不同小麦基因型及其不同外植体离体培养研究初探

以 13个不同基因型、3种不同外植体为材料 ,选用 5种不同培养基 ,研究了各因素对愈伤组织诱导、分化的影响 ,并在此基础上建立了一套可靠的小麦组培再生系统。结果表明 ,愈伤组织的诱导、根的分化和绿苗的再生虽然都具有显著的基因型效应 ,但不具备显著的相关关系 ;对于绿苗的再生分化 ,幼胚优于成熟胚 ,幼穗和幼胚之间不存在显著的差异 ;X和A培养基各自在愈伤组织的诱导和再生分化上都明显优于MSSAA/ 2和R培养基。成熟胚愈伤组织诱导率、生根率和绿苗率平均分别可达 88.9%、5 6 .3%和 8.7% ;幼胚愈伤组织诱导率、生根率和绿苗率平均分别可达 99.1%、5 3.2 %和 17.6 % ;幼穗愈伤组织诱导率、生根率和绿苗率平均达94 .6 %、84 .8%和 18.3%。

激素对小麦幼穗组织培养效果的影响研究

分析了激素对两个基因型小麦幼穗组织培养效果的影响,结果表明,愈伤组织诱导率在每个组合中均可达100%,诱导培养基中加入2,4-D对植株再生和绿点分化频率的效果要显著优于P icloram,在所采用的有效2,4-D浓度范围内,随着浓度的升高,绿苗的再生频率呈现上升的趋势,2,4-D的量为4.5 m g/L时,植株的再生频率平均可以达到45%左右.

消毒剂对小麦组织培养的影响

通过对家用洗涤剂和升汞设置不同的处理时间梯度,比较了家用洗涤剂和升汞作为消毒剂对小麦幼胚、幼穗组织培养效果的影响,结果表明,体积分数为10%的白猫洗涤剂消毒处理20 min与质量分数为0.1%的升汞消毒处理10 min具有等同、高效的灭菌效果和组织培养效果,在单个组合中的抗污染率、愈伤组织胚性率、生根率、植株再生频率和绿点分化频率最高均可达100%,且显著高于所设置的其他各个梯度时间的处理效果;不同外植体的比较结果证实了幼胚的植株再生频率和每团愈伤组织的出苗数都显著高于幼穗.

外源基因1Dx5在转基因小麦后代中的表达

采用PCR和SDS-PAGE技术,分析研究了转基因小麦后代外源品质基因1Dx5的遗传分离及表达规律,结果显示:转基因小麦后代的遗传分离完全符合孟得尔遗传分离规律,转基因植株都达到了纯合状态,1Dx5基因在转基因植株中已经稳定整合并稳定遗传,并发现了超表达的差异表达现象,在转基因植株中没有发现基因沉默现象.

植物激素对新疆雪莲愈伤组织诱导和分化的影响

研究了不同植物激素对新疆雪莲叶片愈伤组织诱导和分化的影响.结果表明:植物激素对新疆雪莲愈伤组织的诱导和分化影响显著,以MS为基本培养基附加浓度1.00mg·L^(-1)的6-BA和2.00 mg·L^(-1)的NAA组合为最佳诱导培养基,诱导率达100%;以MS为基本培养基附加浓度1.00 mg·L^(-1)的6-BA和0.20 mg·L^(-1)的NAA组合为最佳出芽培养基,出芽率达78%;以1/2MS为基本培养基附加浓度0.30 mg·L^(-1)的NAA和浓度0.03 mg·L^(-1)的KT为最佳生根培养基,生根率达54%.

新疆雪莲愈伤组织诱导及总黄酮的测定

以新疆雪莲植株叶片为外植体,研究了不同植物激素和培养时间对新疆雪莲愈伤组织生长、总黄酮含量和产量的影响。结果表明:新疆雪莲愈伤组织最佳诱导培养基为MS+2.00 mg/L NAA+1.00 mg/L 6-BA,其愈伤组织诱导率最高(97.0%);继代培养基以MS+2.00 mg/L NAA+1.00 mg/L6-BA中愈伤组织生长量和总黄酮产量最高,分别达4.58 g和12.24 mg;以MS+4.00 mg/L NAA+2.00 mg/L 6-BA中的愈伤组织总黄酮含量最高,达2.17 mg/g;愈伤组织的生长量随继代培养时间的延长而增加,而其总黄酮含量不稳定,于继代培养第30天达到最高(2.7 mg/g),此时总黄酮产量最高可达26.66 mg。

新疆雪莲DFR基因的分离及同源遗传转化

二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是植物重要的次生代谢产物花青素生物合成途径中的关键酶。运用RT-PCR和RACE技术从新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kir.)中克隆得到DFR基因(GenBank登录号为JN092126)。DFR基因的cDNA全长序列含有1个1 029 bp的开放阅读框(ORF),编码343个氨基酸,该基因推断的蛋白与水母雪莲DFR基因推断的蛋白高度同源,相似性达到92%;以不同物种中DFR氨基酸序列进行比对分析,推断的蛋白含有与NADPH特异结合的结构域。将该基因运用农杆菌介导的叶片转化法进行同源转化,将含有转DFR基因的愈伤组织进行悬浮培养,紫外分光光度法测定愈伤组织的总黄酮含量,结果表明转基因愈伤组织的总黄酮含量明显高于非转基因愈伤组织的含量。该研究为提高新疆雪莲药用化学成分黄酮类物质及实现新疆雪莲花青素的人工生物合成的研究奠定基础,对解决天山雪莲资源匮乏提供参考。

小麦遗传转化研究进展

小麦作为最重要的 3大禾谷作物之一 ,其离体培养具有很强的惰性 ,再生频率与水稻、玉米相比要低一些 ,目前大多通过对基因型和外植体的选择来达到植株的高频再生分化 ,因此其遗传转化就远远滞后于水稻和玉米 ,更不用说与其它双子叶植物相比了 .重点综述了小麦转基因技术和外源基因在小麦中的遗传转化研究现状 ,其内容包括几种主要的小麦转基因方法和以基因枪法为主的各种转化技术对品质基因、抗除草剂基因和抗病等基因在小麦中的遗传转化研究进展 。

小麦低分子量麦谷蛋白亚基分离条件优化

目的:优化一种有效分离小麦LMW-GS的实验条件。方法:以面包小麦L88-6作为材料,采用SDS-PAGE技术,通过对麦谷蛋白提取液、分离胶浓度、分离时间、电泳缓冲液等条件进行实验比较。结果与结论:含0.3mol/LNaI和1.4%4-VP的麦谷蛋白提取液能有效提取LMW-GS成分,分离胶浓度为T=14%C=3%、分离时间为40h、Tris-硼酸或Tris-甘氨酸电极缓冲液的分离条件分离效果好、重复性好、简单易行,为小麦低分子量麦谷蛋白亚基深入研究的第一个限速步骤提供了良好的解决方案。

胚龄对小麦盾片组织培养的影响

研究了播种时间、取材时间和盾片大小对小麦愈伤组织诱导、器官分化和植株再生的影响.结果表明,元月初播种的材料具备很好的盾片组织培养效果,生根和绿点率都可达100%,植株再生频率平均为46%;开花后第16 d取材,生根和绿点率都达100%,植株再生频率平均达80%;达到最佳组织培养效果的的盾片大小为0.15～0.20 cm.

水稻悬浮细胞诱导生成植保素的研究

运用化学试剂处理水稻悬浮细胞诱导生成植保素Sakuranetin（SA）和Momilactone A（MA）．结果表明，在悬浮培养液中添加1．5mmoL／L的金属阳离子Ag^＋、Ca^2＋、Zn^2＋、Mg^2＋和Cu^2＋，都可以在一定程度上诱导悬浮细胞产生SA或MA，其中以K^＋处理效果最好；添加1．5mmoL／L的NH；也可诱导产生MA；MA的产生量显著高于SA，每20mL悬浮液中的产量可以分别高达158．9～1337．9μg和0．16～7．6μg，说明水稻悬浮细胞中存在这些阳离子的高效防御识别系统，从而开发新型绿色环保农药是可行的．

普通小麦植株再生系统的优化研究(英文)

为得到高效稳定的植株再生体系,以我国普栽的3 个小麦品种幼胚为材料,进行了组培条件的比较优化研究。结果表明,对于植株的再生分化效率,有效浓度的2,4-D 作为诱导激素,效果显著高于有效浓度的Piclorm, 所有处理平均可获得54%的植株分化频率。诱导培养基中(MSS 3AA/2)中添加0.5 mg L-1的2,4-D,分化培养基中(R)含0.01 mg L-1的2,4-D 配加3 mg L-1的KT 为优化的激素条件,植株平均再生频率可达83.3%。器官分化频率的相关性分析表明:除了绿点的分化频率和每团愈伤组织苗的分化数彼此独立外,苗分化频率、绿点分化频率和每团愈伤组织苗分化数之间都存在不同显著水平的相关性。

转基因小麦外源品质基因1Dx5表达的遗传研究

转基因小麦B72-8-11b中外源品质基因1Dx5表达量是内源相应基因表达量的6倍。利用小麦转基因品系为父本,常规品种鄂麦12、鄂麦18和日喀则8号分别为母本,配置3个杂交组合。采用SDS-PAGE技术,检测各组合亲本、F1、F2代的HMW-GS组成,研究转基因小麦B72-8-11b中外源品质基因1Dx5表达的遗传。结果表明:外源1Dx5基因有功能拷贝整合在1个位点,如同内源品质基因,遵从孟德尔遗传模式。这对育种选择策略的制订具有指导意义,也表明了基因枪转化法能够使得外源基因有功能拷贝整合在1个位点并能稳定传递。

转基因小麦环境释放中基因漂移研究

基因漂移供体是转基因小麦 ,受体有转基因小麦的非转基因分离体、受体对照品系和地方小麦品种 ,以外源uidA基因表达作为基因漂移的分子标记 .在供体开花期间 ,距供体 5个不同距离上收集花粉 ,约 80 %的花粉分布在距供体中心 15m以内 ,距离 35m处只检测到约 6 %的花粉 .在 11个检测样点检测受体和供体间杂交率 ,供体与分离体混种同一小区时 ,基因漂移频率较高 (1.0 8% ) ;与其受体对照播种于相邻小区 (相距约0 .5m)时 ,基因漂移频率居中 (0 .6 3% ) ;地方品种距供体边缘 0 .5～ 2 .5m处 ,频率较低 (0 .2 5 % ) ;3m以外没有检测到基因漂移 ,认为转基因小麦基因漂移距离应在 3m以内 .

铅胁迫对甜瓜种子胚芽酶系统及MDA含量的影响

对不同浓度铅胁迫下甜瓜种子胚芽酶系统中抗氧化酶类及膜脂过氧化的影响进行研究，结果表明，在低浓度Pb^2＋胁迫下（0～50mg／L），过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性随Pb^2＋浓度增加而逐渐上升，并高于对照组，在高浓度Pb^2＋（100～400mg）胁迫下，SOD、POD、CAT活性下降并低于对照组。丙二醛（MDA）含量恰好与其相反，先降低后升高。

植物花青素生物合成相关基因研究进展

综述了植物花青素基因的研究现状和发展趋势,包括植物花青素生物合成途径,生物合成途径中关键酶基因的分离克隆及应用,为今后进一步研究花青素提供参考借鉴。

两个杂交组合中转基因小麦外源1Dx5基因的遗传

利用杂交组合川89-107×B72-8-11b和绵阳26×B72-8-11b的亲本、F1、F2代,研究转基因小麦B72-8-11b中外源品质基因1Dx5表达的遗传.结果表明:外源1Dx5基因在F1代中呈现显性,在F2代中呈现3(有):1(无)的分离,有功能拷贝整合在1个位点,遵从孟德尔遗传模式,这对杂交育种选择策略的制订具有指导意义.

虎杖转录因子PcMYB1基因的克隆及原核表达

为了探明髓细胞组织增生病毒癌基因同源物(MYB)转录因子在虎杖苯丙烷代谢途径的作用,以虎杖叶片为材料,通过RT-PCR和RACE技术从虎杖中获得MYB转录因子基因,命名为PcMYB1,GenBank登录号为KY495789。序列分析表明,PcMYB1基因的cDNA序列全长1 152 bp,该基因开放阅读框为813 bp,编码270个氨基酸,推测蛋白质分子质量为30.455 ku。PcMYB1编码的氨基酸序列具有MYB类转录因子的共同特征,其N端具有R2、R3两个MYB结构域,同时其C端还存在一个抑制结构域C2基序pdLNL[D/E]LXI[G/S]。系统进化树分析表明,该基因编码的蛋白质与矮牵牛PhMYB4的亲缘关系最近。将该基因片段连接到原核表达载体pET-28a中,构建融合表达质粒pET28a-PcMYB1,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白与预期大小一致。成功克隆PcMYB1基因的全长序列,构建的原核表达载体pET28a-PcMYB1可用于该基因的功能研究。

温度、培养基成分和渗透势对新疆雪莲种子萌发的影响

以新疆雪莲为研究对象,探讨了温度、培养基成分和渗透势对其种子萌发的影响,差异显著性分析结果表明:温度、培养基成分和渗透势显著影响新疆雪莲种子的萌发,其中温度对新疆雪莲种子萌发影响极显著(p<0.001),20/10℃变温条件下种子萌发率最高;渗透势和培养基成分对新疆雪莲种子萌发影响显著(p<0.05),种子萌发的最适培养基为1/2 MS0。PEG模拟水分胁迫研究表明:PEG高于-0.9 MPa时,种子不能萌发。回归分析表明:温度和渗透势与新疆雪莲种子萌发率之间显著相关,而培养基成分与其萌发率之间相关不显著。