脐带间充质干细胞外泌体LncRNA H19修复软骨损伤的机制

背景:脐带间充质干细胞已被证明对软骨损伤有治疗作用,外泌体是脐带间充质干细胞在体内发挥治疗作用的主要载体。课题组前期发现LncRNA H19是介导脐带间充质干细胞外泌体调控软骨细胞活性的重要活性分子,LncRNA H19可以吸附miR-29b-3p从而促进软骨细胞的增殖再生,但是其下游机制仍未清楚。目的:从外泌体和LncRNAs角度揭示脐带间充质干细胞治疗软骨损伤的具体机制,为软骨损伤的治疗提供新的靶点。方法:构建稳定过表达LncRNA H19的脐带间充质干细胞,采用超速离心提取外泌体(H19-Exos);采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot和外泌体摄取实验鉴定外泌体;通过Western blot、qPCR和双荧光素酶报告基因系统检测miR-29b-3p过表达和沉默对TGF-β1/Smad3通路的影响;通过特异性TGF-β1/Smad3抑制剂在体内外反向验证H19-Exos对软骨再生的生物学作用。结果与结论:①H19-Exos在电镜下为典型的杯状,粒径在130 nm左右,均表达CD63、CD81和TSG1010特性蛋白;②过表达miR-29b-3p可以同时下调TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白水平,而沉默miR-29b-3p后,TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白水平上调;③双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-29b-3p对下游靶基因TGF-β1和Smad3活性影响有显著差异;④膝关节腔内注射Ⅱ型胶原酶成功建立大鼠骨关节炎模型,H19-Exos可显著促进软骨再生,且特异性TGF-β1/Smad3抑制剂SB-431542在体内外均可阻断H19-Exos对软骨再生的生物学作用;⑤该研究系统论证了高表达LncRNA H19脐带间充质干细胞来源外泌体对软骨再生的促进作用,具体机制为LncRNA H19通过靶向miR-29b-3p/TGF-β1/Smad3通路促进软骨再生。

肱骨近端骨折内固定失败后的治疗

2016年1月~2020年12月,我们采用内固定取出、切开复位植骨内固定治疗10例肱骨近端骨折内固定失败后骨不连及畸形愈合的患者,疗效满意,报道如下。1材料与方法。1.1病例资料本组10例,男4例,女6例,年龄54~78岁。患者均为肱骨近端骨折内固定失败后骨不连及畸形愈合。

活体蛆虫治疗大鼠急性感染创面的研究

目的研究活体蛆虫对大鼠急性感染性创面的治疗作用,初步探索活体蛆虫治疗创面过程的作用机制。方法建立SD大鼠(n=90)的急性感染性创面模型,随机平均分为阴性对照组(凡士林纱布覆盖组)、阳性对照组(莫匹罗星软膏治疗组)以及实验组(蛆虫虫包治疗组)。在实验过程中,检测创面细菌数量,透明膜法描摹创面面积,各组分别于治疗后的第4,8以及12天取材,随后进行苏木精-伊红(HE)染色并通过免疫组化实验观察各组织内血管内皮生长因子A(VEGFA)及蛋白基因产物9.5(PGP9.5)的表达情况。结果在创面治疗的第8和12天,蛆虫虫包治疗组肉芽组织的细菌含量明显少于其余两组(P<0.05)。同时,蛆虫虫包治疗组及莫匹罗星软膏治疗组创面面积明显小于凡士林纱布覆盖组,而蛆虫虫包治疗组及莫匹罗星软膏治疗组间无明显统计学差异。HE染色发现,蛆虫虫包治疗组及莫匹罗星软膏治疗组创面切片中新生肉芽组织较凡士林纱布覆盖组更加明显,而蛆虫虫包治疗组创面组织中新生毛细血管更为丰富。免疫组化结果表明,蛆虫虫包治疗组及莫匹罗星软膏治疗组中VEGFA的阳性表达面积均明显高于凡士林纱布覆盖组(P<0.05),而蛆虫虫包治疗组PGP9.5的阳性表达面积明显高于其余两组(P<0.05)。结论在治疗大鼠急性感染性创面模型时,蛆虫虫包具有理想的抗菌作用,其促进创面愈合效果与莫匹罗星软膏相似,而蛆虫具有更强的促进毛细血管生成作用和促进神经组织再生能力。