鸡CDC25B-mRNA探针制备及其在鸡十二指肠黏膜的原位杂交反应

应用RT-PCR方法从鸡胚中扩增CDC25B基因片段,将其连接于pGM-Teasy。分别利用pGM-Teasy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的CDC25B/pGM-Teasy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。以合成的地高辛(DIG)标记的CDC25B-mRNA为探针,进一步应用原位杂交组织化学方法(in situhybridiza-tion histochemistry,ISHH)探查CDC25B-mRNA在鸡十二指肠黏膜的分布。结果表明,成年鸡十二指肠肠腺上皮细胞中有丰富的CDC25B-mRNA的转录,其中CDC25B-mRNA探针杂交阳性细胞在肠腺基底部和小肠绒毛中部分别占上皮细胞总数的81.60%±9.63%和36.21%±8.81%。原位杂交阳性产物大部分分布于十二指肠肠腺上皮"干细胞部"和"增生部"细胞的胞质和胞核,肠腺基底部杂交信号由下至上逐渐减弱,至小肠绒毛下部消失,转为阴性。在黏膜肌层以及肌肉层杂交反应呈阴性。本研究从基因水平证明了鸡十二指肠黏膜肠腺上皮"干细胞部"和"增生部"细胞中有CDC25B-mRNA的存在,表明该区域有活跃的增殖过程,以补充绒毛上端死亡脱落的细胞。

Ki67标记应写入病理学教科书

关于肿瘤细胞的增殖有很多的误解,肿瘤细胞常被认为增殖快。但实际上并非如此,肿瘤细胞的增殖周期是延长或不变。肿瘤生长快的主要原因是处于增殖周期的细胞比例增多了。这个比例称为生长分数,在临床病理上,可用Ki67染色标记。Ki67标记比例越高,肿瘤生长越快,恶性度越高,但常常也对放化疗更敏感。我们建议将此内容写入病理学教科书并重点讲授。

肿瘤细胞周期的长与短及凋亡的多与少——肿瘤生长的定律

有关肿瘤发生发展的研究中存在两个常见的误解,一是肿瘤细胞的细胞周期缩短,分裂增快。事实是肿瘤细胞的周期不变或延长。肿瘤组织之所以增殖加快,是由于进入细胞周期的细胞比例增多。二是肿瘤细胞的凋亡较正常组织减少。事实是大多数情况下,肿瘤组织的细胞凋亡较正常组织增多,且肿瘤恶性程度越高,细胞凋亡增多越明显。肿瘤的生长定律:肿瘤的生长=增殖速度-凋亡速度+间质的反应性增生。肿瘤的间质不但在空间上是肿瘤必不可少的一部分,我们推测,其在肿瘤的发生和发展上,也有着非常重要的作用。遗憾的是,间质的这些可能的作用没有得到应有的重视,属于研究不足的领域。

乳腺原位癌基因表达与分子肿瘤学理论的两个悖论

肿瘤的发生被认为是基因突变的累积导致细胞增殖失控和逃避凋亡的结果。这些常见的突变基因包括癌基因的扩增和过表达,抑癌基因的表达减弱和丢失等。科学研究和临床工作中,我们常发现与现有科学理论相矛盾的现象或结果,我们称之为悖论（paradox）。悖论是科学理论的大忌,如无法解释,常提示理论体系中存在某种错误,乃至理论体系的彻底错误。我们且看乳腺分子肿瘤学中的两个例子。

体细胞突变肿瘤发生理论之悖论

一个科学理论是否成立，有三个关键的指标。一是逻辑上的简洁性；二是能够解释以前不能解释的现象并能在现有的理论之间建立联系，也即连环性；三是不出现悖论。肿瘤发生的体细胞突变理论（somatic mutation theory，SMT）已主宰肿瘤发生研究半个多世纪。

阿司匹林对大鼠破骨细胞分化成熟和骨吸收活性的影响

目的研究不同浓度阿司匹林对体外培养大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)分化成熟及骨吸收活性的影响。方法建立由核激活因子受体配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(Macrophagecolony stimulating factor,M-CSF)共同作用的大鼠破骨细胞骨髓诱导体系,将雌激素(10-6mmol/L)和不同浓度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)分别作用于破骨细胞。诱导培养后分别对破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(The tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色,观察细胞形态,并计数破骨样细胞数量;将各组破骨细胞接种于骨磨片上,建立破骨细胞-骨磨片活性分析模型,于不同时间点对骨磨片进行光镜和扫描电镜观察,分析计算骨吸收陷窝面积。结果与正常对照组相比,雌激素组破骨细胞数量和骨吸收陷窝面积低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且随着阿司匹林浓度的增加,阿司匹林组TRAP阳性多核破骨细胞数量、骨吸收陷窝面积逐渐减少直至消失,差异有统计学意义(P<0.05)。与雌激素组相比,低浓度阿司匹林组(0.25mmol/L)没有明显差异;但中、高浓度阿司匹林实验组(0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L)破骨细胞数量和骨吸收陷窝面积减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿司匹林对破骨细胞的分化成熟及骨吸收功能有抑制作用,且呈剂量依赖性,从而具有抗骨质疏松的作用。

雄激素在乳腺发育和乳腺癌发生发展中作用的研究进展

一系列的临床前期和临床期研究表明,雄激素与雄激素受体的异常与正常乳腺细胞及乳腺癌细胞的增殖均密切相关。在乳腺上皮细胞增殖的各个周期和乳汁中均可检测到雄激素。雄激素经由其受体介导所涉及的机制在正常乳腺细胞的增殖和乳腺癌细胞的侵袭演进中也起着极其重要的作用。本文就雄激素及其受体的基因、蛋白结构和其在乳腺发育,乳腺癌形成中可能的机制加以综述,为乳腺发育和乳腺癌研究提供一定的理论依据。

斑马鱼正常肝脏显微形态和超微结构的初步观察

目的观察与分析斑马鱼肝脏的显微和超微结构。方法光镜和透射电镜观察组织切片。结果斑马鱼肝脏没有典型的门管区，静脉和胆管随机地分布在肝实质中，很难观察到动脉。肝板由两层并列的肝细胞排列成双层板状结构，以中央静脉为中心呈放射状分布，在肝板（肝细胞索）之间是血窦，肝细胞索呈弯曲、分支和吻合状态，肝细胞核大而圆，核仁分区明显，核孔数目多，且密度大，呈现细胞代谢活跃旺盛的形态。胞质中粗面内质网（RER）既有管状结构也有扁平囊状结构，扁平囊状结构的RER呈区域化的层层排列，可达二十余层。线粒体成群分布，并且与RER紧密接触，为RER合成蛋白质提供能量。电镜观察发现当细胞质富含线粒体、RER、核糖体时，核孔的数目多，细胞质内出现一定量的溶酶体，糖原在细胞质内有少量的聚集。当细胞质内有大量的糖原分布时，则核孔的数目较少，且细胞嚣也较少。胆管系统在肝脏内呈树枝状分布，胆小管包括细胞内胆小管和细胞间胆小管，细胞内胆小管腔内的微绒毛明显多于细胞间胆小管。本文也对内皮细胞、贮脂细胞、红细胞和淋巴细胞进行了描述。并对斑马鱼肝脏的结构与其他硬骨鱼类进行了比较。结论斑马鱼肝细胞排列方式与其他硬骨鱼类有一定差异，也与前人的报道并不完全相同，这种差异和不同与动物种类和研究方法有一定关系。肝细胞的超微结构特征，在形态学角度证明了其活跃的合成和代谢功能。

肿瘤转移相关蛋白1表达的降低在银屑病发病中的可能作用

目的:探讨肿瘤转移相关蛋白1在银屑病发生发展过程中的作用及其临床价值。方法:免疫组化方法检测36例银屑病组织和12例正常皮肤组织中肿瘤转移相关蛋白1(MTA1)的表达水平;并分析MTA1与银屑病临床病理特征的关系以及两者之间的相关性。结果:银屑病中MTA1蛋白表达阳性率为22.2%(8/36),明显低于正常皮肤组织(100%,P<0.05)。结论:结果提示MTA1的表达与银屑病密切相关,提示MTA1表达的降低可能是银屑病发展中的一个关键步骤。

大叶性肺炎的起因推理

大叶性肺炎是肺炎链球菌感染引起的全肺叶炎症,而肺炎链球菌存在于约一半的健康人的呼吸道。所以大叶性肺炎属于机会性的感染性疾病。在讲解大叶性肺炎的发病机制时,我们常用机体免疫力的下降来解释。但机体免疫力的降低是含义很笼统的说法,我们的疑问是,器官移植、肿瘤、糖尿病、艾滋病等多种疾病的患者,其机体的免疫力显著降低,为什么很少发生大叶性肺炎?从大叶性肺炎的诸多诱因来看,一个共性是体温降低。本文从体温降低诱发大叶性肺炎的角度分析其发病机制。

Cdc25B mRNA在早期鸡胚中的动态表达

本试验旨在研究Cdc25B mRNA在早期鸡胚中的时空表达模式。通过分子克隆的方法获得Cdc25B基因特异性目的片段,并用体外转录的方法合成了Cdc25B RNA探针,通过全胚胎原位杂交的方法检测了早期不同发育阶段鸡胚中的Cdc25B mRNA水平。结果表明,Cdc25B的杂交信号主要分布于中枢神经系统(CNS)、体节和肢芽的顶端,在尾部神经上皮中缺乏杂交信号。早期阶段,Cdc25B的杂交信号不对称地分布在亨氏节的左侧。随着胚胎的发育,Cdc25B的杂交信号逐渐增强,并且在即将封闭的神经管中,杂交信号呈现出腹背递减的浓度梯度。然而,在早期各个阶段,脊索都是阴性的。这些结果提示,Cdc25B在前、后期的CNS、体节和肢芽发育中可能发挥不同的功能,这种功能的改变可能与Cdc25B的表达浓度有关。此外,鸡胚胎内部器官的左右不对称性发育可能是Cdc25B与其它基因共同调控的结果,这些调控发育的机制可能是Cdc25B蛋白参与了细胞周期进程,调控细胞增殖或分化。

鸡肠Remak神经元与过路节的电镜结构特征

【目的】探究鸡肠Remak神经(intestinal nerve of Remak,INR)的神经元和过路节超微结构,为进一步阐明INR的生理功能提供理论基础。【方法】应用透射电镜技术观察鸡肠INR元与过路节的超微结构。【结果】INR有大量体积巨大的神经元和少量小强荧光细胞分布。神经元胞体周围有零散的卫星细胞围绕,但不能形成完整被囊,可见卫星细胞与神经元胞体之间形成突触样联系。神经元周围基膜不明显,神经元胞体表面常直接与周围细胞间质接触。细胞核圆而表面平滑,染色质松散清亮,核内可见棒状小体的特殊结构。核仁明显,结构和组成典型。胞质内分布着丰富的微管、发达的粗面内质网和高尔基复合体,粗面内质网池常有扩张膨大。可见中央有孔的致密颗粒分布于核周质,可能为肽类递质分泌颗粒。核糖体除了附着于粗面内质网表面外,还有大量游离核糖体分布于胞质中。线粒体形态多样,并有致密化现象。肠INR被膜下分布着少量成群的小强荧光细胞,其胞质和胞核的电子密度较高,细胞之间有不对称的突触联系。根据突触小泡的不同,INR内分布着4种过路节,它们与周围结构形成不同的突触联系。【结论】INR神经元具有旺盛合成和分泌功能的超微结构特征,而过路节的组成和联系显示出INR支配活动的多样化和复杂性。

肿瘤转移相关蛋白1在小鼠肝癌诱发过程中的表达与意义

目的:建立BALB/c小鼠肝癌动物模型,观察分析肿瘤转移相关蛋白1(MTA1)在建模过程中表达的变化及可能的意义。方法:采用联合二乙基亚硝胺(DEN)/四氯化碳(CCl4)/乙醇的方法诱导正常成年BALB/c雄性小鼠150 d,HE染色观察小鼠肝脏病变情况,免疫组化染色观察MTA1在肝脏病变部位的表达情况。结果:实验组小鼠肝脏镜下依次出现炎症、纤维化和肿瘤性改变。在肝脏病变进展的进程中,MTA1的表达量增加;且肝硬化期,MTA1主要在胞质中表达。结论:MTA1在DEN诱发小鼠肝肿瘤过程中表达量增加、表达位置改变,提示MTA1可能在肝脏肿瘤形成的全程均具有重要作用。

雌激素调节人乳腺癌细胞CD147表达的研究

目的:探究雌激素对人乳腺癌细胞系中CD147表达的调节作用。方法:用雌激素处理人乳腺癌细胞系,RT-PCR及Real-time PCR定量检测用药前后细胞中CD147 mRNA表达水平变化,Western blot检测用药前后细胞中CD147蛋白表达水平变化。结果:经雌激素处理后的ER阳性人乳腺癌细胞系中CD147 mRNA及蛋白的表达均呈上升趋势,而ER阴性人乳腺癌细胞系则无明显变化。结论:雌激素通过ER激活CD147的表达,在乳腺癌的发生发展过程中发挥了重要的作用。

抗凋亡的“原癌基因”Bcl-2实为抗癌基因

长期以来,细胞凋亡减少被认为是肿瘤发生的重要原因和机制,具有抗凋亡作用的基因被认为是癌基因。Bcl-2是在滤泡性B细胞淋巴瘤中分离出来的具有很强抗凋亡作用的基因,是这类癌基因的原型。吊诡的是,Bcl-2对肿瘤的发生和发展有很强的抑制作用。这种作用包括三个方面:1在培养细胞,Bcl-2的过表达可抑制细胞的生长和集落的形成;2在转基因动物,Bcl-2的过表达可抑制化学致癌物和其他癌基因诱发的肿瘤发生和生长;3在多种肿瘤,Bcl-2的过表达与患者的预后好相关。Bcl-2的这种生物学作用提示我们应该对癌基因和抑癌基因的概念进行反思。我们认为,Bcl-2应该被视为抑癌基因。并且,在癌症治疗中可以采用模拟Bcl-2的生物学作用的方式来实现带瘤生存。

阿司匹林通过抑制大鼠破骨细胞RANK表达抑制骨质吸收

目的研究不同浓度阿司匹林对体外培养大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)RANK(receptor activator of nuclear factor-κB,核因子κB受体活化因子)表达的影响。方法采用RANKL和M-CSF诱导大鼠骨髓单核巨噬细胞破骨分化模型,给予不同浓度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)和雌激素(雌二醇10-6mmol/L)处理,而后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(The tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察细胞形态特征,扫描电镜观察骨磨片破骨细胞骨吸收陷窝,RT-PCR技术检测破骨细胞表面RANK基因的表达,ELISA法检测RANK蛋白的表达。结果阿司匹林和雌激素都可以使大鼠破骨细胞成熟分化程度和骨吸收活性降低,抑制破骨细胞RANK基因和蛋白的表达,且阿司匹林的抑制作用具有剂量依赖性。结论阿司匹林对大鼠破骨细胞RANK的表达有抑制作用且呈剂量依赖性,从而抑制破骨细胞的成熟分化及骨吸收功能。

雄激素对雌性小鼠乳腺发育的影响

目的:观察雄激素(睾酮)对雌性小鼠乳腺生长、发育的影响,为研究雄激素与乳腺疾病的关系奠定基础。方法:对小鼠进行睾酮皮下注射和来曲唑灌胃给药,一段时间后,应用整装切片法和HE染色法,观察小鼠乳腺组织的发育情况。结果:高剂量雄激素主要使雌性小鼠正常乳腺组织的导管二、三级分支、末端终蕾数量减少;低剂量雄激素一定程度上可以促进乳腺的发育。结论:高剂量雄激素可能经过AR及其它信号通路或作用间质细胞产生某种信号分子抑制乳腺的生长。

“砍死酶”-3——死与生的转折点

细胞的凋亡是一个级联酶促反应过程,最终的执行者是胱冬肽酶-3(Caspase 3,本文首译"砍死酶")。过去20多年,人们一般认为肿瘤细胞具有"抗凋亡"的特性。但令人不解的是,砍死酶-3在肿瘤中常呈过表达态。晚近我国的一组研究人员发现,砍死酶-3对肿瘤的生长至关重要。在把砍死酶-3的表达敲低以后,刺激肿瘤生长的因素也失去了作用。这组学者把砍死酶-3的这种既促凋亡又促增殖的作用称为砍死酶-3的双重作用。实际上,这种所谓的双重作用普遍存在,如抗凋亡蛋白Bcl-2抑制细胞的增殖;细胞死亡受体CD95刺激肿瘤的增殖;Jnk激酶既诱导凋亡又促进肿瘤的增殖,如此等等,不一而足。这些偶然的现象之合实际上是生与死之间转换的必然——没有死就不必生,死亡增多必然促进繁殖。

阿司匹林抑制去势大鼠IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF的表达及其防治绝经后骨质疏松作用的研究

目的探讨阿司匹林对去卵巢骨质疏松模型小鼠体内白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)表达的影响,以及其防治骨质疏松的作用。方法选取Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为对照组(10只)和去卵巢模型组(50只),术后1周去卵巢模型组大鼠再随机分为骨质疏松组,其中,A组(0.25 mmol/L阿司匹林)、B组(0.5 mmol/L)、C组(1.0 mmol/L)和D组(1.5 mmol/L),各10只。检测各组血清和骨组织IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平,同时采用Micro-CT对骨小梁微观三维形态结构进行分析。结果骨质疏松组血清IL-1,IL-6,TNF-α,M-CSF分别为(80.15±7.18)pg/m L、(82.16±6.63)pg/m L、(30.21±4.73)pg/m L和(11.42±4.25)pg/m L,均明显高于对照组(P<0.05)。A,B,C,D组中,D组IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平最低(P<0.05)。骨质疏松组骨组织IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF分别为(71.24±8.10)pg/m L、(78.02±5.15)pg/m L、(26.92±3.23)pg/m L和(10.22±3.15)pg/m L,均明显高于对照组(P<0.05);A,B,C,D组中,D组IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平最低(P<0.05)。Micro-CT检测结果表明,阿司匹林治疗组腰椎椎体骨小梁厚度、骨小梁数量及骨密度均显著高于骨质疏松组。结论阿司匹林能抑制去势大鼠骨流失,这可能与阿司匹林抑制大鼠血清和骨组织IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF的表达有关,从而使破骨活动减弱的作用。

临床病理学进修医生全面培养模式的探讨

目的探讨临床病理科进修医师的全面培养模式。方法结合科室实际情况,每年接收10~15名进修医生。根据进修医生的特点,分别通过岗前培训、参加疑难病例讨论、文献阅读、科研素养培养和阶段性考核等方式进行个性化和规范化培养。结果在进修结束时,绝大多数进修医生都能达到预期培养目标。掌握标准化的病理诊断工作流程,诊断能力获得较大提高;提高了自学能力、英文学习能力;掌握了常见病、疑难病的诊断方法、诊断思路及临床研究方法等。结论通过系统化的培养,进修医生的临床病理诊断能力得到了全面提高,为基层医院提供了大量的高水平病理医师。