变形链球菌脂磷壁酸的提取与纯化

目的:研究变形链球菌的脂磷壁酸的提取与纯化,探究脂磷壁酸在牙髓的免疫反应。方法:采用TX114法提取,DEAE-Sephace CL-6B离子交换层析纯化,从变形链球菌中提纯出细菌胞壁结构的脂磷壁酸。结果:紫外扫描的结果显示离子交换层析法能够有效地分离出脂磷壁酸和TX114,并且具有较好的纯度。结论:采用TX114提取初LTA,用阴离子交换可以得到纯度较高的LTA。

变形链球菌提取物对人牙髓细胞TOLL样受体2表达的影响

目的:探讨变形链球菌提取物对人牙髓细胞(hDPCs)TOLL样受体2(TLR2)表达的影响。方法:超声破碎法提取变形链球菌的提取物,应用体外培养技术培养hDPCs,将变形链球菌提取物按10mg/L和100mg/L浓度分组,以等体积的培养基作为空白对照组,分别作用于hDPCs 0h、24h、48h。免疫组化法检测hDPCs TLR2的表达和分布情况,实时荧光定量PCR(qPCR)检测TLR2mRNA的表达水平。结果:免疫组化结果显示,10mg/L和100mg/L组各时间点均有TLR2蛋白表达,均明显高于空白对照组(P<0.05),10mg/L组与100mg/L组各作用时间点比较,差异无统计学意义(P>0.05)。qPCR结果显示,10mg/L和100mg/L组刺激24h、48h后,TLR2 mRNA相对表达量明显升高,并且随刺激时间的延长表达量逐渐增加,均高于空白对照组(P<0.05)。结论:变形链球菌提取物可促使hDPCs TLR2表达上调,提示TLR2可能参与了牙髓的天然免疫反应。

不同微环境对牙髓再生组织的影响

目的:体外比较不同微环境下牙髓再生的能力与再生组织结构的差异。方法:根据牙根段和皮质骨段管腔中植入物的不同将32个牙根段和32个皮质骨段,随机各分为4个亚组,每个亚组8个样本,管腔内分别植入血管内皮生长因子(VEGF)复合多肽水凝胶支架、血凝块、多肽水凝胶支架及不植入任何材料的空白对照,随后植入裸鼠背部,8周后取材评价管腔内组织生长和组织结构情况。结果:牙根段和皮质骨段管腔内分别有71%和67%的样本有组织长入,再生组织均为含细胞和血管的疏松结缔组织。牙根段根管腔内再生组织中血管形成的量从多到少依次为VEGF复合水凝胶组、血凝块组、水凝胶组和空白对照组,而皮质骨段管腔内再生组织中有较丰富的血管形成,血管形成的量在VEGF复合水凝胶组、血凝块组、水凝胶组3组之间无明显差异。牙组的根管腔中可见沿着根管内壁排列的成牙本质细胞样细胞,少数细胞顶端有一细长分支伸入牙本质小管中。结论:牙根段根管腔由于牙本质的天然支架作用对微环境中的变化更为敏感,牙本质的特殊结构对再生组织的结构起到重要的作用。

体外评估hDPCs-PRF复合体内hDPCs的迁移行为

目的:在前期成功构建人牙髓细胞(hDPCs)—富血小板纤维蛋白(PRF)复合体基础上,观察hDPCs在复合体中的迁移能力。方法:采用组织块法分离培养hDPCs,制备hDPCs-PRF复合体,培养7 d、14 d、21 d后行苏木精—伊红(HE)染色,观察hDPCs的形态及迁移行为。结果:初期hDPCs-PRF复合体中,白细胞、牙髓细胞主要存在于白膜层中;随着培养时间的延长,白膜层逐渐溶解消失,白细胞及牙髓细胞沿着复合体边缘游走,hDPCs由原来的椭圆形变成长梭形。培养21 d后,显微镜下可见hDPCs-PRF复合体培养基中大量hDPCs的存在,大部分细胞生长状况良好。结论:hDPC-PRF复合体可缓慢降解并同步释放复合体内的牙髓细胞;hDPCs-PRF复合体中释放的牙髓细胞仍具有继续增殖分化的潜力。