CIK细胞治疗泌尿系统肿瘤的临床疗效分析

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外细胞毒活性,并观察CIK细胞治疗泌尿系统肿瘤的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.方法 2007年7月至2010年3月共收录10例泌尿系统肿瘤患者进行CIK细胞治疗,经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出CIK细胞培养后,观察CIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性.结果当效靶比为16:1、8:1时,CIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别(93.59±6.69)%和(76.78±14.23)%.前列腺癌2例,病情有较好的缓解,其中1例前列腺特异抗原和游离抗原治疗后均下降;4例肾癌完全缓解,1例SF,AFP和CEA在CIK治疗3个疗程后降至正常值.膀胱癌4例,部分缓解3例;与CIK细胞回输前相比,患者CD3+、CD4+、CD8+均有显著升高(P<0.05),这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.10例患者在输注CIK过程中未出现不良反应.结论 CIK细胞在泌尿系统肿瘤免疫治疗中能诱导机体产生特异性的免疫反应,亦是新的杀伤肿瘤细胞的效应细胞,有较好的临床疗效.

CIK细胞治疗恶性肿瘤患者的护理体会

细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK）细胞治疗是将患者自体或异体的抗瘤细胞过继输入体内的一种疗法．患者自体的抗瘤细胞往往抗瘤能力差，需要在体外进行扩增和强化而达到一定的数量和一定的抗瘤活性，再回输到病人体内达到增强病人抵抗肿瘤转移和杀灭肿瘤细胞的目的．CIK细胞过继性免疫治疗方法能改善患者全身状况，抑制肿瘤细胞生长和病毒的繁殖，提高生活质量和延长生存时间，减轻患者痛苦，治疗上相关反应小，使用方便，患者易接受．昆明医科大学附属延安医院自2007年开展自体CIK细胞静脉回输治疗218例恶性肿瘤患者，取得良好效果，现将护理体会报告如下.

医院中心实验室的生物安全管理探讨

随着生物技术的发展和医学研究的深入，实验室生物安全日益受到重视和关注。实验室的生物安全管理，不仅直接影响实验室本身的安全及工作人员的健康，且一定程度上与经济发展、社会稳定及人民大众的安全和健康有关。我院是集医疗、教学、科研为一体的现代化三级甲等医院。

医院中心实验室的护理人员管理与配合

实验室是科学研究的重要支撑条件，是科研人员从事科学研究的重要场所，也是开展科技攻关、学术交流和人才培养的重要基地。医院中心实验室集中了医院主要的软、硬件科技资源，成为了为院内外科技人员提供开放式、服务式的科研平台。同时，它还具有鲜明的医院特色，如基础研究和临床应用相互联系，在进行医学基础研究的同时，也为相关临床应用研究提供服务。随着医院中心实验室的建设与发展及医学科研工作的深入开展，实验室护理人员被赋予了新的工作内涵。笔者结合工作实际，谈谈做好实验室相关护理工作的初步体会。

不同疗程CIK治疗患者的CIK细胞的细胞毒活性研究

目的探讨不同疗程CIK治疗肿瘤患者CIK细胞体外抗肿瘤作用的差异.方法分离多疗程和单疗程CIK治疗肿瘤患者的外周血单个核细胞(PBMC),加入细胞因子诱导CIK细胞,用MTT法检测其对不同肿瘤细胞株的杀伤活性,用流式细胞仪检测其免疫表型.结果不同疗程患者的CIK细胞对肿瘤细胞都有一定细胞毒活性,当患者行多疗程治疗时,效靶比在4:1、8:1和16:1时,对BGC-823和SPC-A-1的细胞毒性较单疗程强,但以SPC-A-1低效靶比4:1时差异更为明显.另外,多疗程组的CD3+CD56+细胞含量显著高于单疗程组(P<0.05).结论多疗程CIK治疗患者的CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤效果强于单疗程CIK治疗患者,多次CIK治疗延长肿瘤患者生存期,提高生活质量,对肿瘤复发有较好的作用.

CIK细胞杀瘤实验前后细胞表型与细胞毒性相关性研究

目的为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞在体外杀瘤实验中的细胞表型变化与其杀瘤活性的相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据。方法采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血淋巴细胞及单个核细胞,用CCK-8试剂检测培养14d的CIK细胞对SPC-A-1和BGC-823肿瘤细胞的细胞毒活性,应用流式细胞术测定杀瘤实验前后CD3+等6种不同表型细胞百分率的变化。结果在与效靶比成正比的条件下,体外实验CIK细胞对两种肿瘤细胞的杀伤率都与CD3+CD4+,CD3+CD4-CD8-细胞比例变化呈正相关(P<0.05),都与CD3+CD25+,CD3+CD28+,CD3+CD25+CD28+细胞比例变化呈负相关(P<0.05),对SPC-A-1细胞的杀瘤率与CD3+CD16+CD56+呈正相关(P<0.05)。结论本研究表明靶细胞抗原在活化细胞中起重要作用,测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力,为临床CIK细胞过继免疫治疗的应用提供实验依据。

人外周血淋巴细胞体外诱导培养前后的差异蛋白组学研究

目的研究人外周血淋巴细胞(PBMCs)体外诱导前后的蛋白质组表达变化,进一步探讨其抗肿瘤机制。方法收集培养前后的细胞提取总蛋白,定量、双向电泳和银染后,利用ImageMasterTM软件对表达异同的蛋白质点进行分析及质谱鉴定。结果培养前后细胞相似的蛋白主要与基因转录因子和细胞骨架相关,差异蛋白主要与细胞凋亡和代谢相关。结论 CIK细胞的扩增及表型变化与细胞内蛋白表达改变相关。

CIK细胞治疗消化系统肿瘤患者的效果观察和护理体会

目的总结CIK细胞免疫治疗消化系统肿瘤临床疗效及心理护理经验。方法 2007年7月至2010年3月昆明医学院附属延安医院收治97例消化系统恶性肿瘤患者进行192次CIK细胞免疫治疗,对CIK细胞免疫治疗前的细胞制备、治疗时、治疗后不良反应观察进行记录,对疗效进行跟踪随访,同时对患者进行心理护理。结果 97例患者中,3例食管癌,治疗后主观症状改善明显。胰腺癌6例,有近期疗效4例。肝癌6例,有近期疗效5例。胆囊癌5例,有近期疗效4例。在CIK细胞免疫治疗的18例胃癌、41例结肠癌、18例直肠癌中,近期有效率分别为77.78%、65.8%和72.22%。患者能积极配合进行CIK细胞免疫治疗,使治疗获得满意的效果。结论 CIK细胞免疫治疗为综合治疗的有效手段之一,对提高疗效、改善生活质量有重要意义。

CIK细胞治疗妇科肿瘤的临床研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外细胞毒活性,并观察CIK细胞治疗妇科肿瘤的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.方法共收录2007年7月至2010年3月22例妇科肿瘤患者进行CIK细胞治疗,其中卵巢癌11例,子宫癌11例.经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出CIK细胞培养后,观察CIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性.所有患者均接受一定剂量的CIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应.结果当效靶比为16:1、8:1时,CIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别(82.33±9.35)%和(61.59±13.59)%.卵巢癌11例,近期疗效评价中,部分缓解4例,近期有效率为66.67%,疾病控制率为66.67%.子宫癌11例,近期疗效评价中,部分缓解6例,近期有效率为100%,无肿瘤进展时间为4～26个月,中位无肿瘤进展时间为13个月.与CIK细胞回输前相比,患者CD3+、CD4+、CD8+均有明显的升高(P<0.05),这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.22例患者在输注CIK过程中未出现不良反应.结论 CIK细胞对妇科肿瘤有较好的临床疗效.

CIK细胞治疗乳腺癌的临床疗效评估

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外细胞毒活性,并观察CIK细胞治疗乳腺癌的近期临床疗效、免疫学活性及副反应。方法 35例乳腺癌患者经规范化治疗后,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外诱导出CIK细胞培养后,观察CIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性;所有患者均接受一定剂量的CIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应。结果 35例患者中,完全缓解24例,部分缓解6例,病情稳定1例,近期有效率为85.71%,疾病控制率为88.57%,无肿瘤进展时间为2～31个月,中位无肿瘤进展时间为15个月。细胞毒活性检测结果显示,当效靶比为16∶1时,CIK细胞体外细胞毒活性为77.06±11.62。与CIK细胞回输前相比,患者CD3+,CD4+,CD8+均有明显的升高(P<0.001)。35例患者在输注CIK过程中1例出现一过性发热(37.5℃)反应。结论 CIK细胞在乳腺癌免疫治疗中能诱导机体产生特异性的免疫反应,亦是新的杀伤肿瘤细胞的效应细胞,结合传统的手术和化疗,有较好的临床疗效。

改良RPMI1640培养基对CIK细胞增殖的影响

目的探讨改良RPMI1640培养基对CIK细胞体外增殖的影响,为临床治疗提供质量好、数量多的CIK细胞。方法用淋巴细胞分离液提取淋巴细胞,分别采用传统RPMI1640培养基和改良RPMI1640培养基培养,于培养当天及3、6、9、12、15、18d,采用台盼蓝拒染法计数细胞,检测细胞的增殖水平;流式细胞术分析细胞表型;MTT法检测CIK细胞的体外细胞毒活性。结果培养至第12天后,改良培养基培养条件下,CIK细胞的增殖倍数明显高于传统培养基培养的CIK细胞(P<0.05);CD3+CD56+细胞比例达33%以上;培养15d,对BGC-823和SPC-A-1细胞的细胞毒活性均高于传统培养基。结论改良RP-MI1640培养基较传统RPMI1640培养基可更好地促进CIK细胞增殖,为其临床应用提供了试验数据。

人外周血淋巴细胞体外诱导培养前后细胞表型与细胞毒活性相关性研究

为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞过程中细胞表型的变化与其杀瘤活性的相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据,本研究采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血淋巴细胞及单个核细胞,应用流式细胞术测定培养前、培养第7天和第14天的CD3^+等15种不同表型细胞百分率的变化,用CCK-8试剂检测第7天和第14天的细胞毒活性。结果显示,扩增培养后T细胞活化表型的表达和细胞毒活性在第7天最强,与其细胞表型CD3^+CD25^+、CD3^+CD28^+、CD3^+CD25^+CD28^+、CD3^+CD4^+呈正相关(P<0.05),与CD3^+CD45RA^+CD45RO^+呈负相关(P<0.05)。本研究表明测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力,为临床CIK细胞过继免疫治疗的应用提供实验依据。

细胞因子诱导外周血单个核细胞的转录和蛋白表达研究

采用干扰素-γ、抗CD3单克隆抗体和IL-2体外诱导扩增外周血单个核细胞成为CIK细胞,并于诱导培养前及培养第15 d时分别收集细胞样本。在对培养前后细胞的增殖、形态及表面标志变化检测的同时,提取总蛋白进行定量、双向电泳和银染。利用ImageMasterTM软件对培养前后表达相同和不同的蛋白质点进行分析,并选择其中24个蛋白质点进行质谱鉴定。对于部分培养前后具有代表性的蛋白,进一步采用qPCR技术分析其的转录情况。结果表明,培养前后细胞的蛋白质组学特征是完全不同的,相同表达蛋白点主要与基因的转录因子和细胞骨架相关,诱导后特异表达蛋白主要与细胞生长、增殖相关。虽然在转录与蛋白水平上呈现出部分负相关现象,由于蛋白质组才是基因表达的最终形式,结合蛋白差异研究结果提示,经细胞因子诱导后,CIK细胞的大量扩增与细胞内蛋白表达改变相关。