致肾盂肾炎大肠杆菌粘附素papG基因克隆及序列分析

目的 克隆F13型致肾盂肾炎大肠杆菌 (UPEC) 132株的粘附素基因papG并作序列分析。 方法 根据Ⅰ型papG(papGJ96 )和Ⅱ型 papG(papGIA2 )基因序列设计 3条引物 ,PG2和PG3分别为下游 3’端引物 ,PG1为两型papG上游 5’端共用引物 ,并在各引物 5’端加入限制性内切酶位点。以UPEC132染色体DNA为模板进行PCR扩增 ,将扩增产物克隆入质粒载体 ,筛选阳性重组质粒作序列分析。结果 UPEC132株以Ⅰ型 papG引物扩增时为阴性结果 ,以Ⅱ型 papG引物扩增时可获得约 110 0bp的DNA片段。扩增产物经克隆获得阳性重组质粒 pGC39和pGC10 3,对其序列分析显示 papG132编码337个氨基酸 ,与 papGJ96的同源性仅为 4 5 % ,而与 papGIA2的同源性为 98.6 %。与papGIA2比较 ,papG132核苷酸序列 +3位缺失 1个三联体密码 ,并在特异性受体结合域 +49位、+16 0位和PapD蛋白亚单位作用区 +2 72位、+314位存在错义突变 ,此外还存在 7处同义突变。结论UPEC132株的P菌毛不同于相同血清型的UPECJ96株 ,前者为F13型papA与Ⅱ型papG组合 ,后者为F13型 papA与Ⅰ型papG组合。Ⅱ型PapG粘附力较强 ,具有重要的临床意义。

高耐汞菌株的筛选及其生物学特性研究

[目的]从汞污染土壤中寻找高耐汞菌。[方法]用HgCl2选择性培养基，分离和筛选出耐汞菌，测定苴耐Hg^2＋和耐药性水平，检测耐酸碱能力和还原Hg^2＋能力，分析遗传背景。[结果]共筛出7株耐汞菌，形态学观察和生化鉴定分属假单胞菌或枯草杆菌。其中假单胞菌CHY-7菌株耐药性较少，耐Hg^2＋水平高达100mg／L，营养要求低，耐酸碱范围广（pH5．0～10．0）；16S rRNA基因分类鉴定为恶臭假单胞菌；PCR和DNA测序证实该菌株含merA基因，位于细菌染色体上；在Hg^2＋为5～50mg／L时，48h后还原Hg^2＋为Hg^0的效率为94．3％到82．8％。[结论]该菌株有望应用于工业汞污水的处理和汞污染土壤及水体的修复。

致肾盂肾炎大肠杆菌P菌毛粘附素基因的型别鉴定

目的 从基因水平鉴定致肾盂肾炎大肠杆菌 P菌毛粘附素的类型。 方法 根据 P菌毛 型(Pap GJ96 )、 型 (Pap GIA2 )和 型 (Prs GJ96 )粘附素的基因序列 ,选择非同源区设计合成三对引物。以全菌 DNA样品为模板 ,应用普通 PCR和复合 PCR技术获得三型 pap G的扩增。 结果 U PEC J96分别产生 4 6 1bp和 2 5 8bp的DNA片段 ;U PEC132和 U PEC136均产生 190 bp的 DNA片段。无 P菌毛对照株为阴性扩增。复合 PCR结果与普通 PCR完全一致。Pap G1 32 扩增产物的序列分析表明其与 Pap GIA2 之间具有 97.9%的同源性 ,但存在 4处点突变。 结论 U PEC132株 P菌毛粘附素为 型 Pap G,但与国外同型 Pap G比较 ,存在基因变异。复合 PCR技术用于pap

登革2型病毒E抗原基因的RT-PCR扩增及表达载体的构建

目的扩增并克隆登革２型病毒Ｅ抗原基因，构建Ｅ抗原基因表达载体。方法应用ＲＴ－ＰＣＲ法、基因克隆和限制性内切酶酶切分析。结果增殖病毒标准株并提取病毒总ＲＮＡ。在登革２型病毒Ｅ抗原基因两侧疏水区内设计一对ＰＣＲ引物。通过ＲＴ－ＰＣＲ，获得１６００ｂｐＥ抗原编码基因全长ＤＮＡ片段，将其克隆至ｐＫＫ２２３－３质粒的ｔａｃ启动子下游构建成Ｅ抗原表达载体。结论为型特异性Ｅ抗原基因的进一步亚克隆和表达奠定基础；为其他型别登革病毒Ｅ抗原基因的同类研究提供借鉴。

宋氏I相/福氏1b痢疾双价抗原菌株的构建

以菌体内重组方法将脱失了部分毒力基因片段的宋氏痢菌Ⅰ相抗原质粒诱动到已脱失140Md毒力质粒的福氏痢菌1b中,构建成兼具福氏及宋氏“O”抗原的二价菌株。该菌株不含编码卡那霉素抗性基因的Tn5;连续传25代仍对宋氏及福氏1b痢菌O抗血清呈凝集反应;质粒电泳图显示该二价菌株拥有供体菌赋予的75Md的质粒带。

LAK／IL－2治疗恶性肿瘤患者免疫功能的变化

２１例恶性肿瘤患者接受过继性免疫疗法治疗，采用自体血ＬＡＫ细胞（１～５）×１０＾８联合ＩＬ－２，４０万Ｕ静脉入，每周１～２次，连续１０次，观察治疗过程细胞免疫功能的表现。结果显示，１３例晚期肝癌患者治疗后末梢血淋巴细胞Ｔ亚群的ＣＤ４／ＣＤ８比值显著提高，ＮＫ细胞活性增强，８例晚期肺癌和胃癌患者，上述指标无明显变化，表明免疫过继疗法有一定的疗效，但有其适应症。

格列美脲联合二甲双胍治疗老年糖尿病对患者血糖、血脂和血管内皮功能指标水平的影响

目的 探究格列美脲联合二甲双胍治疗老年糖尿病对患者血糖、血脂和血管内皮功能指标水平的影响。方法 随机选取2021年1月—2022年12月就诊于莆田第九十五医院的131例老年糖尿病患者为研究对象,基于随机数表法分为对照组(65例)和观察组(66例)。对照组接受二甲双胍治疗,观察组在对照组的基础上结合格列美脲治疗。比较两组治疗前后的血糖水平、血脂水平、血管内皮功能指标水平。结果 治疗后观察组的FPG、HbA1c、2 hPG水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组LDL-C、TC、TG水平均低于对照组,HDL-C水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组FMD、EPCs水平均高于对照组,VEGF水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 采用格列美脲联合二甲双胍治疗老年糖尿病可降低其血糖水平,调节其血脂水平,并改善其血管内皮功能。

628株大肠杆菌R质粒的检测

本文检测来源于新生儿及健康猪的628株大肠杆菌的耐药谱及R质粒。这些菌株对四环素的耐药率最高,人源菌株对氨(?)青霉素和庆大霉素的耐药率高达67.82％和51.49％。R质粒的检出率在60％以上。多重耐药菌株中R质粒检出率特别高。三耐以上菌株的耐药谱型多以四环素、磺胺抗性为基础,对比过去的资料;耐药类型由四耐已发展到以五耐以上居优势;应引起医务界及社会上的重视。

丙型肝炎病毒抗体一步快速检测法及与ELISA的比较

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）引起的一种非肠道传染性肝炎。感染ＨＣＶ后，５０％～８５％的病人转为长期带毒者；其中２５％的病人于５～１０年左右出现肝硬化甚至肝癌［１，２］。ＨＣＶ主要通过输血、静脉毒品注射针头、性传播和一定程度的家庭传播。因此，现在...

宋氏Ⅰ相抗原质粒的分子克隆及与Ⅰ相抗原突变株的互补检测

用“鸟枪”法克隆宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原质粒 pFEG 001,获得13株重组子。将其分别导入宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原突变株 BW 201～204进行互补检测,发现重组质粒 pBL 108可反式互补于Ⅰ相抗原突变质粒 paW 204,恢复Ⅰ相抗原的表达;该重组质粒中的插入片段分子量为1.0kb。互补结果提示该片段内至少含有1个与Ⅰ相抗原表达有关的基因,据此推测宋氏Ⅰ相抗原的表达受多基因控制。

肠球菌庆大霉素高耐性传递

目的 对临床分离的肠球菌进行药敏分析 ,研究其庆大霉素高耐性的遗传学基础。 方法 通过电击转化和质粒丢失试验确定庆大霉素高耐性质粒 ,PCR扩增和末端双脱氧法测序分析庆大霉素高耐基因。 结果 确定一庆大霉素高耐性质粒 (p G30 1)及其重组质粒 (p G40 1) ,PCR扩增出一 1.6 kb扩增片段 ,测序结果与 6 '- O-氨基糖苷乙酰转移酶 - 2 " - N -氨基糖苷磷酸转移酶 [aac(6 ') - aph(2 " ) ]双功能酶基因基本一致。 结论 在所分离的肠球菌中 ,耐药性相当普遍。庆大霉素高耐基因可位于不可自主接合转移的较小质粒上 ,在电击转化过程中可发生重组 ,在此质粒中介导庆大霉素高耐性的基因是 aac(6 ') - aph(2 " )

针对性护理对糖尿病新生血管性青光眼Ahmed青光眼引流阀植入术患者预后的影响

目的研究针对性护理对糖尿病新生血管性青光眼Ahmed青光眼引流阀植入术患者预后的影响。方法选取该院2017年6月-2019年6月的80例行Ahmed青光眼引流阀植入术的糖尿病新生血管性青光眼患者进行研究观察,随机将其分为实验组及对照组各40例,对照组进行常规护理,实验组在对照组基础上进行针对性护理,治疗结束后比较两组患者患眼眼压情况及出现术后并发症情况。结果治疗结束后实验组患者出现术后并发症为4例,发生率为10.00%;对照组患者术后并发症为18例,发生率为45.00%;实验组患者眼压控制水平在8~14 mmHg为18例,眼压控制水平在15~21 mmHg为19例,眼压控制水平在21 mmHg以上为3例,对照组患者眼压控制水平在8~14 mmHg为12例,控制水平在15~21 mmHg为10例,控制水平大于21 mmHg为18例,设定眼压水平在8~21 mmHg为控制眼压水平合格,实验组达标率为92.50%,对照组达标率为55.00%。以上数据比较两组均差异有统计学意义(P<0.05)。结论针对性护理对糖尿病新生血管性青光眼Ahmed青光眼引流阀植入术患者预后效果明显,有利于控制患者眼压降低术后潜在并发症发生,值得临床推广。

新生儿及猪肠道菌携带的庆大霉素耐药基因的检测与分析

本文检测新生儿351株及健康猪的426株肠道菌的耐药谱及R质粒。检出庆大霉素耐药率人源为55.56％,猪源为13.85％。耐药质粒谱的分析结果表明:庆大霉素耐药菌株多为多重耐药菌株,未发现单耐庆大霉素的菌株。庆大霉素耐药菌株中R质粒的检出率人源为58.97％,猪源为52.54％。应用源自美国、澳洲及本室的庆大霉素耐药基因探针对分离的庆大霉素耐药菌株进行Southern印迹杂交,又发现了另一种与之不同源的庆大霉素耐药基因,并对该基因进行了分子克隆和初步分析。本文对耐药基因来源,扩散以及危害性问题进行了初步分析。