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大鼠N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ融合蛋白的表达和纯化
1
作者
张 哲
井原义人
+1 位作者
西河淳
谷口直之
《基础医学与临床》
CSCD
1994年第4期57-60,共4页
γ谷氨酰转肽酶(γ-GT)作为一个肿瘤标志酶在肝癌早期诊断上日益受到重视。酶活性升高是由于合成糖蛋白糖链的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ(GnTⅢ)活性升高所致。且其敏感度和特异性远远高于血清和组织中γ-GT活性测定,我...
γ谷氨酰转肽酶(γ-GT)作为一个肿瘤标志酶在肝癌早期诊断上日益受到重视。酶活性升高是由于合成糖蛋白糖链的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ(GnTⅢ)活性升高所致。且其敏感度和特异性远远高于血清和组织中γ-GT活性测定,我们在从大鼠肾脏纯化制备出GnTⅢ纯酶(纯化153000倍)的基础上,根据氨基酸序列分析结果设计寡核苷酸引物,用聚合酶链反应合成GnTⅢcDNA,连接到含麦芽糖结合蛋白质(MBP)cDNA的载体Ma15上,再转化到大肠杆菌E.ColiLXIblue中进行表达,扩增,经AmyloseResin柱亲合层析,所得Ma15再经FactorXa水解后,再次通过上述亲合层析柱,非结合部分即为所要的目的蛋白质。为制备GnTⅢ单克隆及多克隆抗体提供了充足的抗原来源。
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关键词
乙酰氨基
葡萄糖转移酶
肝肿瘤
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题名
大鼠N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ融合蛋白的表达和纯化
1
作者
张 哲
井原义人
西河淳
谷口直之
机构
河北省医学科学院生化研究室
出处
《基础医学与临床》
CSCD
1994年第4期57-60,共4页
文摘
γ谷氨酰转肽酶(γ-GT)作为一个肿瘤标志酶在肝癌早期诊断上日益受到重视。酶活性升高是由于合成糖蛋白糖链的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ(GnTⅢ)活性升高所致。且其敏感度和特异性远远高于血清和组织中γ-GT活性测定,我们在从大鼠肾脏纯化制备出GnTⅢ纯酶(纯化153000倍)的基础上,根据氨基酸序列分析结果设计寡核苷酸引物,用聚合酶链反应合成GnTⅢcDNA,连接到含麦芽糖结合蛋白质(MBP)cDNA的载体Ma15上,再转化到大肠杆菌E.ColiLXIblue中进行表达,扩增,经AmyloseResin柱亲合层析,所得Ma15再经FactorXa水解后,再次通过上述亲合层析柱,非结合部分即为所要的目的蛋白质。为制备GnTⅢ单克隆及多克隆抗体提供了充足的抗原来源。
关键词
乙酰氨基
葡萄糖转移酶
肝肿瘤
Keywords
N- acetylglucosaminyltransferase ⅢAffinity purification MBP fusion protein Factor XaDepartmont of Biochemistry, Osaka University Medical School
分类号
R735.704 [医药卫生—肿瘤]
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作者
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1
大鼠N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ融合蛋白的表达和纯化
张 哲
井原义人
西河淳
谷口直之
《基础医学与临床》
CSCD
1994
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