海南东寨港红树林植物和沉积物真菌多样性及其药用活性

目的对海南东寨港红树林3种植物和沉积物来源真菌多样性进行勘探,旨在发现潜在的真菌新物种和药用真菌。方法基于内转录间隔区(ITS)序列测定对分离得到的真菌进行初步鉴定,并对真菌发酵粗提物进行抗菌、抗新冠病毒靶标、抗结核、抗动脉粥样硬化,以及抑制胰腺癌细胞增殖的广泛活性筛选。结果从海南东寨港红树林植物和沉积物中共分离得到164株真菌,鉴定出106株,分布在17个目33个科43个属,其中优势菌群为镰刀菌属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)和曲霉属(Aspergillus),分别占总体的12.26%、12.26%和9.43%。结论初步认知了海南东寨港红树林3种植物及沉积物来源真菌的多样性,发现了一些潜在的能产生活性物质的真菌,为后续研究红树林环境来源的真菌代谢产物的化学多样性及其生物活性奠定了基础。

尿苷肽类抗生素sansanmycin E的分离、纯化和结构鉴定

目的从Streptomyces sp SS产生的尿苷肽类抗生素sansanmycins复合物中分离、提取和纯化小组分的尿苷肽类化合物,并进行结构鉴定。方法利用大孔树脂吸附、反相制备HPLC等方法进行分离纯化。利用光谱分析,进行结构解析。结果分离到一个尿苷肽类化合物sansanmycin E。结论经鉴定sansanmycin E为新结构化合物。

尿苷肽类抗生素sansanmycin D的分离、纯化和结构鉴定

目的从尿苷肽类抗生素sansanmycins的产生菌Streptomyces sp.SS的发酵液中分离、提取和纯化小组分,并进行结构鉴定。方法以铜绿假单胞菌为检定菌,利用大孔树脂吸附、反相制备HPLC等方法进行分离纯化。用光谱分析,进行结构解析。结果分离到一个尿苷肽类化合物sansanmycin D。结论Sansanmycin D与文献报道的mureidomycin A结构一致。

两株吸水链霉菌所产angustmycins的现代光谱学研究

目的研究两株吸水链霉菌所产生的angustmycins的现代光谱学。方法利用大孔吸附树脂柱层析进行分离纯化,利用MS、UV、IR、NMR、X-射线衍射进行结构鉴定。结果自吸水链霉菌241发酵液中分离得到了angustmycinA和B,自吸水链霉菌277发酵液中分离得到了angustmycinA和C;归属了angustmycinA和C的1H、13C-NMR信号峰,确定了angustmycinA的立体结构。结论吸水链霉菌241以产angustmycinA为主,吸水链霉菌277以产angustmycinC为主,并分别提供了他们的光谱数据。

一种罕见的boanmycin相关物质的分离纯化和结构测定

从boanmycin产生菌轮枝链霉菌平阳变种(Streptomyces verticillus var. pingyangensis n. sp.)发酵产物中分离、纯化boanmycin相关物质A601。对A601进行光谱分析鉴定其化学结构,结果证实A601的化学结构为博来霉素B6,并对其碳谱进行了归属。

诺卡菌属菌株04-5195发酵液中活性成分04-5195A的分离、纯化与结构鉴定

目的分离、纯化与鉴定诺卡菌属菌株04-5195发酵液中的活性成分。方法采用多种层析方法进行活性成分分离,并通过FAB-MS、1H-NMR和13C-NMR测定对其结构进行鉴定。结果分离到一个主要组分04-5195A,其结构鉴定为3,4-二氢-8-羟基异香豆素衍生物。结论主要组分04-5195A与文献的报道的amicoumacin B相同。

用灵发素建立简单高效生产半夏胚状体与组培苗的方法

目的:建立简单高效生产半夏胚状体和组培苗的方法。方法:以MS为基本培养基,分别单独添加不同浓度(0.05～2.0mg/L,单位下同)的LFS,以无菌半夏叶柄切段为继代材料,以常规配方MS+BA2.0+NAA0.1做对比。结果:MS+LFS0.1～0.5的单一培养基可诱导愈伤组织并直接获得胚状体和组培苗,显著简化生产程序,提高生产效率。以LFS0.3最佳,培养30d,增殖倍数以成品苗计达10～20;以胚状体计达30以上。小结:MS+LFS0.1～0.5的单一培养基可以简单高效地生产半夏胚状体和组培苗。

刺五加内生放线菌Streptomyces tauricus CWJ-107活性次级代谢产物研究

目的从药用植物刺五加内生放线菌Streptomyces tauricus CWJ-107次级代谢产物中发现抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)活性良好的天然产物。方法采用16S r RNA基因序列分析对菌株CWJ-107进行初步分类鉴定,大量发酵获得粗提物,通过硅胶柱层析、LH20凝胶柱层析、薄层色谱以及高效液相色谱等方法,以抗MRSA活性导向进行目标化合物的分离纯化,利用核磁共振和质谱鉴定化合物结构,并利用微孔板法测定化合物最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),对其抗MRSA活性进行评价。结果菌种鉴定结果显示菌株CWJ-107为Streptomyces tauricus,从菌株CWJ-107的菌丝体中分离得到1个抗MRSA活性化合物107-A,经波谱解析证实其结构为糖基化蒽醌类化合物cinerubin B,抗菌活性测定结果证实其具有良好的抗MRSA活性,MIC值为1μg/m L。结论从刺五加内生放线菌CWJ-107的代谢产物中分离到的107-A经结构鉴定为糖基化蒽醌类化合物cinerubin B,除此之外,本文首次报道了该化合物的抗MRSA活性。

灵发素(LFS)对诱导甘蔗愈伤组织的影响

目的:建立高效率诱导甘蔗优质愈伤组织的技术。方法:以甘蔗幼叶作外植体,MS为基本培养基,分别添加不同浓度的新型诱导剂LFS与传统的诱导剂2,4-D进行对比研究。结果:LFS 0.05～1.00 mg/L均能高效优质地诱导愈伤组织,其适宜浓度为0.20 mg/L,培养20 d,无需更换新鲜培养基,出愈率达98%,褐化、板结轻微,转绿率达16.8%,效果显著优于2,4-D。结论:LFS可以比2,4-D更高效优质地诱导甘蔗愈伤组织,并显著简化生产程序。

灵发素(LFS)对诱导半夏体细胞胚胎发生过程中一些生化指标的影响

目的探索LFS高效优质诱导半夏体细胞胚胎发生的机制。方法以半夏无菌苗叶柄切段作外植体,MS为基本培养基,比较MS+BA2,0+NAA0.1(CK)和MS+LFS0.3在诱导体细胞胚胎发生和发育过程中一些生化指标的变化差异。结果 (1)LFS显著提高体细胞胚胎发生发育过程中可溶性蛋白质、可溶性糖和淀粉等的含量,为增殖更多更壮的体胚提供物质保障。(2)LFS还显著提高SOD、POD和PPO三种抗氧化酶的活性,以利及时清除旺盛代谢产生的自由基,为体细胞胚胎的发生发育创造良好的内环境。结论 LFS能高效优质地诱导半夏体胚的发生发育,与其显著提高可溶性蛋白质、可溶性糖和淀粉的含量及提高抗氧化酶的活性密切相关。

HPLC-MS/MS法发现ssaX阻断菌株中两个尿苷肽类新化合物

目的对ssaX基因阻断菌株次级代谢产物中的sansanmycin类似物进行研究,发现新化合物。方法对Streptomyces sp.SS野生菌株及ssa X基因阻断株的发酵液分别进行固相萃取,收集60%甲醇水洗脱液进行HPLC-MS/MS分析。通过与文献报道的已知化合物数据相比较的方法,分析其中sansanmycin类化合物结构并利用MS/MS对其结构进行确证。结果从ssa X基因阻断株的发酵液中发现了8个sansanmycin类化合物,其中SS-MX-7和SS-MX-8为新结构化合物。SS-MX-7化学结构中假四肽肽链上的第一位和第四位氨基酸残基均为酪氨酸取代,而SS-MX-8的这两个位置均为苯丙氨酸。结论 ssa X基因阻断株产生的两个新sansanmycin类似物,进一步丰富了尿苷肽类化合物的结构多样性,同时也为利用HPLC-MS/MS方法在其他重组菌株中发现尿苷肽类新化合物奠定了基础。

嗜线虫致病杆菌代谢产物CB6-1的分离、纯化与结构鉴定

目的从对植物疫病有拮抗作用的嗜线虫致病杆菌北京变种(X enorhabdus nem a toph ilus var.p ek ing ensis)CB 6菌株的发酵产物中分离纯化抗菌组分,并鉴定其结构。方法采用多种层析方法对其进行分离,并采用UV、IR、M S和NM R对其进行结构鉴定。结果分离到一个主要组分CB 6-1,并鉴定其结构为3,4-二氢-8-羟基苯并吡喃衍生物。结论主要抗菌组分CB 6-1与文献报道的X encoum ac in 1相同。

刺五加内生放线菌Streptomyces sp. CWJ-256次生代谢产物研究

目的研究刺五加植物内生放线菌CWJ-256次级代谢产物及其生物活性。方法采用16S rRNA基因同源进化分析对菌株CWJ-256进行初步分类鉴定,采用抗菌活性追踪方式,对CWJ-256发酵液通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层色谱显色以及高效液相色谱等方法对目标化合物分离纯化,利用核磁共振波谱法和质谱法鉴定化合物的结构。采用MTT法测试其抗肿瘤细胞增殖活性。基于Gluc报告系统对化合物3的体外抗流感病毒药效学进行初步评价。结果菌种鉴定显示Streptomycessp.CWJ-256为生黑孢链霉菌Streptomyces melanosporofaciens;从该菌株的发酵代谢产物中分离得到3个活性化合物,经结构鉴定为efomycin G(化合物1)、11,11'-O,O-dimethylelaiophylin(化合物2)、elaiophylin(化合物3);抗肿瘤细胞增殖活性评价显示,化合物1和3对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有增殖抑制作用(IC50分别为4.385和2.118μmol/L)。体外抗流感病毒药效学评价显示,化合物3对流感病毒A/WSN/33(H1N1)具有一定抑制效果。结论刺五加内生放线菌Streptomycessp.CWJ-256可产生多个洋橄榄叶素类次生代谢产物,显示出抗细胞增殖、抗病毒等多种活性。

精胺(Spm)对灵发素(LFS)诱导罗汉果不定根形成的影响

为研究Spm对LFS诱导罗汉果不定根形成的影响,以罗汉果单芽茎切段为材料,MS为基本培养基,添加LFS0.2mg/L后,再分别添加Spm 0.0(ck),1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mg/L,培养25d。结果表明:罗汉果苗不定根的数量和粗度与Spm浓度呈正相关,而长度则呈负相关。Spm 2.5mg/L处理组的效果最佳,与ck组对比,不定根数增加1.5倍,根粗增加1.0倍,最长根长度缩短50%。可见,Spm对LFS诱导罗汉果不定根的形成有显著的改善作用,使罗汉果组培苗的整个根系表现出"多、粗、短、壮"的特点。

Sansanmycin A对铜绿假单胞菌体内外抗菌活性的初步研究

目的评价sansanmycinA对临床分离铜绿假单胞菌的体内、外抗菌活性。方法体外试验以微量肉汤稀释法测定sansanmycinA同时对照10种药物对150株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC），以平皿计数法测定最低杀菌浓度（MBC）；半体内试验以微量稀释法测定sansanmycinA的血清抑菌活性（SBS）和血清杀菌活性（SBA）。结果Sansanmycin A对铜绿假单胞菌体外抗菌活性与哌拉西林相似，其MIC50和MBC50分别为8和16μg／mL，MIC范围为2-〉512gg／mL，MBC范围为2～〉512μg／mL，头孢曲松和替卡西林对铜绿假单胞菌的MIC50和MBC50较sansanmycin A高2-4倍。Sansanmycin A对铜绿假单胞菌显示浓度依赖性杀菌作用。Sansanmycin A对铜绿假单胞菌峰时SBS和SBA中位数分别为1：256和1：128。结论SansanmycinA对铜绿假单胞菌显示较强的体外和体内杀莴活件，有讲一步研究和开发的价佰。

刺五加内生放线菌Planomonospora sp.12代谢产物研究及其菌种鉴定

目的分离、纯化及鉴定放线菌株12发酵液中抗菌活性代谢产物并对菌株12进行菌种鉴定。方法采用硅胶柱层析、高效液相色谱等方法对菌株12的活性代谢产物进行分离纯化及纯度分析,并以质谱、核磁等方法对获得的组分进行结构鉴定;采用16s r RNA基因序列检测并构建进化树对菌株进行鉴定。结果从菌株12的发酵液中分离到1个活性化合物12-A,经波谱分析证实其结构和硫肽类化合物siomycin A相同,活性测定表明其对革兰阳性菌、真菌有较明显的抑制活性;经菌种鉴定,菌株12归为Planomonospora属放线菌。结论从菌株12的发酵液中分离得到的化合物12-A为已知化合物siomycin A。

西藏沙棘根瘤及根际土壤放线菌分离及抗菌活性研究

探索西藏林芝与山南地区沙棘根瘤及其根际土壤样品中放线菌的多样性及抗菌活性,为天然产物药物研发提供新的微生物资源。采用稀释涂布法对10份样品中可培养放线菌进行分离,后经菌株16S rRNA序列测序,以邻接法(neighbor-joining method,N-J)构建系统发育树分析放线菌种属多样性;利用微孔板法对代表性菌株进行发酵培养及抗菌活性评价;进一步利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)考察活性菌株代谢产物情况。从10份样品中分离到112株放线菌,分属于7个目12科23个属,优势菌属为链霉菌属(Streptomyces);抗菌活性结果表明有17株放线菌至少对一种检定菌有抗菌活性,阳性抑菌率为36.9%。有16株放线菌对临床常见的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)有较强抑制活性,其中13株放线菌对MRSA抑制率超过阳性对照药万古霉素;另外有7株放线菌对耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)有抑制活性,其中Streptomyces sp.XZ19-363对CRAB抑菌作用最强,抑制率为91.3%,UPLC-MS分析显示,具有广谱抗菌活性的菌株在不同培养基中产生了较为丰富的次级代谢产物。西藏林芝与山南地区沙棘根瘤及其根际土壤中可培养放线菌资源丰富多样,同时具有较好的抗菌活性且代谢产物丰富。

基因组信息指导下茂源链霉菌代谢产物研究

目的在基因组信息指导下,研究茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis US-43的代谢产物。方法采用16S r RNA基因序列分析对菌株US-43进行初步分类鉴定,应用anti SMASH分析菌株US-43的基因组序列并预测其可能含有的代谢产物;采用正向硅胶柱色谱、凝胶柱色谱以及高效液相色谱等分离技术对该菌株的代谢产物进行分离纯化,利用核磁共振和质谱鉴定化合物结构;通过改变培养条件对其发酵稳定性进行考察,通过HPLC-UV方法建立标准曲线,研究代谢产物的产量。结果在基因组信息指导下从茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis US-43中分离鉴定了一个α-吡啶酮类化合物杀粉蝶菌素A1,且该菌株的发酵稳定性良好,最高产量为144mg/L。结论茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis US-43能够稳定产生杀粉蝶菌素A1。

产抗生素siomycin A放线菌株13-12抗菌活性探究及菌种鉴定

采用平板纸片法测定药用植物刺五加内生放线菌菌株13-12发酵液抑菌活性及稳定性;PCR扩增、克隆并测序分析菌株活性物质合成相关功能基因;并通过生理生化、培养特征及16SrRNA进行分类鉴定。结果表明:菌株13-12发酵液对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、草分枝杆菌、MRSA均有不同程度的抑制作用,在4～20℃、pH6.0～8.0及光照48h条件下发酵液抑菌活性稳定;菌株基因组含有NRPS、Halo基因;通过菌株表型特征及分子特征初步鉴定该放线菌为游动单胞菌属(Planomonospora)有效发表种球形浮游动单胞菌(Planomonospora sphaerica)的一个菌株。菌株有合成β-内酰胺类抗生素等多种活性物质的潜能,具有进一步开发利用价值。

灵发素(LFS)诱导烟草叶片愈伤组织的研究

[目的]研究LFS诱导烟草叶片愈伤组织的生物活性和使用浓度;[方法]以MS为基本培养基,添加不同浓度LFS配制成诱导培养基,以烟草幼叶切片作外植体,进行愈伤组织诱导;[结果]1)LFS 0.05~2.00mg/L皆表现出诱导烟草叶片愈伤组织的生物活性;2)最适浓度为1.50mg/L,10d出愈率48%,20d达100%。愈伤组织的褐化与板结程度轻微,每瓶平均鲜重产量为8.3g,而ck组只有1.7g;[结论]LFS作为单一诱导剂添加于MS可以快速、优质、高效地获得烟草叶片愈伤组织。