黏附试验、划痕试验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝结构。结果酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性siRNA表达载体的BIU-87细胞RI蛋白的表达水平明显降低,对照组未发生明显改变;转染干扰质粒的细胞堆叠严重,细胞黏附能力显著降低,迁移和侵袭能力显著提高,细胞骨架微丝聚集,伸展出片状伪足。结论已成功构建RI基因siRNA干扰质粒,其可显著提高膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力,说明RI可作为抑制肿瘤迁移和侵袭的有效靶点。
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关键词
核糖核酸酶抑制因子
RNA干扰
膀胱癌细胞
迁移
侵袭
原文传递
题名
Let-7a负性调控肺癌A549细胞中NIRF基因的表达
被引量:
2
1
作者
何晓燕
陈俊霞
褚颖豪
张政
彭惠民
机构
重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室
重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心
出处
《第四军医大学学报》
北大核心
2009年第23期2702-2706,共5页
基金
国家自然科学基金(30800534)
文摘
目的:探讨肺癌A549细胞中let-7a对其靶基因NIRF表达的调控作用.方法:运用生物信息学方法对let-7a进行靶基因预测并分析其靶基因NIRF;构建含有NIRF 3′UTR全长的荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR;将pRL-TK或pRL-TK-NIRF 3′UTR与pGL3-control,及let-7a mimics或control mimics共转染A549细胞,双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定转染后A549细胞中荧光素酶的表达;A549细胞分别转染let-7a mimics和control mimics,Western Blot检测NIRF蛋白的表达.结果:NIRF3′UTR含有一个let-7a结合位点,而且该结合位点在多个物种高度保守;经测序证实荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR构建成功;共转染let-7amimics,pRL-TK-NIRF3′UTR与pGL3-control的A549细胞组,荧光素酶活性明显降低(P<0.01),为对照组(共转染pRL-TK与pGL3-control的A549细胞组)的50%;Western Blot检测显示,与未转染的A549细胞相比,转染let-7a mimics的A549细胞中NIRF蛋白的表达显著降低(P<0.01),而转染control mimics的A549细胞中NIRF表达无明显变化(P>0.05).结论:肺癌A549细胞中,let-7a可以结合到NIRF 3′UTR,负性调控NIRF的表达.
关键词
微RNA
let-7a
肺癌
NIRF
基因表达
Keywords
microRNA
let-7a
lung cancer
NIRF
gene expression
分类号
R73-3 [医药卫生—肿瘤]
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒的构建及表达
被引量:
1
2
作者
褚颖豪
欧阳溪
何晓燕
陈俊霞
高娟
朱军
机构
重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室
重庆医科大学分子医学肿瘤中心
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010年第8期834-838,共5页
基金
重庆市自然科学基金面上项目(CSTC2006bb5287
CSTC2009BB5273)
重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ060313)
文摘
目的构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor,RI)基因的重组腺相关病毒,并在膀胱癌细胞T24中表达。方法 Trizol法提取人脐静脉内皮细胞ECV30总RNA,经RT-PCR扩增RI基因,克隆至pUCm-T质粒中,再亚克隆至pAAV-IRES-hrGFP载体,构建pAAV-IRES-hrGFP-RI重组质粒,与pAAV-RC和pAAV-Helper质粒共转染HEK293细胞,包装并扩增腺相关病毒RI-AAV,检测其感染性滴度,并转染T24细胞,采用RT-PCR检测RI基因mRNA的转录水平,Westernblot检测RI蛋白的表达水平。结果重组质粒pAAV-IRES-hrGFP-RI经酶切及测序鉴定构建正确;重组腺相关病毒RI-AAV的感染性滴度为1.1×1010U/ml;RI-AAV转染的T24细胞RI基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平较未转染组及空病毒转染组均显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建人RI基因重组腺相关病毒,为进一步研究RI对膀胱癌细胞的侵袭和转移的作用奠定了基础。
关键词
核糖核酸酶抑制因子
腺相关病毒
膀胱肿瘤
Keywords
Ribonuclease inhibitor(RI)
Adeno-associated virus
Bladder tumor
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
RI基因siRNA干扰质粒的构建及其对人膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响
被引量:
7
3
作者
欧阳溪
陈俊霞
何晓燕
褚颖豪
夏俊
机构
重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室
蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2009年第5期431-437,共7页
基金
重庆市科委自然科学基金面上项目(CSTC
2006BB5287)
+1 种基金
重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ060313)
重庆医科大学启动基金(0200100412)
文摘
目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测干扰的有效性。光镜及HE染色观察细胞形态的改变,黏附试验、划痕试验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝结构。结果酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性siRNA表达载体的BIU-87细胞RI蛋白的表达水平明显降低,对照组未发生明显改变;转染干扰质粒的细胞堆叠严重,细胞黏附能力显著降低,迁移和侵袭能力显著提高,细胞骨架微丝聚集,伸展出片状伪足。结论已成功构建RI基因siRNA干扰质粒,其可显著提高膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力,说明RI可作为抑制肿瘤迁移和侵袭的有效靶点。
关键词
核糖核酸酶抑制因子
RNA干扰
膀胱癌细胞
迁移
侵袭
Keywords
Ribonuclease inhibitor
RNA interference
Bladder cancer cells
Metastasis
Invasion
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
Q789 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Let-7a负性调控肺癌A549细胞中NIRF基因的表达
何晓燕
陈俊霞
褚颖豪
张政
彭惠民
《第四军医大学学报》
北大核心
2009
2
下载PDF
职称材料
2
重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒的构建及表达
褚颖豪
欧阳溪
何晓燕
陈俊霞
高娟
朱军
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010
1
原文传递
3
RI基因siRNA干扰质粒的构建及其对人膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响
欧阳溪
陈俊霞
何晓燕
褚颖豪
夏俊
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2009
7
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