苏子油对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌胰岛素敏感性相关基因表达的影响

目的探究富含n-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)的苏子油高脂饮食对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性及其相关基因表达的影响。方法将胰岛素抵抗模型大鼠随机分为2组:高脂组(high fat group,HF)和苏子油组(perilla oil group,PO),PO为苏子油替代HF中猪油比例的20%,4周后测定大鼠胰岛素敏感性;气相色谱法检测苏子油及大鼠血清α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)含量;Western blot方法检测骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)和胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)蛋白表达;real time PCR方法检测骨骼肌Glut4、Irs-1 mRNA表达。结果苏子油干预4周后,与HF组相比,随着PO组大鼠ALA摄入量及血清ALA含量升高,GLUT4蛋白和mRNA表达量均显著升高,而IRS-1蛋白和mRNA表达均显著降低;高胰岛素-正常血糖钳夹实验结果显示两组大鼠胰岛素敏感性没有明显差异。结论 ALA(0.556 g/d)高脂饮食干预可以调节骨骼肌GLUT4、IRS-1表达,但不能改善胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性。

苏子油对肥胖大鼠肝脏极低密度脂蛋白合成关键基因表达的影响

目的探究富含n-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)的苏子油高脂饮食对肥胖大鼠肝脏极低密度脂蛋白(very low density lipoproteins,VLDL)合成关键基因表达的影响。方法造模期:雄性SD大鼠随机分为2组,对照组(normal control group,NC)给予普通日粮,高脂组(high fat group,HF)给予高脂纯合日粮诱发肥胖大鼠模型;干预期:将肥胖大鼠随机分为4组:持续高脂组(consistent high fat group,CHF)和三个苏子油(perilla oil,PO)替代组,根据PO替代CHF中猪油比例的不同将替代组分为20%PO、50%PO、100%PO,4周后测定大鼠血清甘油三酯(tryglyceride,TG)水平;western blotting方法检测肝脏VLDL合成关键蛋白微粒体甘油三脂转运蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTP)和载脂蛋白B(apolipoprotein B,APOB)蛋白表达;real-time PCR方法检测肝脏Mtp、Apob mRNA表达。结果肥胖大鼠血清TG水平显著高于NC组,并且有严重的脂肪沉积,肝脏MTP和APOB的mRNA、蛋白表达均有不同程度的降低;干预4周后,与CHF组相比,各PO替代组大鼠血清TG水平明显降低,病理切片结果显示肝脏脂肪沉积有明显改善,并且肝脏MTP和APOB的mRNA、蛋白表达均有不同程度的升高。结论不同比例PO替代均能促进肥胖大鼠肝脏VLDL合成与分泌,改善肝脏脂肪沉积,并且PO促进Mtp mRNA、蛋白表达具有剂量依赖性。

α-亚麻酸对胰岛素抵抗HepG2细胞脂类合成基因表达的影响

目的分析在α-亚麻酸(ALA,C18:3)干预后,胰岛素抵抗Hep G2(insulin resistance Hep G2,IR-Hep G2)细胞模型脂类合成关键基因表达水平的变化。方法 Hep G2细胞造模期分为两组,由无血清培养基培养的对照组(normal control group,NC)以及含有0.25 mmol/L软脂酸的无血清培养基培养的软脂酸组(palmitic acid,PA),培养24 h后鉴定细胞胰岛素敏感性并测定细胞内胆固醇(total cholesterol,TCH)、甘油三酯(Tryglyceride,TG)水平,然后用ALA替代20%的PA培养12 h,再次鉴定细胞胰岛素敏感性并检测细胞内TCH、TG水平,real time q PCR检测TG、TCH合成关键基因mRNA水平,Western blot检测TG、TCH合成关键基因蛋白表达量。结果 IR-Hep G2细胞模型建立成功,并且PA组TCH水平显著高于NC组(P=0.0016),出现了脂代谢紊乱;ALA干预IR-Hep G2细胞12 h后,细胞活性有所恢复,与PA组相比,ALA组胰岛素诱导基因(insulin induced genes,INSIGs)及脂类合成关键蛋白的mRNA表达无明显变化;与基因表达结果不一致的是,ALA干预后可以特异性提升细胞内INSIG-2蛋白相对表达量,但对INSIG-1蛋白相对表达量没有明显影响。同时,ALA可以显著抑制55k Da固醇调节元件结合蛋白-2(sterol regulatory element-binding protein-2,SREBP-2)、HMG-Co A还原酶(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coen-zyme A reductase,HMGCR)及脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)蛋白的表达,且ALA组细胞内TG水平显著降低(P=0.0119)。结论 0.05 mmol/L ALA干预IR-Hep G2细胞后,通过提升INSIG-2蛋白的表达,抑制SREBP-2从内质网到高尔基体的剪切成熟活化,降低细胞内55k Da SREBP-2水平及HMGCR的表达,并且抑制FASN表达,从而抑制了TG/TCH的合成。

Alpha-亚麻酸对HepG2细胞脂肪酸合成关键基因的影响

目的探讨不同剂量Alpha-亚麻酸(ALA)对硬脂酸培养后的HepG2细胞脂肪酸合成基因表达的影响。方法 HepG2细胞分为对照组(NC)以及含有0.5 mmol/L硬脂酸的培养液培养高脂组(HF),培养36 h后应用实时定量PCR检测脂肪酸合成关键基因SREBP1C、FAS及ACC表达;基因表达存在显著差异后分别用10%、20%、50%、70%、100%ALA替代硬脂酸培养36 h,实时定量PCR和免疫印迹法检测上述基因mRNA水平及蛋白表达。结果硬脂酸处理后HepG2细胞SREBP1C、FAS及ACC基因显著升高(P<0.001),ALA替代组SREBP1C基因mRNA表达水平均显著低于高脂组(P<0.001),0.5 mmol/L ALA组及0.35 mmol/L ALA组FAS显著低于高脂组(P<0.001),各替代组ACC基因mRNA水平与高脂组无统计学差异;替代组SREBP1C及FAS蛋白表达水平显著低于高脂组,而ACC蛋白表达量与高脂组无明显差异。结论硬脂酸促进HepG2细胞脂肪酸合成,ALA通过抑制SREBP1C及FAS基因表达来减弱脂肪酸合成。

多重PCR和纳米孔测序结合检测消化道病原体方法及其评价

目的建立多重PCR和纳米孔测序相结合的检测方法,为实现消化道病原体现场高灵敏度快速检测奠定基础。方法通过设计消化道病原体特异性引物,验证引物特异性,优化多重PCR扩增条件,构建快速建库测序体系,对病原体的检测灵敏度进行评价。结果建立的12种消化道病原体多重PCR检测体系可以对所有靶序列进行有效扩增。经测序检测,当引物池中每条引物浓度为0.1μmol/L时,12种病原体混合DNA模板和3种轮状病毒A、B、C的混合RNA样品检测灵敏度均可达到103拷贝/ml。结论该方法可在短时间内完成消化道病原体的鉴定,提升突发公共卫生事件中现场病原体检测效率,有望在疫情防控中发挥重要作用。

基于多重PCR的呼吸道病毒纳米孔测序快速检测的方法学研究

目的通过对多重PCR扩增条件的优化和纳米孔测序中病原微生物检测特异性及灵敏度的评价,建立一种由多重PCR和纳米孔测序技术相结合的检测技术体系,满足对呼吸道病毒现场快速检测鉴定的需求。方法首先针对呼吸道病毒设计特异性引物,其次优化PCR扩增条件,建立快速测序体系,最后对不同浓度的病原体进行扩增与测序鉴定,评价检测体系的灵敏度。结果优化后的多重PCR检测体系在退火温度为55℃、引物添加浓度为0.1µmol/L时,可同时检出25种呼吸道病毒,检测灵敏度可达1×104拷贝/ml,整体检测时间在4 h以内。结论该方法简单快捷,能够实时获取扩增片段的序列信息,特异性强,灵敏度较高,有望为呼吸道病原体的快速筛选和现场检测鉴定提供有力技术支撑。

高剂量摄入鱼油导致大鼠脂肪肝的实验研究

目的分析低剂量、高剂量鱼油对大鼠血脂、肝脏脂肪沉积及胰岛素敏感性的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为3组,对照组(NC)、低剂量鱼油组(LFO)、高剂量鱼油组(HFO)。喂养12周,记录采食量及体重,测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA),分析肝脏脂肪沉积及胰岛素敏感性。数据采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果 LFO、HFO组血清TG、TC均低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),3组间HDL-C、FFA差异无统计学意义(P>0.05);LFO及NC组肝脏结构正常,肝细胞索排列紧密,肝细胞内未见脂肪沉积,而HFO组肝细胞内有大量脂肪聚集,为严重脂肪肝;3组大鼠胰岛素敏感性差异无统计学意义(P=0.086)。结论低剂量、高剂量摄入鱼油均能降低大鼠血脂,但高剂量摄入导致大鼠脂肪肝。