穿心莲内酯对急性淋巴细胞白血病细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的:研究穿心莲内酯(andrographolide,AND)对急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞生长和凋亡的影响。方法:人ALL细胞株CEM-C1经AND处理12 h、24 h和48 h,应用CCK-8法检测AND对细胞活力的影响;应用Wright-Giemsa染色法观察AND处理24 h对CEM-C1细胞形态及数量的影响;应用流式细胞术+annexin V-FITC/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞凋亡的作用;采用流式细胞术+PI染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞周期分布的作用;用Western blot法检测AND对CEM-C1细胞凋亡相关蛋白水平的影响;应用JC-1线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)检测试剂盒检测AND作用24 h对CEM-C1细胞MMP的影响。最后将CEM-C1细胞接种于BALB/c-nu雌性裸鼠右胁腹侧建立裸鼠ALL移植瘤模型,通过检测肿瘤体积及重量观察AND的体内抗ALL作用,并应用免疫组化法检测裸鼠肿瘤组织凋亡蛋白cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:CCK-8实验结果表明,AND对CEM-C1细胞活力的抑制作用呈时间及剂量依赖性。Wright-Giemsa染色结果显示,应用AND后CEM-C1细胞缩小、凝聚,细胞染色加深,细胞质呈均质红染并且细胞数减少。流式细胞术检测结果表明,AND处理细胞24 h后,随着AND浓度的增加,凋亡细胞数量增多,且细胞周期被阻滞在G2期,细胞生长被抑制。Western blot结果显示,AND上调活化凋亡蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-7及促凋亡蛋白Bax的水平,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;且cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-7/caspase-7和Bax/Bcl-2的比值随AND浓度升高而增大。JC-1染色法结果表明,CEM-C1细胞的MMP随AND剂量增大而降低。体内实验结果显示,AND明显抑制荷瘤鼠的肿瘤生长,并上调肿瘤组织cleaved caspase-3的水平。结论:穿心莲内酯在体内外均抑制ALL细胞的生长并诱导其发生凋亡。