治疗奶牛子宫内膜炎中药组方“益宫清”抗炎抑菌效果评价及泡腾栓的制备

为了检验自拟中药组方“益宫清”的抑菌和抗炎效果,并将其制成新型中药泡腾栓剂,试验采用试管二倍稀释法检测中药“益宫清”对子宫内膜炎常见致病菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);选择雌性C57小鼠32只,随机分为对照组、大肠杆菌组、“益宫清”中药组和恩诺沙星组,每组8只,对照组子宫灌注生理盐水,其余组灌注大肠杆菌建立子宫内膜炎模型,每24 h 1次,连续3次。首次造模24 h后,“益宫清”组灌胃中药液,恩诺沙星组灌胃恩诺沙星,每24 h 1次,连续2次。最后1次治疗24 h后处死小鼠,检测小鼠子宫指数;采用H.E.染色观察子宫组织病理变化;采用ELISA法检测子宫组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关炎症因子质量浓度。筛选合适的栓剂基质,利用正交试验筛选最佳基质配比,制成栓剂并进行质量检查。结果表明:“益宫清”水提取物对子宫内膜炎常见致病菌有一定的抑制作用,其中对无乳链球菌的抑制效果最强,MIC为3.91 mg/mL,MBC为7.81 mg/mL,然后依次是金黄色葡萄球菌、大肠杆菌。与对照组相比,大肠杆菌组子宫指数极显著增加(P<0.01);与大肠杆菌组相比,“益宫清”组子宫指数极显著降低(P<0.01),恩诺沙星组差异不显著(P>0.05);且“益宫清”水提取物能够缓解由大肠杆菌导致的子宫组织病理性损伤。与对照组相比,大肠杆菌组子宫组织中TNF-α、IL-1β质量浓度极显著升高(P<0.01),IL-6质量浓度显著升高(P<0.05);与大肠杆菌组相比,“益宫清”组子宫组织中TNF-α、IL-1β、IL-6质量浓度极显著降低(P<0.01),恩诺沙星组子宫组织中TNF-α、IL-6质量浓度显著降低(P<0.05)。泡腾栓优选配比为PEG-60006.8 g,柠檬酸1.2 g,碳酸氢钠1.6 g,主药含量2.4 g,质量检查合格。说明“益宫清”具有一定的抑菌和抗炎效果,并成功将其制成泡腾栓剂。

脂多糖诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎模型的建立

本试验旨在建立脂多糖(LPS)诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎病理模型,为后续治疗乳腺炎的深入研究奠定基础。SD大鼠30只,于产后72h随机分为对照组(5只)和试验组(25只),试验组随机分为5组,各试验组大鼠经第4对乳头灌注LPS,剂量分别为10、20、30、40、50μg/侧,对照组灌注等量PBS。灌注后24h观察记录各大鼠临床症状、乳腺组织病理学变化。结果发现,在各试验组大鼠第4对乳腺均可观察到不同程度的炎症反应,且与LPS剂量呈正比例关系。结果表明,成功建立了LPS诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎模型。

海兰白鸡CDCD14基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备

通过克隆获得海兰白鸡CD14基因全长,其与红原鸡CD14氨基酸同源性为98.9%,将其插入pET-30a表达载体中,原核表达获得重组蛋白,约为55 ku,纯化后免疫兔制备多克隆抗体。间接ELISA结果显示多克隆抗体效价为25 600,Western-blot及间接免疫荧光试验结果显示多克隆抗体能够与chCD14重组蛋白、BHK-21细胞内chCD14蛋白及鸡外周血液淋巴细胞内chCD14蛋白特异性结合。本试验表明:制备的多克隆抗体具有天然活性,为进一步研究chCD14在雏鸡组织当中的表达分布奠定基础。