高倍显微镜在女性性传播疾病中的临床应用

目的：探讨清华显微仪在性传播性疾病、尤其是女性性传播疾病诊断的临床应用价值。方法：应用清华大学同方公司研制生产的清华显微仪，直接取样涂片活体镜检方法，直观动态观察性传播疾病的主要病原体。结果：在３４００ 人次标本中，该方法可一次取样，无需染色，快速、准确地找到病原体。

支原体湿片镜检与培养实验结果分析

目的:拟建立多媒体显微成像分析系统在动态、活体观察性传播性疾病的主要病原体———支原体的实验方法,探讨其临床应用价值。方法:应用多媒体显微成像分析系统直接镜检动态观察支原体,并与培养法实验结果对照。结果:多媒体显微成像分析系统可以清晰地观察支原体,镜检法与培养法结果高度一致。结论:镜检方法采用直接取样涂片,无需染色,即可快速观察支原体,为临床实验室病原体检测提供一个全新的检测技术。

红细胞及血小板显微镜下聚集与心脑血管疾病的关系

目的:探讨活血镜下分析红细胞血小板聚集与心脑血管疾病的关系。方法:在患者指尖取一小滴血,制成活血片,直接置多媒体显微成像分析系统镜下观察红细胞和血小板的聚集程度。结果:病变组193例中,发生红细胞聚集的阳性率为74.6%,血小板聚集率为61.6%,对照组250例,红细胞聚集率仅为25.6%,血小板聚集率为26.8%。结论:采用多媒体显微成像分析系统镜下观察红细胞和血小板的聚集程度,可以早期发现亚健康状态的细胞流变学的改变,提供早期预防心脑血管病的发生和发展的检验数据。为心脑血管病的监测、治疗、预后及疗效观察提供一个新的早期、快速辅助的诊断方法。

海南地区Zeta链蛋白检测在东南亚型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的以α-地中海贫血基因检测结果为标准,探讨Zeta链蛋白检测在α-地中海贫血东南亚缺失型临床筛查中的应用价值。方法随机收集634例EDTA-K2抗凝全血标本,采用酶联免疫法检测人外周血细胞中Zeta链蛋白,同时提取全血DNA,采用多重PCR结合电泳法检测标本α-地中海贫血基因。结果634例全血标本经酶联免疫法检测Zeta链蛋白阳性113例,阴性521例;Zeta链蛋白阳性标本中经基因检测全部确诊为α-地中海贫血东南亚缺失型,阴性中无α-地中海贫血东南亚缺失型。Zeta链蛋白检测α-地中海贫血东南亚缺失型灵敏度为100%,特异度为100%,假阳性率0%,假阴性率0%,阳性试验的预示值100%,阴性试验的预示值100%。结论酶联免疫法检测Zeta链蛋白是一种简便、快速检测α-地中海贫血东南亚缺失型的方法,可用于临床大规模筛查。

性传播疾病病原体高倍显微镜检查结果临床分析

目的:探讨多媒体显微成像分析系统在性传播性疾病病原体诊断中的临床应用价值。方法:直接取样涂片,无需染色,应用多媒体显微成像分析系统活体动态观察检测标本。结果:支原体感染占第1位,其中包括正常带菌者,多重感染占第2位。结论:该方法的应用可快速、准确地查找性传播疾病的主要病原体。

凝血酶原时间标准化报告方式的临床应用前景

凝血酶原时间标准化报告方式的临床应用前景覃西钱士匀（海南医学院附属医院检验科）海口５７０１０２凝血酶原时间（ＰＴ）测定是临床上最常用的检测外源性凝血系统有关因子有无异常的试验，目前该实验也较多使用在心脑血管病患者口服抗凝剂治疗，以监测抗凝药物的临床治...

慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg与CD4^＋和CD8^＋ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P<0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P<0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P>0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P<0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P<0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P>0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P>0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。

方格星虫多糖体外抗乙型肝炎病毒活性的研究

以Hep G2.2.15细胞为研究模型,选用拉米夫定为阳性对照药物,采用Taqman荧光定量PCR检测细胞上清HBV DNA,ELISA检测培养上清液HBsAg、HBeAg水平的变化。采用MTT法观察它们对细胞生长的影响。发现方格星虫多糖的4个剂量组(250,125,62.5,32.3 mg/L)和所观察的时间点(3、6、9 d)对HBV DNA、HB-sAg、HBeAg表现出剂量与时间依赖的抑制作用(P<0.05)。方格星虫多糖对HBV DNA抑制的半数抑制浓度为49.48 mg/L,对Hep G2.2.15细胞半数细胞毒性浓度为250 mg/L,治疗指数为5.06。认为方格星虫多糖对培养2215细胞中呈剂量与时间依赖的抑制作用,具有较好的应用前景。

胃癌中基质金属蛋白酶、人组织激肽释放酶7和E-钙粘蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨血清中MMPS、KLK7、E-cad在胃癌患者的表达与临床病理参数间的关系,并探讨二者相关性。方法:胃癌患者50例以及50例胃良性疾患者和50例健康体检者,分别命名为实验组、胃部良性疾患组和健康体检组。实验组中有24例符合手术条件同意行胃切除术的患者,细分为术前组和术后组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胃癌患者术前术后(1月)、胃良性疾患者组、健康体检组血清中MMP-2、MMP-9、KLK7及E-cad水平,分析与各临床病理指标的相关性。结果:实验组血清KLK7及E-cad水平高于胃良性疾患组及正常体检组,差异均显著(P<0.05);实验组术后术前比较,MMP-2、MMP-9均较术前减少,KLK7及E-cad术后分别明显下降和升高,差异显著(P<0.05);实验组Ⅰ~Ⅳ期血清KLK7水平及E-cad水平随癌症的进展分别呈现升高和下降趋势,单因素方差分析结果显示,P<0.05;实验组中胃癌有无微血管转移与血清KLK7及E-cad表达水平有关(P均<0.05)。实验组的年龄分组、肿瘤大小、分化程度、浸润深度等不同病理特征的血清KLK7及E-cad水平的比较显示,KLK7及E-cad表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。胃癌患者血清KLK7及E-cad水平表达呈显著负相关(r=-0.386,P<0.01)。结论:KLK7和E-cad的表达上调或者下调都参与了胃癌的发生发展和转移过程。两者在胃癌患者血清中表达呈负相关,在胃癌发展及转移中可能存在拮抗效应。联合检测KLK7与E-cad可能对监测胃癌患者的病情及估计预后有一定帮助。

复合型医学检验人才培养的实践探索

近30年以来,高等医学检验本科教育在中国由最初的几所院校发展到80余所,招生规模也由每年100多人发展到4000～6 000人,医学检验人才竞争日趋激烈[1]。同时医学检验专业学生就业单位发生明显变化,除传统的医院检验科、血站和疾控中心外,一些新兴的单位（如试剂生产商、生物技术公司、制药企业、医疗器械生产企业和销售企业等）也需要大量研发人才、技术培训人才和销售人才，而目前的本科教育往往不能满足其要求。

方格星虫多糖抗乙型肝炎病毒的实验研究

目的进一步探讨方格星虫多糖(SNPs)治疗乙型肝炎(乙肝)的机制。方法取50只重庆麻鸭随机分为对照组、阿昔洛韦组及SNPs大、中、小剂量组各10只,均经静脉注射HBV-DNA阳性鸭血清0.2 ml/只建立乙肝模型,7 d后分别予生理盐水、阿昔洛韦及不同剂量SNPs灌胃,均为每天2次,连续给药10 d。给药前1 d、用药5 d、用药10 d及停药后3 d各组均自鸭腿胫静脉取血分离血清,采用实时定量PCR法检测HBV-DNA复制情况,计算HBV-DNA抑制率。结果SNPs不同剂量组HBV-DNA复制均有不同程度抑制(P<0.05),且大、中剂量组与阿昔洛韦组作用相似,但小剂量组反跳现象明显。结论SNPs在体内有一定抑制HBV复制作用,此为抗乙肝药物的研制提供了新思路。

急性淋巴细胞白血病患者外周血CD4^+CD25^+T调节细胞与白细胞介素2、白细胞介素10、转化生长因子β的检测

背景:目前急性淋巴细胞白血病的病因尚未完全清楚,而CD4+CD25+T调节细胞对机体的免疫反应可能起着一定的调节作用。目的:观察急性淋巴细胞白血病患者外周血CD4+CD25+T调节细胞分泌白细胞介素2、白细胞介素10及转化生长因子β的情况。方法:采用密度梯度离心法分离22例B细胞系列的急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者、13例T细胞系列的急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者和18名正常人外周血单个核细胞。采用免疫磁珠法分离出CD4+CD25+T调节细胞进行培养,同时用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中白细胞介素2、白细胞介素10及转化生长因子β的水平。结果与结论:B-ALL患者和T-ALL患者外周血CD4+CD25+T调节细胞培养上清中白细胞介素10和转化生长因子β水平显著高于正常人水平,而白细胞介素2水平显著低于正常人水平(P<0.05);B-ALL和T-ALL患者的CD4+CD25+T调节细胞培养上清中3种因子表达差异无显著性意义(P>0.05)。提示CD4+CD25+T调节细胞可能通过增加分泌白细胞介素10和转化生长因子β、减少分泌白细胞介素2等干扰抗肿瘤的免疫反应。

方格星虫多糖抗菌活性的初步研究

目的研究方格星虫多糖的抗菌活性。方法以方格星虫体壁作为试验材料,经沸水抽提、乙醇沉淀和sevage法去蛋白后得到粗多糖,再经G-50葡聚糖凝胶柱层析纯化。采用硫酸-苯酚法测定多糖的含量,以含不同浓度的方格星虫多糖(50,37.5,25,12.5mg/ml)培养基,分别接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草杆菌培养12、24、36、48h,观察并记录其生长情况。结果不同方格星虫多糖浓度(25～50mg/ml)对三种试验菌的生长均有抑制作用,浓度越高抗菌活性越强。结论方格星虫多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌埃希菌、枯草杆菌有明显的抗菌活性。

108例支气管哮喘患者MMP-9和TIMP-1血清水平变化及相关性分析

目的探讨支气管哮喘(哮喘)患者MMP-9和TIMP-1血清水平变化及其相关关系。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测52例急性哮喘患者(急性组)、56例慢性哮喘患者(慢性组)和来自同期海南医学院附属医院健康体检中心的60名健康对照者(对照组)的MMP-9和TIMP-1血清水平,并对结果进行相关分析。结果急性组、慢性组与对照组比较,MMP-9和TIMP-1血清水平明显增高(P<0.05)。MMP-9与TIMP-1血清水平存在明显的相关关系(r=0.632,P<0.05)。结论 MMP-9与TIMP-1关系密切,并且参与了气道重塑的过程,其血清水平对哮喘的病情评估具有指导意义。

细菌性阴道病的检测及其与生殖道支原体感染的关系

目的 调查研究细菌性阴道病合并支原体感染情况 ,为临床有关诊治提供依据。 方法 应用Amsel标准对 13 17例病人进行细菌性阴道病检测 ,采用快速支原体液体培养基对其中确诊的 3 5 3例细菌性阴道病患者和 15 0例健康体检者的阴道分泌物进行支原体培养。 结果 3 5 3例细菌性阴道病患者支原体感染阳性 2 19例 ,阳性率62 .0 4% ;15 0例健康体检者支原体感染阳性 17例 ,阳性率 11.3 3 % ,两者具有非常显著差异 (P <0 .0 1)。 结论 细菌性阴道病可能是支原体感染的诱因之一。细菌性阴道病合并支原体感染相当普遍 ,临床诊治时应该注意。

急性淋巴细胞白血病的免疫分型及CD4^+CD25^+T调节细胞检测

背景:在急性淋巴细胞白血病发病过程中,CD4+CD25+T调节细胞对机体免疫反应可能起着一定的调节作用。目的:观察急性淋巴细胞白血病患者的免疫分型及外周血CD4+CD25+T调节细胞的变化情况。方法:采用流式细胞仪对35例急性淋巴细胞白血病患者进行免疫分型,并检测外周血CD4+CD25+T调节细胞的数目,与18名健康对照作比较。结果与结论:急性B细胞淋巴细胞白血病22例,急性T细胞淋巴细胞白血病13例;22例急性B细胞淋巴细胞白血病中CD19的阳性表达率最高(100%),而13例急性T细胞淋巴细胞白血病中CD7阳性表达率最高(100%)。急性B细胞淋巴细胞白血病患者外周血CD4+CD25+T调节细胞和急性T细胞淋巴细胞白血病患者差异无显著性意义(P>0.05),但均高于健康对照(P<0.05)。表明急性B细胞淋巴细胞白血病中CD19阳性表达率最高,急性T细胞淋巴细胞白血病中CD7阳性表达率最高,同时急性淋巴细胞白血病患者外周血CD4+CD25+T调节细胞水平显著增高。

一种快速定量检测类鼻疽伯克霍尔德菌的方法建立及评价

目的采用实时荧光定量PCR技术,建立并评价一种快速、准确、特异检测类鼻疽伯克霍尔德菌的定量检测方法。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统保守基因序列设计引物和探针,构建重组质粒作为DNA标准品,优化荧光定量PCR体系,同时进行方法学评价,并与以16S rRNA基因为靶序列的荧光定量PCR方法进行对比。结果建立了检测类鼻疽伯克霍尔德菌的荧光定量PCR方法,其线性范围为1×101~1×1010拷贝/μL;其灵敏度为10拷贝/μL;批内变异系数（CV）为1.43%~4.6%;对用24份模拟血液标本和67份稻田土壤标本分别采用本法和对照方法进行检测,本菌配制的模拟标本采用两种方法检测均为阳性,且能准确定量,阳性率为100%,而含有其他常见感染细菌的标本检测结果均为阴性;土壤标本中有12份标本采用本法和与细菌培养法均为阳性,但是对照方法未能检测出其中两份低浓度的土壤标本。结论建立的类鼻疽伯克霍尔德菌定量PCR方法具有快速、准确、灵敏度高等特点,可作为环境中该菌检测和疫区类鼻疽病诊断的有效工具。

鼻咽癌患者外周血CD4^+CD25^(high)Treg细胞在肿瘤进展中的变化

目的观察分析鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)在肿瘤进展中的变化与意义。方法用流式细胞仪检测52例NPC患者、8例鼻咽黏膜慢性炎(nasopharyngitis,NPi)患者、7例头颈部其他癌(HNOC)患者和15例体检健康者外周血中CD3+、CD4+、CD8+T细胞和CD4+CD25highTreg比例。结果 NPC、NPi和HNOC组外周血CD4+CD25highTreg亚群均明显高于健康对照组(6.86%、6.50%、4.91%vs4.17%;U=113.50,P=0.000;Z=-2.519,P=0.011;Z=-2.328,P=0.017),尤以NPC和NPi水平为高;CD4+CD25highTreg在NPC出现淋巴结转移时明显增高(N1,12.69%vsN0,6.11%;Z=-2.904,P=0.003),病情继续进展又迅速回落(2期13.95%vs3期5.49%)。结论外周血CD4+CD25highTreg亚群升高始于NPi阶段,NPC初期无明显变化,一旦出现淋巴结转移,其明显升高达峰值,随NPC进一步进展又回落至NPi时的水平。