目的探讨桥尾蛋白(gephyrin)丝氨酸S270位点磷酸化在水杨酸钠(sodium salicylate,SS)介导的GABA_(A)受体(GABA type A receptors,GABA_(A)Rs)内化的作用。方法将12只SD大鼠分成4组,分别为SS处理组、LiCl处理组、SS+LiCl处理组和对照组,...目的探讨桥尾蛋白(gephyrin)丝氨酸S270位点磷酸化在水杨酸钠(sodium salicylate,SS)介导的GABA_(A)受体(GABA type A receptors,GABA_(A)Rs)内化的作用。方法将12只SD大鼠分成4组,分别为SS处理组、LiCl处理组、SS+LiCl处理组和对照组,每组3只,急性分离各组耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs),SGNs原代培养48 h后分别用5 mM SS、1 mM LiCl、5 mM SS联合1 mM LiCl处理1 h,对照组不予处理;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GABA_(A)Rsα2亚基、桥尾蛋白基因表达的改变;采用Western blot技术检测各组GABA_(A)Rsα2膜蛋白和总蛋白表达的改变、桥尾蛋白及其S270位点磷酸化的改变。结果RT-qPCR结果显示,各组GABA_(A)Rsα2亚基mRNA、桥尾蛋白mRNA与对照组比较均无明显变化(P>0.05),Western blot结果显示,SS处理组GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白(0.08±0.02)较对照组(0.18±0.04)表达显著下调(P<0.01),LiCl处理组(0.14±0.03)有效逆转SS诱导的GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白下调(SS组为0.08±0.02)(P<0.05),LiCL组膜蛋白、各组总蛋白与对照组比较无明显变化(P>0.05);SS处理组桥尾蛋白S270磷酸化(0.84±0.02)较对照组(0.35±0.14)显著增强(P<0.001)。LiCl处理组(0.66±0.10)有效逆转SS诱导的桥尾蛋白S270磷酸化增强(SS组为0.84±0.02,P<0.05),LiCl处理组桥尾蛋白磷酸化、各处理组桥尾蛋白与对照组比较无明显变化。结论桥尾蛋白S270位点磷酸化可增强参与SS诱导的SGNs GABA_(A)Rs内化。展开更多
文摘目的探讨桥尾蛋白(gephyrin)丝氨酸S270位点磷酸化在水杨酸钠(sodium salicylate,SS)介导的GABA_(A)受体(GABA type A receptors,GABA_(A)Rs)内化的作用。方法将12只SD大鼠分成4组,分别为SS处理组、LiCl处理组、SS+LiCl处理组和对照组,每组3只,急性分离各组耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs),SGNs原代培养48 h后分别用5 mM SS、1 mM LiCl、5 mM SS联合1 mM LiCl处理1 h,对照组不予处理;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GABA_(A)Rsα2亚基、桥尾蛋白基因表达的改变;采用Western blot技术检测各组GABA_(A)Rsα2膜蛋白和总蛋白表达的改变、桥尾蛋白及其S270位点磷酸化的改变。结果RT-qPCR结果显示,各组GABA_(A)Rsα2亚基mRNA、桥尾蛋白mRNA与对照组比较均无明显变化(P>0.05),Western blot结果显示,SS处理组GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白(0.08±0.02)较对照组(0.18±0.04)表达显著下调(P<0.01),LiCl处理组(0.14±0.03)有效逆转SS诱导的GABA_(A)Rsα2亚基膜蛋白下调(SS组为0.08±0.02)(P<0.05),LiCL组膜蛋白、各组总蛋白与对照组比较无明显变化(P>0.05);SS处理组桥尾蛋白S270磷酸化(0.84±0.02)较对照组(0.35±0.14)显著增强(P<0.001)。LiCl处理组(0.66±0.10)有效逆转SS诱导的桥尾蛋白S270磷酸化增强(SS组为0.84±0.02,P<0.05),LiCl处理组桥尾蛋白磷酸化、各处理组桥尾蛋白与对照组比较无明显变化。结论桥尾蛋白S270位点磷酸化可增强参与SS诱导的SGNs GABA_(A)Rs内化。
基金supported by the National Natural Science Foundation of China(No.8156017481360157)+1 种基金the Natural Science Foundation of Guangxi ProvinceChina(No.2014GXNSFAA118137)
文摘本研究旨在观察多巴胺受体(dopamine receptor,DR)是否参与水杨酸钠(sodium salicylate,SS)对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron,SGN)N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)和A型γ-氨基丁酸受体(γ-aminobutyric acid type A receptor,GABA_AR)亚单位蛋白表达的作用。原代培养大鼠SGN,用免疫荧光技术检测SGN上第一家族多巴胺受体(DR1)和第二家族多巴胺受体(DR2)的表达;分别用5 mmol/L SS、SS+DR1拮抗剂(SCH23390,20μmol/L)和SS+DR2拮抗剂(Eticlopride,20μmol/L)处理SGN后,用Western blot检测NMDA受体NR1亚单位、GABA_A受体α2亚单位(GABA_A receptor subunitα2,GABRα2)蛋白的表达。结果显示,SGN的胞体与突起均有DR1、DR2表达;SS可下调GABRα2和NR1的膜蛋白表达,但不影响二者的总蛋白表达;SCH23390和Eticlopride均能逆转SS对GABRα2和NR1膜蛋白表达的下调作用。以上结果提示,SS可影响SGN表面GABA_AR和NMDAR的转运,其作用机制涉及DR的介导作用。