单细胞多组学技术和应用

单细胞多组学技术是指结合多种不同的生物学技术,对单个细胞进行多方面的分析和研究,从而获得更全面、更准确的单细胞数据。该技术包括单细胞基因组学、单细胞转录组学、单细胞蛋白质组学、单细胞表观组学等。单细胞多组学技术的发展为我们提供了一种更加精确理解生物体内复杂的细胞类型和功能的方式,尤其是对于异质性细胞群体中少数的特殊细胞类型如干细胞或罕见癌细胞,具有非常重要的应用价值。通过融合不同技术获得的信息,单细胞多组学可以更准确地描述单个细胞在多个生命事件和过程中的状态与变化,为生命科学的研究提供更加全面和深入的视角。本文系统概述了目前代表性单细胞多组学技术的发展现状,总结了其在生物学研究中的重要应用和巨大潜力。

乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.0)SMMU的生物学特征

目的:评价乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU生物学特征的稳定性。方法:以F5代乙肝转基因小鼠C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、血清ELISA检测、Western印迹分析、免疫组织化学、血清DNA PCR、透射电镜和H-E染色的方法分析HBV基因在转基因小鼠中的整合、表达、复制和组织学变化。结果:F1代乙肝转基因小鼠基因组中稳定整合有HBV基因,肝组织中可检测到HBsAg、HBcAg和X蛋白3种病毒蛋白,血清中HB-sAg和HBeAg的表达率分别为19.54％和3.39％,且在血清和肝组织中存在病毒DNA和病毒样颗粒;长期的病毒DNA整合、表达和复制可以引起转基因小鼠肝、肺等组织的病理性损伤。结论:乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O:)SMMU具有基因组中稳定整合病毒DNA、血清和肝组织中有病毒蛋白表达和病毒复制的特征,并具有一定的组织学变化,作为生物医药研究的实验动物模型具有推广应用价值。

干扰素诱导Mx-Cre转基因小鼠表达的重组酶活性的体外检测

利用ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、免疫组化、免疫金标电镜、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ从ＤＮＡ水平、蛋白水平分析干扰素诱导后Ｍｘ－Ｃｒｅ转基因小鼠肝组织中Ｃｒｅ重组酶的表达及其表达产物的活性。在对Ｍｘ－ｃｒｅ转基因小鼠基因组中整合有ｃｒｅ基因进行确定后，通过干扰素诱导Ｍｘ－ｃｒｅ转基因小鼠表达Ｃｒｅ重组酶，结果表明转基因小鼠肝细胞核和细胞质中均有Ｃｒｅ重组酶的表达，并在超微水平进一步证实。将含表达的Ｃｒｅ重组酶的肝细胞核抽提液加入到带有ｌｏｘＰ位点的ＤＮＡ中进行重组，分析证明Ｍｘ－Ｃｒｅ转基因小鼠表达的Ｃｒｅ重组酶具有重组活性，从而建立了体外检测Ｍｘ－Ｃｒｅ转基因小鼠表达的Ｃｒｅ重组酶活性的方法。

HBV病毒蛋白在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠中的表达

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和组织中病毒蛋白的表达及其特征.方法:以138只F6～F17代C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系的转基因小鼠为研究对象,采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法分析病毒蛋白在转基因小鼠中的表达.结果:转基因小鼠血清中HBsAg和HBeAg的阳性率分别为55.18%和25.00%,血清中HBsAg的出现时间多在3个月龄之前(占93.33%),且持续时间在9个月以上(占95.56%),个体之间具有一定差异.转基因小鼠肝组织中至少可检测到一种病毒蛋白,HBsAg、HBcAg和X蛋白的检出率分别为85.82%、58.24%和49.61%.HBsAg分布于肝细胞质中,HBcAg和X蛋白既可分布于肝细胞核中,也可分布干肝细胞质中.HBsAg的表达具有细胞特异性(门管区周围的肝细胞)和组织特异性(肝和肾),X蛋白除在肝脏和肾脏中表达外,还可在脑组织中表达.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和肝肾等组织中有病毒蛋白的表达,病毒蛋白的分布具有组织细胞特异性和个体差异.

HBV转基因在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU3小鼠基因组中的整合分析

目的:分析HBV转基因在乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系基因组中的整合特征.方法:以F6～F17代乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、Southern印迹和DNA测序的方法,分析HBV转基因在该品系转基因小鼠基因组中的整合特征.结果:PCR分析显示,F6～F17代乙肝转基因小鼠基因组中均已稳定整合了相同拷贝数的HBV转基因,整合的HBV DNA可通过生殖系在世代间稳定遗传.整合在转基因小鼠基因组中的HBV DNA含有HBVpres、s、c、x基因,Southern印迹证实HBV转基因含有全长HBV基因组DNA,DNA测序结果表明,该品系转基因小鼠所整合的转基因为adr亚型的HBV DNA.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠基因组中均整合有adr亚型的全长HBV基因组DNA,从DNA水平证实该转基因小鼠品系已具备了乙肝实验动物模型的基本条件.

IL-1和肿瘤转移

IL-l在不同的细胞中有多种不同的生物学作用,在肿瘤转移中.IL-l通过促进内皮细胞表达与粘附有关的因子如细胞间粘附分子1(ICAM-1)、E-选择素、血小板激活因子(PAF)、整合蛋白VLA-4、甘露糖受体等特异性受体的表达,促进肿瘤细胞与内皮细胞粘附,从而促进肿瘤转移;同时IL-1通过调节肿瘤生长,影响瘤细胞在继发部位的滞留和最初从血管移出而促进肿瘤转移,IL-1受体拮拉剂(IL-1ra)通过拮抗IL-1,抑制瘤细胞与内皮细胞的粘附而抑制IL-1引起的肿瘤转移.当IL-1与IL-1ra失衡时可促使肿瘤转移.

整合素与肿瘤转移

肿瘤转移是一个复杂的多步骤多环节的过程，是临床治疗大多灵敏实体瘤患者失败的主要原因，随着对肿瘤转移研究的深入，近年来发现一组由α和β两个亚单位组成的粘附分子———整合素，它参与肿瘤转移的多个环节。整合素通过介导与基底膜、细胞之间的粘附和传导信号等作用...

细胞凋亡的分子机理

细胞凋亡是一种细胞自主性死亡现象,与维持生物体正常生理功能和一些疾病的发生密切相关.最近发现,细胞凋亡的主要原因是毒物、射线等死亡信号通过死亡诱导信号复合体直接激活一组被称为caspases的蛋白酶系统.同时发现,死亡信号还可通过线粒体和一些癌基因相关蛋自如Bcl-2、P53、PML间接影响caspases的活性.最终影响凋亡的发生.

C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达模式分析

目的:分析C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠的月龄、性别和遗传背景与其血清和肝组织中HBsAg表达模式的关系.方法:采用血清ELISA检测和免疫组织化学的方法检测转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达,统计学方法分析转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达与小鼠的月龄、性别、遗传背景的相关性.结果:转基因小鼠在出生后1～3个月时,血清中HBsAg的表达较低或甚至不表达,8个月龄左右时最高,此后逐渐降低,但肝组织中HBsAg的表达相对稳定在较高水平,能真实反映转基因小鼠中HBsAg的表达.雄性小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达量高于雌性小鼠(P＜0.05).转基因小鼠与C57BL/6品系、DAB品系和129s品系正常小鼠交配后的子代,其血清和肝组织中HBsAg表达量均未发生变化.血清阳性的小鼠中肝组织HBsAg阳性率为94.05%,两者呈正相关关系(r=0.257,P＜0.01).结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠血清和肝组织中HBsAg的表达具有发育调节和性别差异.

肥胖基因及其产物

肥胖基因（ｏｂｅｓｅｇｅｎｅ，ｏｂｇｅｎｅ）及其产物Ｌｅｐｔｉｎ在肥胖的发生中起重要作用，人们已定位克隆了ｏｂ基因并对ｏｂ基因及其调控序列、ｏｂ基因的产物及其功能，各种因素对ｏｂ基因及其产物表达的影响等方面作了深入研究，并提出了机体调节体重的可能途径。本文就以上几个方面作一综述。

肿瘤转移的分子机理

肿瘤转移的分子机理訾晓渊１综述刘艺萍２审校１第二军医大学军医系２第二军医大学生物学教研室上海２００４３３肿瘤转移是肿瘤的恶性特征之一，是大多数实体瘤患者死亡的主要原因，因此是治疗过程中一个极其复杂和重要的环节，尽管原发瘤可经手术切除、化疗、放疗和免疫...

乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立及培育

目的:建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因(adr亚型)转基因小鼠模型,以研究x基因的功能。方法:采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx基因(adr亚型)开放阅读框(ORF)的真核表达载体pcDNA3-HBx。该载体经Sal I限制性内切酶线性化后,琼脂糖电泳回收目的片段,用原核显微注射法将其注射入雄原核,制备转基因小鼠。复合PCR法在基因组水平筛选HBx基因转基因小鼠founder;免疫组织化学法在蛋白水平检测X蛋白在这些小鼠中的表达情况。结果:成功构建了HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后,出生并存活了11只新生鼠,经PCR检测后获得5只founder转基因小鼠,命名为C57-TgN(HBx)SMMU。免疫组织化学检测发现5只PCR阳性小鼠的肝细胞质中均有X蛋白的表达。将这5只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配,进行传代培育,复合PCR法筛选阳性转基因小鼠,目前已传至F4代。结论:本研究成功地产生了稳定遗传HBx基因并表达X蛋白的转基因小鼠C57-TgN(HBx)SMMU,它将有利于体内研究HBx基因在肝细胞癌发生中的作用。

缺氧诱导因子在肿瘤中的作用研究进展

维持适当的氧含量对机体的生存至关重要,但是在许多病理情况下,细胞和组织器官经常会处于一种缺氧的状态,此时细胞需要通过缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIF)途径来适应缺氧的环境。肿瘤细胞的过度生长会限制肿瘤内的氧气弥散,导致肿瘤内血液供应不足,产生缺氧的微环境,进而促进HIF的表达。HIF具有广泛的下游基因,与多种信号通路有关,参与肿瘤血管的形成、维持肿瘤干细胞的稳定、促进肿瘤转移,并与肿瘤的预后相关,在肿瘤的发生发展中起到至关重要的作用,有望为肿瘤的精准治疗提供新的靶点和思路。

干细胞样肝原始细胞的分离和鉴定

目的 :证实小鼠胎肝中肝干细胞的存在。方法 :小鼠胎肝细胞的分离培养和免疫细胞化学等。结果 :从小鼠胎肝组织中成功地分离得到了AFP、CD34及Albumin等特异性分子标记阳性、并呈集落样生长的细胞系。结论 :小鼠胎肝中存在具有干细胞特性的原始细胞 。

C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU转基因小鼠肝脏的组织病理学观察

目的:研究乙型肝炎转基因小鼠品系C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏的组织学及免疫病理学特征。方法:以168只SPF级乙肝转基因小鼠及15只正常C57BL/6小鼠为研究对象,取肝组织连续切片,常规H E染色,并选取20 例有明显单个核细胞肝内浸润的肝标本,免疫组化原位鉴定白细胞分化抗原的肝内分布。结果:37.5%的转基因小鼠肝脏出现人慢性轻度乙型肝炎样的病理改变,病变率随月龄增大显著增高;32.7%有更轻微的非特异性炎症反应;肝内浸润的单个核细胞多数为CD3+、CD4+细胞,未发现CD57+、CD8+细胞浸润。结论:乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏可出现不同程度的病理改变,与人慢性轻度乙肝组织学相类似。

乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立

目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder)小鼠 ,再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性 ,PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育 ,并用 PCR法检测其子代小鼠。结果 :共注射受精卵 6 9枚。选取存活受精卵 5 8枚分别植入 4只假孕小鼠 ,产仔并存活 2 3只。经尾组织 DNA PCR筛选得到 5只整合 pre S2 - S基因的 founder小鼠 ,免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达 HBs Ag,进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论 :所建立的乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性 。

乙型肝炎病毒preS2蛋白在转基因小鼠肝脏中的表达

目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠首建者 (founder)及后代 ;免疫组织化学法在蛋白水平检测 pre S2蛋白在这些小鼠中的表达 ;H- E染色分析转基因小鼠肝组织的病理学变化。结果 :经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后 ,共出生 15只新生小鼠 ,其中存活 7只 ,经 PCR检测后获得 2只 founder转基因小鼠 ,命名为 C5 7- Tg N (pre S/ St) SMMU。免疫组织化学检测发现转基因小鼠肝细胞质中有 pre S 2蛋白表达 ,H- E染色发现转基因小鼠肝组织中央静脉周围有淋巴细胞聚集。将这 2只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配 ,进行传代培育 ,PCR法筛选阳性转基因小鼠 ,目前已传至 F2 代。 结论 :本研究成功建立了稳定遗传 3′末端缺失的 pre S/ S基因并表达 pre S2蛋白的转基因小鼠 C5 7- Tg N((pre S/ St) SMMU,它将是体内研究 3′末端缺失的 pre S/

Mx-cre转基因小鼠品系的建立及其培育

将携带ＭＸ启动子调控的Ｃｒｅ基因真核表达载体ｐＭｘ－ｃｒｅ线性化后，通过受精卵显微注射途径制备转基因小鼠。共注射９９个卵，产仔２０只，利用ＰＣＲ对小鼠进行筛选，以基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ确证，最后得到一个阳性的小鼠品系，进而将其保种和扩大繁殖。

肝癌循环肿瘤细胞临床应用研究进展

原发性肝癌是一种恶性程度高的肿瘤,易复发及转移,其中最常见的转移途径为血行转移。循环肿瘤细胞是肝癌血行转移的中心环节,实时监测循环肿瘤细胞对患者个体化治疗、疗效评估及监测肿瘤复发转移具有很好的价值,使其成为肝癌研究的热点,但由于肝癌循环肿瘤细胞缺乏特异性的细胞表面标记物,为进一步研究及临床应用造成一定的困难。本文就肝癌循环肿瘤细胞常用的检测技术及现阶段所进行的研究结果做一综述。

一种新型肿瘤干细胞标记物CD133

CD133蛋白是在人类造血干/祖细胞上发现的一种跨膜糖蛋白,最初被认定为造血干细胞的特异性标志,但后来发现CD133蛋白在神经干细胞、表皮干细胞、内皮祖细胞等多种干/祖细胞中都有表达。近年的研究发现,CD133在白血病干细胞以及脑肿瘤干细胞、大肠癌干细胞、前列腺癌干细胞、肝癌干细胞等多种实体肿瘤干细胞中均有表达,提示CD133可能是肿瘤干细胞的一种广谱标志物,在肿瘤干细胞的分选和鉴定中具有一定的参考价值。