香草酸通过诱导自噬缓解HepG2细胞脂肪变性

目的研究自噬在香草酸(VA)缓解肝细胞脂肪变性中的作用。方法将HepG2细胞分为空白组(不含药物的完全培养基)、阳性对照组(50 nmol·L^(-1)西罗莫司)和低、中、高剂量实验组(25,50,100μmol·L^(-1)VA),作用时间12 h。用蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3B(LC3Ⅱ)和泛素结合蛋白P62(P62)表达水平的变化,探究VA诱导自噬的作用。用VA单独或联合100 nmol·L^(-1)巴弗洛霉素A1(BafA1)处理Hep G2细胞12 h,实验分为空白组(不含药物的完全培养基)、对照A组(100 nmol·L^(-1)BafA1)、对照B组(50μmol·L^(-1)VA)和实验组(50μmol·L^(-1)VA+100 nmol·L^(-1)Baf A1)。用蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ蛋白表达水平的变化,探究VA对自噬流的影响。用VA单独或联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预棕榈酸(PA)诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,将细胞分为空白组(不含药物的完全培养基)、模型组(100μmol·L^(-1)PA)、对照组(100μmol·L^(-1)PA+50μmol·L^(-1)VA)和实验组(100μmol·L^(-1)PA+50μmol·L^(-1)VA+5 mmol·L^(-1)3-MA),作用时间24 h。用比色法检测细胞内三酰甘油(TG)的含量,用蛋白质印迹法检测脂滴包被蛋白3(Perilipin3)表达水平的变化。结果在探究VA诱导自噬的研究中,空白组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组的LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.53±0.08,0.93±0.31,0.89±0.22,0.96±0.24和0.92±0.14,P62蛋白相对表达量分别为1.47±0.16,0.96±0.17,1.07±0.06,0.76±0.07和0.63±0.12;空白组的上述指标与中、高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在探究VA对自噬流的影响中,空白组、对照A组、对照B组和实验组LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.40±0.12,0.87±0.14,0.67±0.07和1.13±0.11;实验组与对照A组、对照B组的上述指标和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在脂肪变性模型中,空白组、模型组、对照组和实验组细胞中TG相对含量分别为0.70±0.16,1.34±0.11,1.07±0.03和1.33±0.14,Perilipin3蛋白相对表达量分别为0.61±0.14,1.24±0.19,0.72±0.03和1.03±0.21;模型组的上述指标与空白组和对照组比较,或实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论香草酸通过诱导自噬,从而缓解PA诱导的HepG2细胞脂肪变性。