新疆地区燕麦草饲料主要营养成分相关性分析

文章利用近红外光谱检测法,探究新疆燕麦草饲料营养成分中干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、粗灰分(Ash)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、淀粉(Starch)、钙(Ca)、镁(Mg)、磷(P)、钾(K)含量之间的相互关系,建立燕麦草营养成分之间不同变量的预测回归模型。结果显示:燕麦草营养成分中DM、ADF及NDF含量具有显著正相关性(P<0.001);ADF含量与NDF含量之间呈高度相关性(R^(2)=0.919,P<0.001);ADF含量与DM含量具有一定相关性(R^(2)=0.692,P<0.001);DM含量与ADF、NDF含量间呈正相关(R^(2)=0.700,P<0.001),拟建立燕麦草饲料中DM、ADF、NDF含量的有效估测模型。研究表明,构建预测模型方便快速、有效地测定新疆地区燕麦草饲料NDF、ADF含量,为其营养成分的探究提供参考。

哈萨克羊INHβA基因克隆及生物信息学分析

试验旨在克隆哈萨克羊抑制素βA(inhibin beta A,INHβA)基因序列,并探究其序列特征及编码蛋白的结构和功能。根据GenBank中绵羊INHβA基因序列(登录号:NM_001009458.1)设计1对特异性引物,通过RT-PCR方法对哈萨克羊INHβA基因进行扩增,将获得的INHβA基因片段插入到pMD19-T载体中进行克隆测序,并结合生物信息学方法预测和分析其核苷酸序列、氨基酸序列、蛋白跨膜、蛋白修饰位点及二级结构、三级结构模型等。结果显示,哈萨克羊INHβA基因长1 278 bp,编码425个氨基酸。哈萨克羊INHβA基因与绵羊、牛、野猪、小鼠、人、大鼠、猫、兔、马的同源性分别为98.6%、97.7%、90.4%、87.9%、91.1%、88.2%、91.8%、89.8%和91.8%,表明INHβA基因在不同物种之间具有较高的保守性。INHβA蛋白分子式为C_(2072)H_(3325)N_(603)O_(628)S_(26),分子质量为47.57 ku,理论等电点(pI)为7.87,不稳定系数为66.16,脂溶指数为78.47,亲水值为-0.507。INHβA是一种碱性不稳定的亲水性脂溶性蛋白,没有跨膜结构,含有信号肽。二级结构预测显示,INHβA蛋白α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占22.59%、4.47%、54.12%和18.82%。三级结构预测显示,INHβA蛋白以α-螺旋为主,是含有8种蛋白修饰位点的β-桶状蛋白。本试验结果为深入研究哈萨克羊INHβA蛋白功能及探讨INHβA基因对提高哈萨克羊繁殖力的影响提供参考数据。

北疆地区某规模化牛场奶牛子宫内膜炎发病规律调查分析

为了解北疆地区某规模化牛场奶牛子宫内膜炎发病规律,试验统计了该场2016—2020年各月份、胎次、产奶量、不同分娩情况、不同发病原因奶牛子宫内膜炎的发病率,同时对子宫内膜炎的发病率与胎次、产奶量、分娩情况和发病原因进行相关性分析。结果表明:7—9月份(夏季)和1—2月份(冬季)是奶牛子宫内膜炎高发月份;3胎奶牛子宫内膜炎的平均发病率最高,为49.86%;产奶量>7000 kg奶牛子宫内膜炎的平均发病率最高,为44.05%,产奶量越高,发病率越高;早产奶牛的子宫内膜炎平均发病率最高,为47.66%;病原微生物是引起奶牛子宫内膜炎的主要原因。不同产奶量、不同分娩情况与奶牛子宫内膜炎的发病率分别呈极强正相关、强正相关,而不同胎次、不同发病原因与奶牛子宫内膜炎的发病率均呈弱负相关,其中夏冬季、3胎、高产奶牛和病原微生物是引起奶牛发生子宫内膜炎的主要原因。说明在生产中应加强产犊时间调控、高产奶牛产后能量供应、早产奶牛产后护理及消毒,减少奶牛子宫内膜炎的发病率。

抑制素α主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响

为了研究抑制素α(INHα)主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响,本试验在对抑制素α重组质粒表达菌株进行诱导表达的基础上,将经纯化、鉴定的抑制素α重组蛋白免疫接种新疆双峰骆驼,制备驼抗抑制素α多克隆抗体,并对其进行纯化,检测抗体效价,验证抗体的特异性。之后选择3~5岁、发情时间相近并处于间情期的45只成年哈萨克羊随机分为3组,分别作为抑制素α多克隆抗体免疫组(A组)、抑制素α重组蛋白免疫组(B组)及对照组(C组),每隔10 d连续进行3次加强免疫,应用ELISA法检测在绵羊繁殖活动中具有重要功能的5种生殖激素:促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮素(P 4)、雌激素(E 2)、抑制素(INH),并检测血液生化指标。结果显示,IPTG的最佳诱导浓度是0.6 mmol/L,在4 h时诱导出产量较高的抑制素α包涵体蛋白,纯化后的抑制素α重组蛋白纯度较高,并具有较好的免疫原性,经进一步验证发现,制备的抑制素α抗体效价为1∶512000,该抗体可与抑制素α重组蛋白特异性结合。说明成功制备了具有免疫原性的抑制素α重组蛋白和高效价的驼抗抑制素α多克隆抗体。免疫后A组LH、P 4含量和B组FSH、LH、P 4、E 2、INH含量与C组相比差异不显著(P>0.05),而A组FSH含量和E 2含量显著高于C组(P<0.05),INH含量显著低于C组(P<0.05)。通过血液生化指标检测发现,抑制素α蛋白和抑制素α抗血清两种免疫制剂免疫后,试验动物均没有出现不良症状。说明两种抑制素α抗原均可对哈萨克羊血液生殖激素的分泌产生良好效果,相比之下抑制素α抗血清免疫效果更佳。

新疆不同地区全株玉米青贮品质对比研究

试验旨在比较新疆不同地区全株玉米青贮品质的差异。采集2020和2021年度新疆规模化牧场所在的7个区域共计338份全株玉米青贮样品,对干物质(DM)、淀粉、粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)以及乳酸、乙酸、氨态氮等营养和发酵指标进行检测。结果显示:阜康地区全株玉米青贮的DM含量最高,显著高于呼图壁、乌拉泊、阿克苏、奎屯地区(P<0.05);呼图壁地区青贮的CP含量最高,显著高于阿克苏、奎屯和克拉玛依地区(P<0.05);青贮淀粉含量以沙湾地区为最高,其次是沙湾地区,二者显著高于呼图壁、乌拉泊、阿克苏和奎屯地区(P<0.05)。呼图壁、阿克苏、奎屯地区的NDF含量显著高于乌拉泊和沙湾地区(P<0.05)。发酵指标方面,乳酸含量最高的为乌拉泊地区,显著高于其他地区(P<0.05)。奎屯地区乙酸含量最高,其次是乌拉泊地区,二者显著高于其他产地(P<0.05)。阜康地区氨含量最高,显著高于除奎屯之外的其他地区(P<0.05)。研究表明,阜康、沙湾、克拉玛依地区的青贮综合营养指标高于其他地区,乌拉泊地区青贮发酵指标明显优于其他地区。

哈萨克羊抑制素α基因原核表达载体的构建及其诱导表达

本实验以新疆哈萨克羊睾丸组织为实验材料,提取组织总RNA,经反转录得到c DNA并以此为模板,用以Gen Bank(NM_001308579.1)序列为参考设计的特异性引物进行PCR扩增,之后将扩增产物与p ET32a(+)载体相连,构建重组质粒p ET32a(+)-INHα。将构建好的重组质粒转化到受体菌E.coli BL21中,经IPTG诱导,表达p ET32a(+)-INHα重组蛋白。对扩增产物的测序鉴定结果显示INHα基因克隆成功;经过酶切和测序鉴定确定准确构建了p ET32a(+)-INHα重组载体;经Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定,检测到INHα基因编码区全序列表达的重组蛋白单一条带,这说明原核表达载体构建成功并在原核细胞中正常表达,这为今后绵羊INHα基因的免疫功能研究提供了参考依据。

新疆部分地区9个奶牛场致奶牛乳房炎主要病原菌的检测与药敏试验

[目的]为了了解新疆部分地区9个规模化奶牛场奶牛乳房炎的发病情况和致乳房炎主要病原菌的流行现状。[方法]本研究通过对新疆部分地区9个规模化奶牛场进行现场流行病学调查并结合实验室检查。对新疆部分地区9个规模化奶牛场中临床型乳房炎与隐性乳房炎牛只进行了病原菌的分离鉴定和耐药性分析,应用敏感药物进行了药敏试验。共采集奶样1236份,通过在甘露醇高盐琼脂平板、麦康凯琼脂平板、脱纤维无菌绵羊血琼脂平板上对样品连续划线培养后并结合涂片、染色、镜检中共分离出疑似葡萄球菌742株、革兰氏阴性杆菌531株、链球菌371株。初步判定金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌等是引起新疆部分地区奶牛乳房炎的主要病原菌。[结果]最后通过特异性引物的PCR鉴定结果,最终获得371株金黄色葡萄球菌、297株大肠杆菌、112株无乳链球菌。[结论]药敏结果显示这三种病原菌对头孢噻肟、环丙沙星药物高度敏感。可为新疆部分地区奶牛场防治乳房炎的临床用药提供一定的理论依据。

不同垫料类型对奶牛乳房炎感染影响的比较分析

持续3个月采集3种不同垫料类型的规模奶牛场泌乳牛奶样4 877头份进行DHI分析,结果表明:稻壳垫料的牧场、牛粪再生系统垫料牧场、室外散栏风积沙垫料牧场的泌乳牛乳房炎新感染率差异极显著(P<0.01),体细胞数评分差异极显著(P<0.01);稻壳垫料卧床牛只乳房炎新感染、慢性感染,体细胞数评分明显低于其他类型垫料的牧场;牛粪再生系统垫料卧床能有效控制乳房炎的新感染以及慢性感染发生,也能够满足奶牛健康养殖的需要。

北疆某规模化奶牛场犊牛感冒发病情况分析

研究旨在了解北疆某规模化奶牛场2020—2022年6月的犊牛感冒发病情况及诱发犊牛感冒的主要风险因素。试验通过整理该牛场2020—2022年6月的犊牛感冒临床病例记录及其背景调查,初步统计分析主要相关风险因素。结果显示,该奶牛场2020年、2021年以及2022年(1~6月)犊牛感冒的发病率分别为16.09%(65/404)、10.96%(49/447)和8.34%(15/180)。2021年春、冬两季的犊牛感冒发病头数低于2020年春、冬季,2022年春、夏两季的犊牛感冒发病头数低于2020年、2021年。2020—2022年6月期间饲养于犊牛岛的1~4周龄的犊牛在春、冬两季的感冒发病头数稍多于同饲养阶段的其他两季,饲养于半开放式牛棚的犊牛在夏季的感冒发病头数明显多于其他季节,饲养于犊牛岛的0~1周龄的犊牛在不同季节的感冒发病头数均低于其他饲养阶段牛群。研究表明,该奶牛场2020—2022年6月犊牛感冒发病情况虽有好转趋势,但经初步分析认为仍存在犊牛饲养密度较大、转群适应期犊牛保健不规范等主要风险因素,可能诱发犊牛感冒。

新疆某地区牛场乳房炎流行调查及病原分离、药敏试验

试验旨在调查新疆地区牛场乳房炎的流行情况,采用临床诊断法及隐性乳房炎试剂诊断法抽取108头奶牛统计乳房炎发病率,并对该场两批奶牛(4月份305头,6月份323头)进行体细胞检测;经分离培养,从43份可疑奶样中分离到36株菌株进行药敏试验。结果显示:按乳区统计,临床乳房炎患病率为10.19%,隐性乳房炎阳性率为34.26%。试验期间检测其中两批奶样的体细胞数,第一次测定奶样中平均体细胞数为73.28万,体细胞数大于等于40万占比为81.31%(248/305);经过2个月治疗之后进行第2次测定,其平均体细胞数为56.25万,体细胞数大于等于40万占比为78.33%(253/323)。奶牛乳房炎的主要致病菌为葡萄球菌、链球菌,其中葡萄球菌分离率最高;分离的菌株主要对头孢类、四环素类药物具有较强的敏感性。研究表明,新疆该地区隐性奶牛乳房炎发病率较高,可用头孢类药物进行治疗。

不同制冷模式对生鲜乳温度、酸度、菌落总数的影响

[目的]生鲜乳的冷却是牛奶安全生产的重要环节,比较不同制冷模式对生鲜乳品质的影响非常重要。[方法]本项目对比了速冷和直冷两种生鲜乳制冷模式对生鲜乳冷却时间、温度、酸度、菌落总数的影响,以期为更好地利用和推广生鲜乳速冷技术提供参考。[结果]速冷模式可以在1~3 min内将生鲜乳温度冷却至4℃,效率远高于常规直冷模式,综合经济效益显著;在奶罐温度保持上,在4 h内速冷模式下,生鲜乳温度(5.12℃)、酸度(13.47 OT)、菌落总数(1.58 CFU/mL)极显著优于直冷模式的温度(5.55℃)、酸度(12.92 OT)、菌落总数(4.06 CFU/mL);对温度、酸度、菌落总数双变量相关分析结果表明,在直冷模式下,温度与酸度、菌落总数相关性不显著;在速冷模式下,温度与酸度呈显著的负相关性,与菌落总数无显著相关性。[结论]采用速冷模式可有效降低菌落总数,减少微生物繁殖,保障生鲜乳的质量,综合效益显著,为传统牧场奶厅改造,保障优质乳生产提供了可行性方案。

新疆地区3个规模化奶牛场乳房炎致病菌的分离鉴定与药敏试验

奶牛乳房炎是奶牛最常见的疾病之一,给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失。为了了解新疆地区规模化奶牛场奶牛乳房炎的发病情况和主要病原菌的流行情况。本研究通过现场流行病学调查和实验室检查,对新疆3个规模化奶牛场中临床型乳房炎牛只进行了病原菌的分离鉴定和耐药性分析。共采集体细胞数≥500万个/mL的奶样243份,通过在麦康凯琼脂平板、伊红美兰琼脂平板上对样品连续划线培养并结合涂片、染色、镜检,共分离出疑似革兰氏阴性肠杆菌231株。初步判定大肠杆菌是引起3个规模化奶牛场奶牛临床型乳房炎的主要病原菌。结果为:通过PCR鉴定,获得187株大肠杆菌,分离率达77%;大肠杆菌对头孢噻肟、链霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星高度敏感。

牛催乳素基因多态性的研究进展

催乳素是奶牛垂体分泌的一种多肽类激素,具有启动和维持泌乳,促进乳腺和性腺发育的功能。研究表明奶牛催乳素基因存在多态性,且与奶牛泌乳性状密切相关。本文对近十年来奶牛牛催乳素基因结构与功能、基因多态性及其研究方法进行了总结分析,以期为催乳素及催乳素基因的多态性研究提供参考。

南疆某地区奶牛催乳素基因外显子3基因多态性分析

乳牛产奶性状是其最重要的经济性状,受到多种因素的影响,众多研究表明,牛催乳素基因多态性与产奶相关性状有关。【目的】【方法】本研究采用PCR-SSCP方法以及Sanger测序法对新疆南疆某地区奶牛群体中催乳素基因外显子3进行遗传多态性分析,旨在分析其与产奶相关性状的关系,以期为该区奶牛分子标记辅助选择育种提供理论依据。【结果】结果表明该区奶牛群体中催乳素基因外显子3未发现多态性,与泌乳性状不相关,预测氨基酸序列与对比序列一致。对催乳素分泌量分析结果显示,在泌乳90d时,高产组和中产组均显著低于低产组(P <0.05);而在泌乳210d时,高产组显著低于中产组(P <0.01)。进一步对催乳素分泌量与产奶性状之间进行关联分析显示,催乳素分泌量与泌乳各性状之间相关性处于中度相关。【结论】这些结果表明在牛南疆奶牛中催乳素基因外显子3遗传稳定性较高,催乳素分泌量与产奶性状存在相关性,提示其可能通过外显子3以外的其他编码区域影响奶牛产奶性状。

抑制素α基因诱导表达及其多克隆抗体的制备

目的为获得诱导表达的绵羊卵泡抑制素基因蛋白及其多克隆抗体。方法试验首先对绵羊卵泡抑制素α基因原核表达产物进行诱导表达及可溶性分析,其次运用以镍柱亲层析和尿素透析的方法收集其表达蛋白并用弗氏佐剂对其进行乳化,最后将乳化后的蛋白免疫制剂对新疆双峰骆驼进行多次加强免疫,以获得卵泡抑制素α基因多克隆抗体。结果绵羊卵泡抑制素α基因原核表达产物在IPTG诱导作用下呈包涵体形式存在,蛋白纯度较高,免疫后血清抗体效价为5.12×10^6,SDS-PAGE电泳分析结果显示,在39 ku有常规抗体的条带存在,在26 ku处存在纳米抗体的条带。结论绵羊卵泡抑制素α蛋白经纯化后对双峰骆驼免疫可以获得高效价、高纯度的抑制素α多克隆抗体。

犊牛巴氏杆菌病的诊断与防控措施

2021年10月新疆某牛场部分犊牛出现咳嗽和流鼻涕、流涎症状.为了查明原因,在流行病学调查的基础上,对采集的病料进行病原分离和鉴定.结果表明:该牧场犊牛发病原因是因为气候交变,现场观察饲养密度较大,犊牛臀部被毛粘有干粪便,导致犊牛机体抵抗力下降,继而感染牛多杀性巴氏杆菌.该多杀性巴氏杆菌对头孢噻肟、长效土霉素、恩诺沙星较为敏感;通过对症治疗,该场犊牛病情得到控制.

基于噬菌体展示技术筛选抑制素α亚基特异性纳米抗体

【目的】通过噬菌体展示技术构建抗抑制素α亚基(INHα)纳米抗体文库,并筛选出针对绵羊INHα的特异性纳米抗体,以期制备出新型抑制素免疫制剂,为提高绵羊外周血促卵泡素(FSH)水平和排卵率做前期准备。【方法】利用pET32a-INHA原核表达载体诱导表达INHα蛋白,并对诱导表达的INHα蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;用Ni琼脂糖凝胶纯化后的INHα蛋白免疫新疆双峰驼。通过巢式PCR扩增制备骆驼噬菌体展示纳米抗体文库,通过三轮免疫亲和淘选及噬菌体ELISA从该文库中富集和筛选INHα特异性纳米抗体,并通过测序得知纳米抗体的基因序列;用蛋白-蛋白模拟对接初步鉴定该纳米抗体与INHα蛋白的亲和性。【结果】通过原核诱导表达及Ni琼脂糖凝胶纯化得到了大小为36 ku的INHα重组蛋白,通过Western blotting检测到约36 ku的蛋白条带;双峰驼通过6次INHα蛋白免疫抗体效价达到1∶1024000;通过巢式PCR获得了400 bp左右的VHH基因,通过电转化等试验构建了库容量为1.05×10^(12)CFU的纳米抗体文库,文库阳性率为94%;通过三轮免疫亲和淘选获得3.0×10^(8)CFU的抗INHα纳米抗体文库,利用噬菌体ELISA获得了4株(VHH-4、VHH-29、VHH-89、VHH-108)INHα特异性纳米抗体,且4株INHα特异性纳米抗体基因序列相似度为80.31%;通过蛋白-蛋白模拟对接鉴定发现4株纳米抗体均与INHα具有较强的亲和性。此外,VHH-4与INHα的总自由能为-576.28 kJ/mol,是4种VHH中的最佳抗体。【结论】成功构建了抗INHα纳米抗体库,并从该库中获取了VHH-4、VHH-29、VHH-89和VHH-1084株INHα特异性纳米抗体。本研究结果可为纳米抗体在生殖免疫学中的应用提供参考。