敲低WDHD1对鼻咽癌细胞增殖、铜含量及铜死亡相关因子的影响

目的探讨敲低WD重复序列和HMG框DNA结合蛋白1(WDHD1)对鼻咽癌细胞增殖、铜含量及铜死亡相关因子的影响。方法将鼻咽癌细胞(HK-1细胞和HONE-1细胞)分别分为对照组、敲低空载组(sh-NC组)、WDHD1敲低组(sh-WDHD1组)。对照组不做处理,sh-NC组、sh-WDHD1组分别转染阴性对照慢病毒、sh-WDHD1 RNA慢病毒。转染成功后,检测各组HK-1细胞和HONE-1细胞增殖活性、铜含量、铜死亡相关基因m RNA及蛋白表达情况;将sh-WDHD1组的HK-1细胞和HONE-1细胞分为sh-WDHD1对照组、sh-WDHD1/DMSO组、sh-WDHD1/ATTM组,分别使用完全培养基、含DMSO的完全培养基、含铜螯合剂ATTM的完全培养基进行培养,然后检测细胞铜含量。结果(1)与对照组和sh-NC组相比,sh-WDHD1组HONE-1细胞在24 h、48 h的增殖活力下降,HK-1细胞在48 h的增殖活力下降(P<0.05)。(2)在HONE-1细胞和HK-1细胞中,与对照组及sh-NC组相比,sh-WDHD1组的细胞铜含量增加,金属调节转录因子1(MTF1)的mRNA表达水平、硫辛酸合成酶(LIAS)的mRNA和蛋白表达水平增高,而血管内皮生长因子受体A(VEGFA)的mRNA表达水平、肿瘤蛋白p53(TP53)的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。(3)与sh-WDHD1对照组及sh-WDHD1/DMSO组相比,sh-WDHD1/ATTM组HONE-1细胞和HK-1细胞的铜含量下降,HONE-1细胞在48 h的增殖活力增强,HK-1细胞在24 h、48 h的增殖活力增强(P<0.05)。结论敲低WDHD1可降低鼻咽癌细胞的增殖活性,增加细胞内铜含量蓄积,上调铜死亡促进因子LIAS、MTF1的表达,下调铜转运关键因子VEGFA及铜代谢关键因子TP53的表达。TP53和LIAS可能在WDHD1影响鼻咽癌细胞的铜蓄积和铜死亡进程中发挥重要作用。

脂肪甘油三酯脂肪酶在头颈部鳞状细胞癌中的表达及相关分子机制

目的 分析脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)在头颈部鳞状细胞癌(头颈鳞癌)中的表达及相关分子机制。方法 通过UALCAN数据库分析ATGL在头颈鳞癌中的转录和蛋白表达水平,并以人乳头状瘤病毒(HPV)感染状态为分层因素分析ATGL的转录水平;基于GEO数据库的ATGL微阵列数据集进行Meta分析验证ATGL在头颈鳞癌中的转录水平。分别通过UALCAN数据库、Kaplan-Meier Plotter分析ATGL表达与头颈鳞癌分级、患者预后的关系。通过MethSurv分析ATGL CpG岛在头颈鳞癌中的甲基化状态及与患者预后的相关性。通过基因富集分析软件分析ATGL参与调控的信号通路。通过TIMER分析ATGL与头颈鳞癌中免疫细胞浸润的相关性,以及在不同HPV感染状态下与免疫细胞标志物的相关性。结果 在头颈鳞癌组织中,ATGL转录水平和蛋白表达水平均下调(均P<0.05);低分化头颈鳞癌组织中ATGL的蛋白表达较中分化头颈鳞癌组织更低,ATGL低表达的头颈鳞癌患者的生存率更低(均P<0.05)。ATGL CpG岛3个位点的甲基化与患者的预后相关,其中cg04519421、cg09051513位点发生高甲基化的头颈鳞癌患者生存率更低(均P<0.05)。头颈鳞癌中ATGL主要涉及转录因子E2F、DNA损伤检查点G2M、原癌基因MYC、上皮-间质转化、转化生长因子β、Hedgehog、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、糖酵解等信号传导通路。ATGL表达水平与B淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞及树突状细胞等免疫细胞浸润水平呈正相关(均P<0.05)。与HPV阴性的头颈鳞癌组织相比,ATGL在HPV阳性的头颈鳞癌组织中相对高表达(P<0.05),且与CD8~+T淋巴细胞、T淋巴细胞(总)、B淋巴细胞、树突状细胞浸润水平的相关性更高。结论 ATGL在头颈鳞癌中呈低表达,是候选的预后评估相关分子标志物。头颈鳞癌细胞可能通过表观遗传机制沉默ATGL的表达,从而促进自身的恶性生物学行为,并抑制免疫细胞的防御功能以发生免疫逃避;而HPV可介导ATGL高表达从而激活肿瘤微环境中的免疫应答。

汉黄芩素抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的探究汉黄芩素对鼻咽癌细胞C666-1、HK-1增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用CCK8实验明确汉黄芩素对鼻咽癌细胞C666-1、HK-1的活性抑制作用,并计算IC_(50);采用平板集落形成实验明确汉黄芩素对鼻咽癌细胞C666-1增殖和独立生存能力的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验研究汉黄芩素对鼻咽癌细胞迁移能力的影响;最后采用Transwell侵袭实验研究汉黄芩素对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响。结果CCK8实验结果显示,汉黄芩素对C666-1和HK-1细胞的活力均表现出明显的抑制作用,随药物浓度增加,抑制效果明显增强;同一药物浓度下,药物作用48 h的抑制效果高于24 h,抑制效果表现为剂量时间依赖性;汉黄芩素作用于C666-1细胞24 h的IC_(50)值为37.15μmol/L、48 h为20.75μmol/L;汉黄芩素作用于HK-1细胞24 h的IC_(50)值为29.09μmol/L、48 h为20.46μmol/L。平板集落实验结果显示,汉黄芩素干预后,鼻咽癌细胞C666-1细胞形成肉眼可见集落的数目更少,体积更小。划痕实验和Transwell迁移实验显示,C666-1及HK-1细胞的迁移能力明显受到抑制,且药物浓度越高,抑制作用越强。Transwell侵袭实验显示,汉黄芩素干预后,穿过基质胶后迁移至下室的细胞数目明显减少。结论汉黄芩素能抑制鼻咽癌细胞的活性、增殖、迁移以及侵袭的能力。