毒性病理学方法与技术在毒理学试验中的应用

在毒理学研究中毒性病理学作为重要的组成部分,既是临床前安全性评价工作中最基本的环节,也为毒理学安全性评价提供科学、准确的理论依据。该文主要从毒性试验染毒方法、实验动物的解剖、毒性病理学工作流程、生物安全等方面进行论述,同时分析了毒性病理学方法与技术在毒理学试验中的应用,在促进本实验室毒性病理技术整体发展的同时,为毒性病理学领域中的科研工作者提供参考价值。

鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

为调查湖北地区健康鸡群中产气荚膜梭菌的分布状况,从规模化养鸡场采集鸡肛门棉拭子样品,应用厌气肉肝汤和CW琼脂培养基培养、紫牛乳反应、革兰染色及生化试验进行细菌的分离鉴定,应用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型,并对分离菌株进行体外药敏试验。结果从120份样品中分离到9株(7.5%)产气荚膜梭菌,多重PCR都只扩增出α条带,毒素基因分型结果均为A型。药敏试验结果显示,分离菌株对链霉素、新霉素、丙氟哌酸、环丙沙星耐药,对丁胺卡那霉素,氯洁霉素中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林、四环素、头孢噻肟高度敏感。

鸽源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及毒力因子分析

通过从活禽市场上取鸽子泄殖腔拭子,分离鉴定了4株空肠弯曲杆菌(Campylobater jejuni)菌株,PCR调查发现,4株菌株均具有细胞膨胀毒素等9个重要的毒力相关因子。选取其中2株进行毒力基因序列分析,序列比对结果显示该鸽子源空肠弯曲杆菌的毒力基因序列与已测序的同时从人和禽屠宰场中分离到的空肠弯曲杆菌M1株的毒力基因相似度最高。

一株鸽源C型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

从武汉某地拾到一只死亡的信鸽,剖检观察其病变疑似鸽坏死性肠炎,从其肠内容物中分离到1株细菌,对分离菌株进行形态观察、生化试验、细菌外膜蛋白基因的聚合酶链式反应(PCR)扩增的基因型鉴定及动物试验等,结果鉴定该分离菌株为C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)。

弯曲杆菌多重PCR检测方法的建立

根据弯曲杆菌属细菌细胞致死性膨胀毒素cdtABC操纵子核酸序列,针对cdtA、cdtB、cdtC设计并合成了3对特异性引物,用于建立空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌和弯曲杆菌属细菌的多重PCR检测方法。试验证明,建立的多重PCR检测方法能鉴定弯曲杆菌属细菌,并区分出空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。该方法具有较好的特异性与敏感性,适合在实验室对弯曲杆菌进行检测与鉴定。

Aβ_(1-42)对大鼠小胶质细胞酸敏感离子通道的表达和电生理特性的影响

Aβ_(1-42)与小胶质细胞之间相互作用诱发的神经炎症反应已被视为阿尔茨海默病(AD)的重要病理指征,酸敏感离子通道(ASIC)参与了小胶质细胞的炎症应答和神经炎症免疫调节。为了探究Aβ_(1-42)对小胶质细胞ASIC的表达和电生理特性的影响,本研究利用Aβ_(1-42)孵育原代培养的SD大鼠大脑皮层小胶质细胞,免疫印迹技术和免疫荧光技术检测小胶质细胞ASIC1、ASIC2a、ASIC3的蛋白表达和分布情况,全细胞膜片钳记录Aβ_(1-42)对ASIC电流特性的影响,钙离子成像技术分析ASIC钙离子通透性的变化。结果显示:Aβ_(1-42)处理小胶质细胞后,能够诱导ASIC1的蛋白表达量增加,且其在细胞浆和细胞核中均有明显增加;胞外pH值快速降低诱发的ASIC电流,小胶质细胞胞内钙离子浓度明显增强,这种增强效应可被ASIC非特异性抑制剂阿米洛利和ASIC1特异性抑制剂PcTx1抑制。本研究结果表明,Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞ASIC1蛋白功能性表达增加,使得ASIC1易于被胞外快速酸化激活而表现出明显增强的电生理特性,进而影响小胶质细胞的炎症应答和免疫调节作用,为后续探究小胶质细胞感应通路和应答调节及神经退行性疾病发生提供了思路和参考。

金花茶花朵水溶性提取物毒理学安全性评价

金花茶(Camellianitidissima)为山茶科山茶属金花茶族植物,是中国8种国家一级保护植物之首,属《濒危动植物种国际贸易公约》附录物种[1-2]。金花茶为广西壮族传统用药,在《广西中药材标准》中记载用于治疗咽喉炎、肾炎、痢疾、肿瘤、便血、高血压和月经不调等病症[3]。它以叶和花入药,其叶主要用于咽喉疼痛、肾炎水肿、尿路感染、高血压和预防肿瘤等,其花主要用于便血、月经不调和降压减脂等。

乳氟禾草灵原药的亚慢性经口毒性

根据《农药登记毒理学试验方法》(GB 15670—1995)进行乳氟禾草灵原药亚慢性经口毒性试验。结果显示,高剂量染毒组大鼠血WBC计数降低,血清天门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶升高,雄鼠中性粒细胞比例升高,肾脏器系数偏高;中、高剂量染毒组大鼠单核细胞比例、血清尿素氮和肌酐升高,肝脏质量及脏器系数均偏高,雌鼠淋巴细胞比例降低。雌、雄大鼠亚慢性经口最大无作用剂量分别为3.81 mg/kg和3.50 mg/kg。

环丙唑醇的急性和亚慢性毒性研究

为探讨环丙唑醇对大鼠的急性和亚慢性经口毒性,在急性试验中设低(215 mg/kg)、中(464 mg/kg)、次高(1000 mg/kg)和高(2150 mg/kg)4个剂量染毒组;在亚慢性试验中设对照组和低、中、高剂量染毒组,雌/雄性大鼠实际染毒剂量分别为1.38/1.18、7.93/7.18、47.70/48.60 mg/kg。结果显示,大鼠环丙唑醇急性经口半数致死剂量(LD_(50))为316 mg/kg,亚慢性经口染毒大鼠部分血液指标和肝组织病理发生改变。环丙唑醇最大无作用剂量(NOAEL)分别为1.38/7.18 mg/kg(雌/雄),长期暴露对动物肝脏具有毒性作用。

玉竹桑白皮片对高血糖小鼠降糖作用的观察

目的探讨玉竹桑白皮片的辅助降血糖功效。方法采用胰岛损伤高血糖动物模型造模方法,以200mg/kg、400 mg/kg、1 200 mg/kg剂量(分别相当于人拟用剂量的5、10、30倍)的玉竹桑白皮片连续给予小鼠30 d,通过正常动物降糖试验和高血糖模型动物降糖试验进行辅助降血糖功能观察。结果正常动物降糖试验显示高剂量组(即1 200 mg/kg)动物空腹血糖与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高血糖模型组动物空腹血糖试验显示,各剂量组模型小鼠空腹血糖、空腹血糖下降值及血糖下降率与模型对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),糖耐量试验显示,与模型对照组比,1 200 mg/kg剂量组模型小鼠在给予葡萄糖后2 h,血糖值明显降低,血糖下降值及血糖下降率明显增高(P<0.05);0、0.5、2 h的血糖曲线下面积明显低于模型对照组(P<0.01);200、400 mg/kg剂量组作用间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论玉竹桑白皮片辅助降血糖功能动物实验结果阳性。

嘧草硫醚原药亚慢性经口毒性研究

目的在研究嘧草硫醚原药对大鼠的亚慢性经口毒性基础上,初步探讨其作用的靶器官。方法将80只SPF级SD大鼠随机分成4组,雌雄各半,分别用含0、15、60和240 mg/kg嘧草硫醚原药的饲料连续90 d经口喂饲,观察各组动物实验中的临床表现、食物利用率、体重变化情况,实验末期测定相关的血液和尿液学指标、脏器重量及脏器系数、病理组织学变化。结果试验期间,雌雄各剂量组动物活动正常,未见明显中毒体征和异常表现。与相应的对照组相比,中、高剂量组大鼠淋巴细胞百分比(The Ratio of Lymphocyte,LYM%)明显降低,中、高剂量组大鼠的中性粒细胞绝对值百分比(The Absolute Ratio of Neutrophils,GRA%)明显升高。中、高剂量组雄鼠尿素氮(Urinary Nitrogen,BUN)显著升高;中、高剂量组大鼠肌酐(Creatinine,CREA)升高;中、高剂量组雌鼠的白球比(The Albumin and Globulin Ratio,A/G)明显增高;中、高剂量组雌鼠总蛋白(Total Protein,TP)和球蛋白(Globulin,GLB)明显降低。高剂量雌鼠的肝脏重量及肝脏系数明显升高。病理结果显示高剂量组部分动物肾间质有少量炎细胞浸润和肝脏有轻度脂变。结论嘧草硫醚原药对雌、雄SD大鼠亚慢性经口毒性试验的最大无作用剂量(No Observed Adverse Effect Level,NOAEL)分别为11. 8 mg/(kg·bw·d)和11. 2 mg/(kg·bw·d),其长期暴露对动物肝肾具有潜在的毒性作用。