陆川猪MyoD1基因克隆及组织表达分析

为探究陆川猪骨骼肌生长发育过程中MyoD1基因所起作用,对陆川猪成肌细胞决定基因1(MyoD1)进行克隆,展开生物信息学分析,对其在陆川猪不同组织中的表达进行分析,以NCBI上已公布的野猪MyoD1基因序列为模板,进行特异性引物设计,克隆陆川猪MyoD1基因CDS区,并与NCBI已公布的野猪、牛、绵羊、人、小鼠、大鼠基因序列进行相似性比对,由此构建系统进化树,通过在线软件开展生物信息学分析,而后使用实时荧光定量PCR检测在陆川猪不同组织中MyoD1基因的相对表达量。陆川猪MyoD1基因CDS区全长960 bp,共编码319个氨基酸,碱基突变共存在5处,与野猪、牛、绵羊、人类、小鼠、大鼠的MyoD1基因CDS序列相似性分别为99.2%,93.0%,92.3%,90.0%,84.3%,84.0%,其中与野猪相似性最高,表明二者亲缘关系最为接近;陆川猪MyoD1基因原子总数为4680,蛋白的分子质量为33.99 ku,分子式为C_(1457)H_(2296)N_(442)O_(471)S_(14);不稳定系数为63.87,表明其缺乏稳定性;等电点为5.63,属于酸性蛋白;不存在跨膜结构,存在35处磷酸化位点及1处糖基化位点;蛋白二级结构以无规则卷曲为主,占比60.69%。陆川猪MyoD1基因在背最长肌中的表达量最高,且显著高于其他组织,表达量最低的组织为肾脏。陆川猪各组织中均有MyoD1基因表达,且主要在背最长肌中表达,由此推测,MyoD1基因在陆川猪肌肉生长发育过程中可能起到至关重要的作用。

猪成纤维细胞转染方法的比较

以EGFP为报告基因,比较脂质体法与磷酸钙法对广西陆川猪胎儿成纤维细胞进行转染的效率。结果发现:利用脂质体法、磷酸钙法转染35 mm培养皿培养的细胞,分别得到15、13个阳性细胞集落。利用2种方法对猪胎儿成纤维细胞进行转染均可行。

猪Mx1基因真核表达载体的构建、鉴定及其表达

为获得转Mx1基因的阳性陆川猪成纤维细胞,本研究以干扰素诱导猪成纤维细胞Mx1基因表达,提取细胞总RNA,RT-PCR获得编码猪Mx1蛋白的cDNA;以pMSCV-IRES-GFP为骨架构建猪Mx1基因表达载体pMSCV-IRES-GFP-Mx1,并利用脂质体2000介导重组质粒转染陆川猪胎儿成纤维细胞,通过荧光观察和PCR检测分析结果表明Mx1蛋白基因整合进入陆川猪胎儿成纤维细胞。

水牛支持细胞体外分离及培养

试验探讨了水牛(Bubalus bubalus Linnaeus)睾丸支持细胞(Sertolicell,SC)的分离、纯化以及培养过程中的形态学特性。结果发现,采用差异黏附培养法和高温培养法(38.5℃培养24h)纯化后,支持细胞的纯度达到了90%,说明差异黏附培养法和高温培养法均可用于纯化水牛睾丸支持细胞。

陆川猪PTTG1基因克隆及序列分析

试验旨在克隆陆川猪PTTG1基因全长CDS序列并对其进行生物信息学分析。利用GenBank公布的猪PTTG1预测序列设计引物,用RT-PCR扩增得到目的基因片段,并用生物信息学软件分析和预测了陆川猪PTTG1基因的理化性质与二级结构。结果表明,陆川猪PTTG1基因全长CDS序列为609bp,编码202个氨基酸;其核苷酸序列与牛、黑猩猩、人、猕猴、大鼠、小鼠、原鸡和斑马鱼相对应序列同源性分别为90.15%、87.85%、87.52%、87.03%、76.03%、74.38%、55.74%和44.48%;PTTG1基因编码的蛋白无信号肽,属于亲水性蛋白,主要存在于细胞质中,存在16个磷酸化位点。氨基酸系统进化树分析表明,不同物种PTTG1基因在进化过程中具有高度保守性。本研究成功克隆了陆川猪PTTG1基因,为今后研究PTTG1基因在猪早期胚胎发育过程中的作用奠定理论基础。

猪不同发育阶段肠道微生物菌群特征分析

为研究不同生长发育阶段猪肠道微生物菌群结构与特征的差异,本研究将50头28日龄体重8 kg左右的杜×长×大断奶仔猪随机分为5栏,分别在第60、90、120、150、180日龄饲喂前,从每栏随机挑选5头猪,每头采取100 g左右的新鲜粪样,采用16S rRNA高通量测序技术对微生物多样性进行研究。结果显示:通过菌群分类学分析发现,不同时期猪肠道微生物分布于22个门、42个纲、74个目、119个科、321个属和579个种,厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroides)、螺旋体门(Spirochaetae)为主要优势菌门,不同时期的特异菌群显著差异;对丰度值前30的肠道菌群与血液免疫抗体浓度进行相关性关联分析发现,IL-2浓度与12个菌群存在显著相关性,IL-6浓度与14个菌群存在显著相关性,IgG浓度与12个菌群存在显著相关性,IgM浓度与11个菌群存在显著相关性,IgA浓度与26个菌群存在显著相关性。综上表明,猪肠道微生物菌群结构与组成在不同生长发育阶段均存在显著差异,对猪免疫性能具有重要作用。

广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离与培养

试验主要对广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离和培养进行了研究。利用组织块法能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞,其大小范围在1～3mm3,去除表皮有利于组织块贴壁和细胞的游出;而采用0.25%胰蛋白酶消化液4℃冷处理过夜,不仅有利于去表皮操作,减少取材处理时间,而且操作时间自由度大。在酶消化法中采用胰蛋白酶消化30min,胶原酶继续消化30～40min,能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞。广西巴马香猪皮肤成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期,分别为0～2d、2～8d、8～12d。

杜洛克与陆川猪正反交对后代繁殖性能和屠宰性能的影响

研究旨在探索杜洛克猪和陆川猪正反交对后代繁殖性能和屠宰性能的影响,为杜洛克猪和陆川猪杂交系的选育工作提供依据。试验通过正交试验(杜洛克♂×陆川猪♀)和反交试验(陆川猪♂×杜洛克♀)分别获得杜陆猪(DL)和陆杜猪(LD),在杜陆猪和陆杜猪中分别进行横交试验,记录母猪的窝产仔数、窝产活仔数、产仔异常数、出生窝重、28日龄断奶数和28日龄断奶窝重等繁殖性能指标。并对杜陆猪和陆杜猪的胴体重﹑屠宰率﹑胴体长﹑背膘厚﹑眼肌面积、瘦肉率等屠宰性能指标进行测定。结果表明,正反杂交后代的繁殖性能、肉色和肉质嫩度显著优于杜洛克猪,屠宰性能指标显著高于陆川猪。在猪肉嫩度方面,陆杜猪显著优于杜陆猪。可见,杂交后代都同时遗传了陆川猪和杜洛克猪的优良性状,这为杜洛克猪与陆川猪的杂交系选育提供了依据。

陆川猪与杜洛克杂交猪的屠宰性能和肉质性状分析

以广西地方品种陆川猪为父本,外种猪杜洛克为母本,通过杂交、横交和闭锁繁育的方式培育优良肉质杂交猪新品系。经过2个世代选育所得结果为:陆杜猪二世代90 kg活体的胴体瘦肉率达到54.58%,较一世代提高了8.57%;二世代平均背膘厚为2.06 cm,较一世代降低了10.82%;二世代眼肌面积为30.85 cm^2,较一世代提高了5.36%;二世代肌肉水分含量为74.30%,显著高于一世代的72.37%;二世代肌内脂肪达到4.16%,高于一世代;陆杜猪二世代肌肉剪切力为30.79 N,较一世代下降了20.46%。综合分析试验结果,二世代的屠宰率、胴体瘦肉率、眼肌面积、肌肉水分、肌内脂肪等指标较一世代有所提高,而平均背膘厚、肌肉剪切力则有较大程度降低,这表明世代选育后的陆杜猪具有优良屠宰性能且肉质鲜嫩,适合用于优良肉质猪配套系生产。

饮水中添加复合益生菌对仔猪生长性能及免疫指标的影响

为进一步研究益生菌对仔猪生长性能、腹泻率和血清生化指标、免疫指标的影响,选取1000头健康状况良好、平均始重(8.31±0.33)kg、(35±2)日龄的三元杂交断奶仔猪,随机分成对照组和试验组2组,对照组不添加任何益生菌和抗生素,试验组每1000 kg饮水中添加1 L的益生菌。结果表明:饮水中添加复合益生菌能够较好地改善仔猪的生长性能,提高仔猪的日增重,降低料重比(P<0.05),降低仔猪腹泻率(P<0.05),提高仔猪的免疫力(P<0.05)。

沼泽型水牛发情期血清生殖激素的变化规律研究

研究应用RIA法对沼泽型水牛发情期的血清生殖激素浓度进行测定,并分析了生殖激素的变化规律。结果表明:①同期发情的水牛在处理后至发情当天均有2个E2峰出现,第1个在发情前,第2个在发情后并与LH峰同时或之前2 h;②PMSG(肌注)+PG(肌注)处理的水牛出现发情前E2峰、发情后FSH峰和LH峰的时间为处理后24、60 h和63 h,而PMSG(肌注)+PG(子宫灌注)+LH(肌注)处理的水牛出现发情前E2峰、发情后FSH峰和LH峰的时间为处理后48、80 h和82 h;③各组水牛P4水平在发情后48 h内均低于0.8 ng/mL;④与自然发情水牛对比,同期发情处理可显著影响其发情期的FSH和LH内源性分泌水平(P<0.05);而对E2和P4均没有产生显著性的变化(P>0.05)。

广西2个地方猪种与杜洛克猪杂交后代生长及繁殖性能分析

[目的]研究杜洛克猪和环江香猪、隆林猪杂交后代的繁殖性能和生长性能,为优良性状新品系猪的选育工作提供基础依据。[方法]通过杜洛克猪♂×环江香猪♀和杜洛克猪♂×隆林猪♀杂交分别获得杂交后代杜香猪和杜隆猪,测定杜香猪、杜隆猪的体长、体高、胸围、腹围、体重等生长性能,记录母猪窝产仔数、窝产活仔数、初生窝重及其仔猪30日龄断奶头数、30日龄断奶窝重等繁殖性能。[结果]杜香猪和杜隆猪的生长性能和繁殖性能均较优良,杂交后代集中了环江香猪、隆林猪和杜洛克猪的优良性状。[结论]利用广西地方猪种来培育优良性状新品系猪,环江香猪和隆林猪可作为良种的二元杂交母本使用。

杜洛克与陆川猪正反交后代背最长肌营养成分及氨基酸含量的比较

试验通过杜洛克猪与陆川猪的正反交试验分别获得杜陆猪和陆杜猪,并测定了体重为90 kg杜陆猪和陆杜猪背最长肌的常规营养成分及其氨基酸含量等指标。结果发现,每100 g猪肉中,陆杜猪中能量和干物质含量显著高于杜陆猪(P<0.05);杜陆猪中蛋白质和水分含量较高于陆杜猪,但两者之间差异不显著(P>0.05);杜陆猪和陆杜猪中灰分含量无显著差异(P>0.05);肌肉中17种氨基酸总量、必需氨基酸含量、鲜味氨基酸含量、必需氨基酸占氨基酸总量比例、鲜味氨基酸占氨基酸总量比例等指标,在杜陆猪和陆杜猪中比较均没有显著性差异(P>0.05)。结果表明,杜洛克猪与陆川猪正反交后代中,其肌肉中氨基酸含量差异不大,但杜陆猪肌肉中含有较高的蛋白质营养价值,这为杜洛克猪与陆川猪的杂交系选育提供了依据。

水牛精原细胞的体外培养及分化

以探讨水牛精原细胞体外培养的发育潜能为目的,对3～5月龄水牛睾丸组织进行精原细胞与支持细胞的体外共培养。两步酶法消化睾丸组织来制备水牛生殖细胞悬液,接种于含10%FBS的DMEM培养液中,在37℃、5%CO2、饱和湿度下培养30d,观察细胞的生长和形态变化,并对培养4周的细胞进行RT-PCR分析,以检测PRM-2和TP-1基因的表达情况。结果显示,水牛精原细胞体外培养24h后,精原细胞(10.0～12.5μm)呈圆形并紧贴支持细胞上;培养7～8d后,精原细胞出现聚集状态;培养10d后,有细胞克隆形成;培养30d后,出现似长形精子细胞(8.0～10.0μm)。对培养4周后的细胞进行RT-PCR分析,精子细胞特异表达基因PRM-2被检测出来。结果表明,采用本试验体外培养条件对水牛精原细胞进行培养,能够满足精原细胞体外长期培养的需要,并可以发生增殖与分化而形成似精子细胞。

丙戊酸处理对猪手工克隆重构胚体外发育潜能的影响

为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对猪手工克隆(HMC)胚胎发育潜能的影响,本研究比较了不同浓度(0、25、50、75和100nmol/L)VPA处理猪HMC重构胚对后期胚胎发育率、内细胞团数和组蛋白乙酰化程度的影响。结果表明,50、75nmol/L VPA处理组HMC重构胚的卵裂率和囊胚发育率均显著高于0、25和100nmol/L VPA处理组(P<0.05);与0、25、75和100nmol/L相比,50nmol/L VPA处理组能显著提高囊胚内细胞团细胞数(P<0.05),囊胚阶段VPA处理组的组蛋白H3K14乙酰化(AcH3K14)水平高于空白组和孤雌激活囊胚。因此,应用VPA处理可提高猪HMC重构胚胎分裂率、囊胚率及增加内细胞团细胞数,提高了猪HMC胚胎的体外发育潜能。

陆川猪脂酰辅酶A氧化酶1基因克隆及序列分析

本研究旨在对陆川猪脂酰辅酶A氧化酶1(acyl-coenzyme A oxidase 1,ACOX1)基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中猪ACOX1基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术对陆川猪ACOX1基因进行克隆、测序和生物信息学分析。结果表明,陆川猪ACOX1基因CDS全长1 986bp,编码661个氨基酸,陆川猪ACOX1基因与猪、牛、人、斑马鱼、鸡、猕猴、大鼠、小鼠、爪蟾序列同源性分别为99.5%、85.5%、87.1%、66.3%、75.6%、84.0%、82.3%、81.1%和69.1%。系统进化树分析结果表明,ACOX1基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性,蛋白质二级结构预测结果表明,陆川猪ACOX1蛋白没有信号肽,没有形成跨膜结构。本研究成功克隆了陆川猪ACOX1基因,为阐明其在陆川猪脂肪沉积及代谢方面的调控研究奠定了理论基础。

发酵青饲料对猪生长性能及经济效益的影响

试验旨在研究发酵薯藤青饲料对猪生长性能和经济效益的影响。选取体重约为35 kg的育肥猪100头,随机分为2组,每组5个重复,每个重复10头猪。对照组猪饲喂基础日粮;试验组猪饲喂以15.7%发酵薯藤饲料替换基础日粮。结果显示:试验组猪的净增重比对照组高10.48%(P<0.05);试验组猪的平均日增重比对照组高10.11%(P<0.05);试验组猪的料重比比对照组降低10.13%(P<0.05)。试验组猪比对照组节约15.89%的饲料成本,每头猪收益增加109.84元。研究表明,发酵薯藤青饲料可以提高育肥猪的生长性能,增加经济效益。

猪德尔塔冠状病毒致病机理及防治研究进展

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新发现的猪肠道冠状病毒,能引起猪腹泻、呕吐、脱水甚至死亡,给养猪业带来巨大威胁。深入开展PDCoV的研究对该病的防控有重要意义。PDCoV基因组编码的4种结构蛋白、15个非结构蛋白和3个辅助蛋白在病毒复制、增殖及致病过程中发挥重要作用。PDCoV致病机理复杂,笔者从其侵入宿主细胞以颉颃干扰素反应、诱导细胞凋亡、调控细胞自噬、抑制细胞焦亡途径来逃避宿主免疫应答,以及其他影响PDCoV复制的分子机制方面对其致病机理进行总结。PDCoV呈全球性流行趋势,常用S、M和N基因作为核酸检测和抗体检测靶标进行诊断。目前,尚未开发出针对PDCoV的安全有效的商品化疫苗和治疗方法,随着生物技术的发展,在灭活病毒疫苗、减毒活疫苗、重组载体疫苗、病毒样颗粒疫苗和乳酸菌载体口服疫苗上取得一定进展,且广谱抗病毒药物、抗病毒分子蛋白和新型抗病毒技术在PDCoV抗病毒研究中显示了良好的应用前景。因此,笔者总结PDCoV编码蛋白功能、致病机理、诊断方法及PDCoV的疫苗开发和抗病毒治疗,以期为后续科学研究和有效防治提供借鉴。

肠道微生物与猪只健康的研究进展

随着禁抗令的实施,寻求可以替代抗生素,提高免疫力,防控疾病的方法层出不穷。而微生物的作用也得到了更多的关注,对机体肠道微生物的研究也越来越多。在猪的生命周期中,肠道微生物的定植与动态平衡对其生长发育影响重大。有益菌群的定植,可以有效发挥胃肠道黏膜屏障的保护作用,抵御外来有害菌的侵袭。健康稳定的肠道菌群可以促进营养物质的消化吸收,维持、改善肠道黏膜屏障的功能,提高免疫应答水平。肠道菌群的核心组成在不同环境、不同营养水平和不同发育时期会有显著的差异。有益菌可以更加健康、绿色、高效地提高生产水平,通过在日粮中添加适当比例的益生菌制剂,有助于猪群健康的生长发育。总结了猪肠道微生物的形成、功能及其影响因素,为猪肠道微生物研究和养猪业健康发展提供参考。

陆川猪ACOX1基因不同亚型克隆及其表达差异分析

【目的】克隆陆川猪脂酰辅酶A氧化酶1(Acyl-CoA oxidase 1,ACOX1)基因不同亚型,进行生物信息学分析,并分析ACOX1基因及其亚型在不同品种猪背最长肌中的表达情况,为研究ACOX1基因在陆川猪机体内的功能作用提供参考依据。【方法】根据GenBank中ACOX1基因序列(NM_001101028.1)及所克隆获得陆川猪ACOX1基因编码区(CDS)序列,设计特异性扩增和验证引物,采用TRIzol法提取0月龄陆川猪肝脏及8月龄陆川猪、杜洛克猪、杜陆猪和陆杜猪背最长肌的总RNA,反转录合成cDNA,以0月龄陆川猪肝脏cDNA为模板进行克隆和验证,获得陆川猪ACOX1基因不同亚型序列,并利用在线工具进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测ACOX1基因不同亚型在背最长肌组织中的表达情况。【结果】陆川猪ACOX1基因存在2种亚型结构(ACOX1-Ⅰ和ACOX1-Ⅱ),NCBI登录号分别为OQ701687和OQ701688;2种亚型CDS长度均为1986 bp,共编码661个氨基酸残基,2种异构体主要是第270~429位氨基酸进行选择性剪切,陆川猪ACOX1-Ⅰ型编码蛋白分子量为74786.50Da,理论等电点(pI)为7.36,ACOX1-Ⅱ型编码蛋白分子量为74670.49 Da,pI为8.17;ACOX1-Ⅰ型蛋白中α-螺旋占47.96%,β-转角占10.14%,延伸链占14.52%,无规则卷曲占27.38%,ACOX1-Ⅱ型蛋白中α-螺旋占47.66%,β-转角占10.89%,延伸链占14.37%,无规则卷曲占27.08%,陆川猪ACOX1蛋白不存在跨膜结构。ACOX1-Ⅰ基因在陆川猪背最长肌中的相对表达量最高,杜洛克猪中的相对表达量最低,4个品种猪之间差异不显著(P>0.05),ACOX1-Ⅱ基因在陆川猪和杜洛克猪背最长肌中的相对表达量显著高于杜陆猪和陆杜猪(P<0.05)。【结论】陆川猪ACOX1基因存在2种亚型(ACOX1-Ⅰ和ACOX1-Ⅱ),ACOX1基因及其亚型在不同品种猪中的表达存在明显差异,该结果可为阐明ACOX1基因在陆川猪脂肪沉积及代谢方面的调控机制提供参考。