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红花细胞培养物化学成分研究 被引量:1
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作者 谭圳 陈日道 +2 位作者 解可波 杨林 戴均贵 《中国医药生物技术》 2016年第4期319-323,共5页
目的研究红花细胞培养物的化学成分。方法采用固体MS培养基,对红花细胞进行放大培养,通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备HPLC等方法对红花细胞培养物的化学成分进行分离纯化,质谱和核磁共振等波谱方法进行化学成分的结... 目的研究红花细胞培养物的化学成分。方法采用固体MS培养基,对红花细胞进行放大培养,通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备HPLC等方法对红花细胞培养物的化学成分进行分离纯化,质谱和核磁共振等波谱方法进行化学成分的结构鉴定。结果从红花细胞培养物中分离并鉴定了12个化合物,分别是豆甾-5-烯-3β,7β-二醇、豆甾-5-烯-3β,7α-二醇、豆甾-5,22-二烯-3β,7β-二醇、豆甾-5,22-二烯-3β,7α-二醇、十六烷酸甘油酯、丁香酸甲酯、3,5-二甲氧基-对羟基苯甲醛、对羟基苯甲醛、对羟基苯甲酸、N-阿魏酸酰-对羟基苯乙胺、芥子酸乙酯、丁香脂素。结论化合物豆甾-5-烯-3β,7β-二醇、豆甾-5-烯-3β,7α-二醇、豆甾-5,22-二烯-3β,7β-二醇、豆甾-5,22-二烯-3β,7α-二醇、丁香酸甲酯、3,5-二甲氧基-对羟基苯甲醛、N-阿魏酸酰-对羟基苯乙胺、芥子酸乙酯均为首次从红花植物中分离得到。 展开更多
关键词 红花 细胞培养技术 化学成分
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新颖糖基转移酶对抗菌药物金霉素的糖基化修饰
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作者 戴舒远 赵锡澍 +2 位作者 解可波 王霞 戴均贵 《中国医药生物技术》 2017年第3期221-226,共6页
目的发掘新颖糖基转移酶并对金霉素进行糖基化修饰。方法对来源于木立芦荟的重组糖基转移酶进行金霉素糖基化功能筛选,发现重组AaGT1能催化金霉素与葡萄糖糖基供体进行反应。放大反应液经乙酸乙酯萃取去除未反应底物,剩余含糖基化产物... 目的发掘新颖糖基转移酶并对金霉素进行糖基化修饰。方法对来源于木立芦荟的重组糖基转移酶进行金霉素糖基化功能筛选,发现重组AaGT1能催化金霉素与葡萄糖糖基供体进行反应。放大反应液经乙酸乙酯萃取去除未反应底物,剩余含糖基化产物的水相部分采用反相半制备HPLC技术进行分离纯化。通过质谱和核磁共振波谱等技术对产物结构进行鉴定;对底物与糖基化产物的水溶性进行测定,并评价两者抑菌活性。结果糖基转移酶AaGT1催化金霉素获得两个金霉素异构体的糖基化产物,异金霉素10-O-β-D-葡萄糖苷和4-差向异金霉素10-O-β-D-葡萄糖苷。异金霉素10-O-β-D-葡萄糖苷的水溶性是盐酸金霉素水溶性的3.3倍;糖基化产物对金黄色葡萄球菌没有明显的抑制活性。结论糖基转移酶AaGT1对金霉素能够进行糖基化,产物异金霉素10-O-β-D-葡萄糖苷和4-差向异金霉素10-O-β-D-葡萄糖苷均为新化合物,对底物进行糖基化修饰能提高其水溶性。 展开更多
关键词 金霉素 糖基化 糖基转移酶 木立芦荟
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4'-去甲基表鬼臼毒素的酶法糖基化 被引量:1
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作者 解可波 陈日道 +2 位作者 张玉娇 陈大伟 戴均贵 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2323-2328,共6页
4'-去甲基表鬼臼毒素(4'-demethylepipodophyllotoxin,DMEP)的糖苷衍生物具有多种药理活性,但其化学合成面临位置及立体选择性和基团的保护与脱保护等诸多挑战。该研究从库拉索芦荟Aloe barbadensis中克隆得到1个新颖糖基转移酶... 4'-去甲基表鬼臼毒素(4'-demethylepipodophyllotoxin,DMEP)的糖苷衍生物具有多种药理活性,但其化学合成面临位置及立体选择性和基团的保护与脱保护等诸多挑战。该研究从库拉索芦荟Aloe barbadensis中克隆得到1个新颖糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)基因Ab GT5,并成功进行了外源表达及蛋白纯化。重组Ab GT5能够催化4'-去甲基表鬼臼毒素进行糖基化,获得的产物经MS,~1H-NMR,^(13)C-NMR,HSQC以及HMBC等波谱技术鉴定为4'-去甲基表鬼臼毒素-4'-O-β-D-葡萄糖苷。酶学性质研究发现AbGT5的最适反应温度为20℃,最适pH 9.0,且不依赖金属离子。在最适反应条件下,4'-去甲基表鬼臼毒素的转化率可达80%。该研究表明利用新颖糖基转移酶AbGT5可实现4'-去甲基表鬼臼毒素的高效酶法糖基化,为其糖基化提供新方法。 展开更多
关键词 糖基转移酶 酶法糖基化 工具酶 4'-去甲基表鬼臼毒素 库拉索芦荟
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八角莲愈伤组织中开环异落叶松脂素脱氢酶基因克隆、表达及功能鉴定 被引量:1
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作者 沈云 陈日道 +2 位作者 解可波 邹建华 戴均贵 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期4568-4571,共4页
开环异落叶松脂素脱氢酶(secoisolariciresinol dehydrogenase,SDH)是鬼臼毒素(podophyllotoxin)生物合成途径中的关键酶。该研究通过基于SDH基因保守性序列的同源PCR方法,结合快速扩增c DNA末端(RACE)技术从八角莲Dysosma versipellis... 开环异落叶松脂素脱氢酶(secoisolariciresinol dehydrogenase,SDH)是鬼臼毒素(podophyllotoxin)生物合成途径中的关键酶。该研究通过基于SDH基因保守性序列的同源PCR方法,结合快速扩增c DNA末端(RACE)技术从八角莲Dysosma versipellis愈伤组织中克隆得到2个SDH候选基因SO282和SO1223,并实现了以上基因在大肠杆菌中的可溶性表达。体外酶活性分析表明重组SO282具有SDH活性,为后续研究八角莲中鬼臼毒素的生物合成奠定了基础。 展开更多
关键词 八角莲 开环异落叶松脂素脱氢酶 鬼臼毒素 生物合成
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毛霉对柚皮素的硫酸酯化
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作者 阮飞盈 陈日道 +5 位作者 李建华 张敏 解可波 王琰 冯茹 戴均贵 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2039-2042,共4页
利用一株毛霉属真菌Mucor sp.对柚皮素(1)进行生物转化,通过各种色谱技术得到3个O-硫酸酯化产物(2~4),经LC-MS^n-IT-TOF和NMR等波谱手段鉴定出化合物2为柚皮素7-O-硫酸酯,化合物3为柚皮素4′-O-硫酸酯,化合物4为柚皮素5-O-硫... 利用一株毛霉属真菌Mucor sp.对柚皮素(1)进行生物转化,通过各种色谱技术得到3个O-硫酸酯化产物(2~4),经LC-MS^n-IT-TOF和NMR等波谱手段鉴定出化合物2为柚皮素7-O-硫酸酯,化合物3为柚皮素4′-O-硫酸酯,化合物4为柚皮素5-O-硫酸酯。这些结果可为哺乳动物/人体对柚皮素的代谢研究提供参考。 展开更多
关键词 柚皮素 毛霉 硫酸酯化
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紫金牛中一个新颖底物杂泛性O-甲基转移酶
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作者 刘琦 闫锐琪 +4 位作者 谢冰寒 隋颂扬 解可波 戴均贵 杨林 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1372-1382,共11页
O-甲基转移酶(O-methyltransferases,OMTs)是许多天然产物生物合成途径中的关键后修饰酶之一,O-甲基化不仅可降低化合物的化学反应活性,而且能显著改善其溶解性、稳定性等理化性质和生物活性等。本研究根据紫金牛转录组测序结果,首次从... O-甲基转移酶(O-methyltransferases,OMTs)是许多天然产物生物合成途径中的关键后修饰酶之一,O-甲基化不仅可降低化合物的化学反应活性,而且能显著改善其溶解性、稳定性等理化性质和生物活性等。本研究根据紫金牛转录组测序结果,首次从紫金牛中克隆获得1条OMT基因(命名为AjOMT1),并成功进行了大肠杆菌异源表达,体外酶催化活性结果表明重组AjOMT1能高效催化槲皮素发生O-甲基化反应。底物谱考察结果表明,AjOMT1能催化黄酮类、茋类、香豆素类、生物碱类、苯丙素类等不同结构类型的化合物进行甲基化反应,具有非常宽泛的底物谱;AjOMT1偏好于具邻二酚羟基的化合物,并表现出位置选择性。本研究结果表明,AjOMT1可用作O-甲基化工具酶实现不同类型化合物的O-甲基化、获取多样化的活性甲基化产物,可为药物发现提供新方法,并可为天然产物合成生物学研究提供普适性元件。 展开更多
关键词 紫金牛 O-甲基转移酶 O-甲基化 底物杂泛性 位置选择性
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重组人源葡萄糖醛酸转移酶表达系统的构建及应用
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作者 陈赟 解可波 +5 位作者 陈日道 陈大伟 刘继梅 韩耀天 刘雨雨 戴均贵 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1727-1738,共12页
新药研发过程中候选药物的体外代谢研究十分重要,肝微粒体等传统模型存在诸多不足,而重组人源药物代谢酶系体外模型因其来源便捷、活性稳定且成本较低等优势被认为是重要、有效的手段而获得广泛使用。本研究从人源肝脏cDNA中克隆得到6... 新药研发过程中候选药物的体外代谢研究十分重要,肝微粒体等传统模型存在诸多不足,而重组人源药物代谢酶系体外模型因其来源便捷、活性稳定且成本较低等优势被认为是重要、有效的手段而获得广泛使用。本研究从人源肝脏cDNA中克隆得到6条人源葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGTs)基因(UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9和2B7),并分别在酿酒酵母和杆状病毒侵染的昆虫细胞中进行外源表达。UGT1A1、1A3、1A6和1A9在酵母中成功表达,对多种不同结构类型的底物表现出葡萄糖醛酸化活性,但活性较低。以昆虫粉纹夜蛾Trichopolusia ni胚胎细胞系BTI-TN5B1-4(High Five)为宿主时,6条UGT基因均能成功表达,且活性明显高于前者。昆虫细胞表达的重组人源UGTs均能催化其特异性底物进行葡萄糖醛酸化,并首次实现了葡萄糖醛酸化产物的毫克级规模制备,产率为13%~66%,产物结构均经MS、1H NMR和13C NMR等波谱技术确定。上述结果表明,本研究构建的重组人源UGT酿酒酵母与昆虫细胞表达系统可用于新药研发早期阶段的体外代谢评价,同时为药物葡萄糖醛酸化代谢产物的合成提供了新方法。 展开更多
关键词 人源葡萄糖醛酸转移酶 杆状病毒侵染的昆虫细胞表达系统 外源表达 酶法合成 药物代谢
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Three new compounds from endophytic fungus Periconia sp.F-31
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作者 Jimei Liu Minghua Chen +4 位作者 Ridao Chen Kebo Xie Dawei Chen Shuyi Si Jungui Dai 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2020年第4期244-251,共8页
Three new compounds(1–3), including a chlorine-containing dihydroisocoumarin pericochlorosin A(1), a chlorinated phenol pericochlorosin B(2) and a decalin derivative pericoannosin G(3), were isolated from endophytic ... Three new compounds(1–3), including a chlorine-containing dihydroisocoumarin pericochlorosin A(1), a chlorinated phenol pericochlorosin B(2) and a decalin derivative pericoannosin G(3), were isolated from endophytic fungus Periconia sp. F-31 of the medicinal plant Annona muricata. The structures and absolute configurations were elucidated by extensive spectroscopic methods and calculated electronic circular dichroism analysis. Compound 2 displayed potent anti-HIV activity with IC50 value of 2.2 μM. 展开更多
关键词 Endophytic fungus Periconia Pericochlorosin Pericoannosin
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Biocatalytic bis-C-alkylation of phenolics using one-pot cascades with promiscuous C-glycosyltransferase and prenyltransferase
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作者 Dawei Chen Lili Sun +3 位作者 Ridao Chen Kebo Xie Lin Yang Jungui Dai 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2018年第4期241-250,共10页
C-glycosylation and C-prenylation are two important C-C-bond forming reactions for preparation,diversification and structural modification of natural/unnatural products with pharmacological activities.Here,we describe... C-glycosylation and C-prenylation are two important C-C-bond forming reactions for preparation,diversification and structural modification of natural/unnatural products with pharmacological activities.Here,we described unprecedented enzymatic cascades to C-glycosylate/prenylate different acyl resorcinol derivatives in stepwise,one-pot reactions by combining two promiscuous enzymes,MiCGT,a C-glycosyltransferase,and AtaPT,a prenyltransferase.Five novel bis-C-alkylated products were obtained and structurally identified by MS and NMR spectroscopic data as well as comparison with the literature.This study provided a potential synthetic strategy for synthesizing structurally novel and diverse compounds bearing both C-glycosyl and C-prenyl moieties by a two-step,enzymatic bis-C-alkylation. 展开更多
关键词 Bis-C-alkylation Enzymatic glycosylation Enzymatic prenylation Enzyme cascades
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