林麝肠道中乳酸菌的分离筛选及益生特性

本研究旨在从健康林麝粪便中分离筛选用于改善林麝健康状况的潜在益生菌株,并对其进行体外益生性评价。共分离获得12株乳酸菌,结合细胞个体形态观察及细菌16S rDNA序列鉴定,体外评价其耐酸和耐胆盐能力,测定其对5种目标病原菌(大肠埃希氏菌Escherichia coli ATCC 25922、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 25923、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosaPAO1、肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidisATCC 13076和化脓隐秘杆菌Arcanobacterium pyogenes LSN3)的拮抗活性、自聚集和疏水性、抗生素敏感性、抗药性基因型和生长曲线。结果显示,5株植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)和1株乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)在pH 4酸性条件或质量分数0.5%胆盐环境中,存活率分别达88.5%和87%以上;能够抑制前4种目标病原菌(抑菌圈直径17.20~20.19 mm)和化脓隐秘杆菌LSN3(抑菌圈直径14.23~15.53 mm);与对照菌株副干酪乳酪杆菌(L. paracasei)L22具有相近的自聚集(53.1%~56.2%)和表面疏水率(52.9%~56.0%);对链霉素、环丙沙星和万古霉素耐药;携带万古霉素抗性基因vanX;具有快速生长的特点(培养24 h后OD600分别达9.0和7.1左右)。本研究筛选出的6株乳酸菌可作为后续开发林麝用益生菌制剂的一种可靠的菌株来源。

不同因素对光合细菌处理皂素生产废水的影响

【目的】利用逐级驯化后的光合细菌(PSB)处理皂素生产废水,研究PSB对皂素生产废水的净化效果及影响因素,为皂素生产废水的后续处理奠定基础。【方法】以PSB A21为供试菌株,在对其进行逐级驯化后,探讨培养条件以及废水初始pH值、处理温度、菌液投加量和处理时间对PSB净化效果的影响,并对PSB处理皂素废水的最佳条件进行了正交优化。【结果】在PSB处理皂素生产废水的4个影响因素中,影响净化效果的大小顺序为接种量>温度>处理时间>初始pH。PSB处理皂素生产废水的最佳工艺条件为:起始pH值8.0,温度30℃,接种量250 mL/L,黑暗好氧条件下培养96 h。在此条件下,PSB对皂素生产废水的COD去除率达68.96%。【结论】驯化后的PSB处理高浓度废水的适应性强,用其处理后皂素生产废水的COD显著降低。

铜绿假单胞菌LasR蛋白的表达及抗血清制备

目的将铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)中的调控蛋白LasR在原核系统中进行表达,制备LasR抗血清,为PA中las调控系统的研究奠定基础。方法以PA模式菌株PAO1全基因组为模板,PCR扩增lasR基因,PCR产物用Bam HI/EcoRI双酶切连接至p GEX-4T-1载体,获得重组表达载体p GEX-4T-1-lasR;PCR产物经Nco I/Xho I双酶切连接至p ET28a载体,获得重组表达载体p ET28a-lasR。将重组表达载体分别转化至大肠杆菌感受态细胞BL21中,分别以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达GST-LasR和His-LasR蛋白,通过GST或Ni^(2+)亲和层析纯化重组蛋白。将纯化后的His-LasR蛋白免疫新西兰大白兔,制备LasR抗血清;纯化后的GST-LasR蛋白用于LasR抗血清ELISA效价的检测。结果 lasR基因序列大小为717 bp;成功构建p GEX-4T-1-lasR和p ET28a-lasR表达载体。构建的工程菌能够有效表达目的蛋白His-LasR和GST-LasR,蛋白纯度大于95%;LasR抗血清的效价为1∶60 000。结论在原核系统中成功表达了可溶性LasR重组蛋白,并获得高效价的LasR抗血清,为PA中las调控系统的研究奠定了基础。

微生物处理皂素生产废水的研究

利用复合酵母菌与光合细菌处理皂素生产废水。结果表明,热带假丝酵母、产朊假丝酵母和卡尔斯伯酵母按体积比1∶1∶2混合,在温度30℃、接种量15%、处理时间72 h、装液量50 ml的条件下对废水的COD去除率达76.50%;再经光合细菌进一步处理皂素废水,在黑暗好氧条件下、接种量20%、培养96 h后,COD去除率达62.55%。酵母菌与光合细菌联用处理皂素生产废水COD总去除率达91.20%,pH由原来的5.0提高到7.8。

耐高浓度苯酚菌株的筛选及其降解特性研究

通过液体富集培养,平板培养分离法从焦化废水的污泥中分离出1株可耐受2 000mg/L苯酚的菌株,经16S rDNA序列分析,鉴定为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)。该菌能以苯酚为唯一碳源和能源生长。通过摇瓶试验和高效液相色谱(HPLC)分析法可知,在pH=7.5,温度为30℃的条件下,苯酚质量浓度在50～400mg/L时,该菌细胞生长和对苯酚的降解转换快速同步进行。当苯酚质量浓度在800～900mg/L,菌细胞依次出现快速生长、延缓生长、次快速生长3个生长时期,在前两时期内苯酚降解率低于5%,在次快速生长期内苯酚降解率从低于5%快速增加到100%。气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)测定结果表明,该菌可将苯酚转化成4-羟基-2-氧代戊酸、邻苯二酚、对苯二酚、3,4-二羟基苯甲酸和对羟基苯甲酸等中间产物。

甲醇耐受性脂肪酶产生菌Galactomyses geotrichum SXL-107发酵条件的优化

对甲醇耐受性脂肪酶产生菌Galactomyses geotrichum SXL-107产酶条件进行了优化.通过单因素试验确定碳源、氮源和诱导剂,响应面法确定发酵培养条件,250 mL摇瓶培养和10 L发酵罐发酵试验进行验证.SXL-107菌株优化后的发酵培养基成分为黄豆粉25.56 g.L-1、橄榄油16.74 g.L-1、蔗糖4.78 g.L-1、蛋白胨10.00g.L-1,(NH4)2SO45.00 g.L-1,KH2PO41.50 g.L-1和Mg2SO41.00 g.L-1,培养温度30℃,起始培养基pH6.0,诱导剂橄榄油于发酵培养的第0,6,12 h分3批添加,在250 mL摇瓶发酵水平上,脂肪酶活性达到317.21U.mL-1,较初始发酵条件时脂肪酶活性提高了3.05倍;在10 L发酵罐放大试验中,脂肪酶活性在发酵培养38h时达到最大值332.03 U.mL-1.

耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

为了实现耐有机溶剂脂肪酶基因的真核表达,参照GenBank公布的脂肪酶基因序列设计简并引物,通过PCR扩增出G.geotrichumSXL-107的全长1 692bp、编码563个氨基酸的脂肪酶基因lipI,基因登录号为JX074060。利用Signal P 3.0软件对lipI基因序列进行分析,将去除自身信号肽的成熟lipI基因克隆到诱导型表达载体pPIC9K上,构建胞外重组表达载体pPIC9K li-pI,转化毕赤酵母KM71,发酵培养72h,发酵上清液中脂肪酶活力达到70U/mL,与野生型脂肪酶产生菌Galactomyces geotrichum SXL 107相比,脂肪酶活力提高7倍。获得的重组脂肪酶的最适温度40℃、pH值为6.5,在10%的甲醇溶液中作用48h后仍然保持60%以上的酶活力。

鹰嘴豆发酵生产纳豆初探

以鹰嘴豆为原料,接种选育的纳豆枯草杆菌,采用新工艺发酵法生产的纳豆,比以大豆为原料传统方法生产的纳豆氨味低,拉丝现象少,口感好,纳豆激酶活性高的新型纳豆。并且缩短了发酵周期,提高了产品得率。本试验为广泛利用鹰嘴豆资源,增加产品品种,开阔市场,提高其综合加工利用率及附加值提供了一个非常重要的途径。

基于顺磁微粒的金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫层析试纸条的制备

采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试纸条进行测试研究。优化的顺磁微粒偶联抗体的缓冲体系为p H 9.0,5mmol/L硼酸,0.05%Tween-20;磁珠包被抗体量为125μg/2mg磁珠,封闭剂为0.25%的脱脂牛奶,磁珠保存液为5mmol/L硼酸、0.05%Tween-20＋0.05%Triton X-100,0.01%Na N3,0.5%BSA,p H9.0;建立的SEB顺磁微粒免疫层析试纸条T线抗体浓度为1mg/m L,最低检测限为1ng/m L,磁信号检测显示,该试纸条在SEB浓度0.1~1 000ng/m L范围内具有很好的线性关系。SEB顺磁微粒免疫层析法具有简单快速、灵敏度高、可定量的特点,可应用于SEB的快速检测。

共存碳源对施氏假单胞菌N2裂解苯酚的作用

研究了共存碳源对施氏假单胞菌N2在降解苯酚过程中积累2-羟基黏糠酸半醛(2-HMS)的影响,并用紫外光谱和气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对N2菌的生长过程进行了检测。结果表明,与单一碳源苯酚相比,N2菌在共存碳源甲醇、乙醇、丙酮存在的体系中生长快,且11 h内,苯酚同步降解率分别提高了4.5%、18.5%、16.6%,同时培养液中2-HMS积累量均达到最大。N2菌代谢苯酚可通过羧化反应产生对羟基苯甲酸,也可通过羟化反应产生邻苯二酚,后者通过间位开环裂解生成2-HMS,而甲醇、乙醇、丙酮与苯酚共存时,更易采用后一种代谢途径。

聚酰亚胺(PI)/无机纳米复合材料的制备、结构与性能

依据国内外聚酰亚胺(PI)/纳米复合材料的最新研究进展,重点阐述PI复合材料的制备、结构、性能及应用,展望了PI复合材料的发展趋势。列举了几种常用纳米粉体的特性,介绍了聚酰亚胺(PI)纳米复合材料的3种制备方法:溶胶—凝胶法、插层复合法、直接分散法,由于纳米粉体在PI材料中的分散性良好,使整个聚合物基体形成新的网络结构,利用纳米粉体改变了PI材料的性能,如力学性能、热学性能、加工流动性等,插层剂的加入对PI纳米复合材料的复合体系有明显改善作用。

探究式教学法在初中跳绳教学中运用与分析

将探究式教学方法运用到初中跳绳教学中的实验干预,揭示了探究式教学方法可能对初中跳绳教学的积极影响,旨在为将探究式教学方法运用到初中跳绳教学中并进一步迁移到其他课程的教学中提供参考。

初中体育与健康课教学中学生意志力的调查分析

意志力是学生学习和将来事业走向成功的重要心理因素。本文通过对初中生体育与健康课教学中学生意志力的调查分析,揭示了初中生体育与健康课上学生意志力的现状及存在的问题,并分析了影响学生意志力的主要因素,之后,提出了帮助初中生培养良好意志力的几点策略,以期以点带面,促进学生各科学习能力和综合素质的提高。

对初中学生体育与健康课学习态度的调查分析

学生的学习态度决定了学生的学习质量和结果,本文通过对初中学生体育与健康课学习态度的调查分析,揭示了初中学生体育学习态度及存在的问题,分析了影响初中学生体育与健康课学习态度的主要因素,提出帮助初中学生培养良好学习态度应采取的措施,以期为更好地开展初中体育教学提供借鉴。

加强声像档案管理之我见

声像档案是指国家机构、社会组织以及个人在从事各种活动中形成的对国家和社会有保存价值的，以照片、底片、影片、唱片、录音带、录像带等不同材料为载体，以影像、声音为主，并辅以文字说明的历史记录。声像档案是一个单位档案的重要组成部分。随着社会的发展及办公条件的改善，在机关工作和各类活动中形成了大量的声像档案。为了更好地保护好、利用好这些生动、形象的特殊载体档案，笔者仅对声像档案管理提出以下对策及建议：

利用复印机抢救褪变档案

对字迹褪变的档案如不采取有效的抢救措施,将导致档案无法提供利用。而档案馆大都保存着各种字迹的档案,那些字迹耐久性差的档案在缓慢地发生褪变。对已褪变的档案应及时进行抢救,延长其“寿命”,这是各级档案馆的主要工作任务之一。抢救褪变档案的方法很多,复印就是其中方法之一。复印机是30年代末美国物理学家卡尔逊发明的,到80年代在我国才逐渐普及。

铜绿假单胞菌RhlR抗血清制备

目的在原核系统中表达铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)PAO1的调控蛋白RhlR,制备兔抗RhlR抗血清。方法构建重组表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR并转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达GST-RhlR和His-RhlR蛋白,经GST或Ni^(2+)亲和层析纯化重组蛋白。将His-RhlR蛋白免疫新西兰大白兔,制备RhlR抗血清,GST-RhlR蛋白包被ELISA板,检测效价。结果构建的表达载体pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR经双酶切及测序鉴定证明构建正确;构建的工程菌表达的目的蛋白His-RhlR和GST-RhlR相对分子质量分别为29 000和54 000,表达量均约占菌体总蛋白的85%,纯度大于90%。制备的RhlR抗血清效价可达1∶80 000。结论获得高效价的RhlR抗血清,为PA中rhl调控系统的研究奠定基础。

核心链霉亲和素在毕赤酵母中的表达及纯化

目的构建核心链霉亲和素(core-streptavidin,CSA)酵母表达载体,表达、纯化CSA蛋白,并测定其活性。方法通过基因操作获得天然SA的核心活性区域基因片段,克隆至酵母表达载体p PIC9K,重组表达质粒p PIC9K-CSA经电击转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,甲醇诱导表达CSA蛋白。利用硫酸铵沉淀、2-亚氨基生物素琼脂糖凝胶亲和层析法纯化CSA蛋白,紫外光谱测定法检测CSA蛋白与生物素的结合活性。结果构建的CSA基因工程菌能有效表达目的蛋白,经硫酸铵沉淀、亲和层析两步法纯化后得到纯度约95%的CSA重组蛋白,其具有与生物素结合的活性,活性为13.6 U/mg。结论利用毕赤酵母表达系统能够有效分泌表达CSA蛋白,该重组蛋白具有良好的生物学活性,为CSA发酵产品的大规模纯化提供了依据。

金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)Z结构域串联体的克隆、表达和筛选

筛选一种高效重组金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)用于制备抗体纯化亲和介质。首先通过基因操作获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因,将目的基因分别克隆至pET-22b表达载体并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得不同串联个数的Z结构域基因工程菌,经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化得到Z结构域单体和二-五串体蛋白。纯化后的目的蛋白偶联至琼脂糖凝胶作为亲和层析介质,对人免疫球蛋白G(IgG)进行分离纯化。分析比较Z结构域串联体蛋白产量及其偶联的亲和介质对抗体吸附载量的差异。结果表明,构建的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因工程菌能有效表达目的蛋白,制备的凝胶亲和介质可特异性吸附人IgG。增加Z结构域串联数,重组蛋白产量和单位摩尔数多聚体蛋白吸附载量获得提高,其中,重组四串体蛋白产量大(160 mg/10 g湿菌体),对抗体的吸附载量高(34.4 mg人IgG/mL胶),更适合作为配基用于亲和层析介质的制备。