基于线粒体ND6基因检测犬感染细粒棘球绦虫的粪便PCR方法

目的旨在了解动物包虫病流行区内犬细粒棘球绦虫的感染情况。方法本研究利用Qiagen DNeasy Powersoil试剂盒对犬粪提取DNA,并从细粒棘球绦虫线粒体全基因组中筛选出完整线粒体ND6基因作为靶基因,建立一种可对犬粪中细粒棘球绦虫同时进行检测及基因分型的PCR方法。结果该法特异性很高,仅能扩增出细粒棘球绦虫的目的条带而对照组均无条带扩增。其灵敏度达到4pg的DNA含量。当犬人工感染约50000只原头蚴时,该法最早可以扩增出感染第13d粪便中的ND6目的基因。同时,对40份随机采自包虫病流行区的待检犬粪进行PCR检测,共有6份样品可扩增出目的条带且其基因型均属G1型,其检测及分型结果均与经典基因分型依据(COX1基因片段)的结果一致。结论本研究建立的粪便PCR方法具有很高的特异性和灵敏度,并可用于检测犬的细粒棘球绦虫早期感染情况。对于PCR检测阳性者,其产物经测序分析后也可用于细粒棘球绦虫的基因分型及种群遗传结构的分析研究。

毛蕊花糖苷抑制2型猪链球菌的溶血素蛋白活性而降低其小鼠致病性

为了探究天然化合物毛蕊花糖苷(verbascoside, VBS)对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2, SS2)致病性的作用,本研究通过测定最低抑菌浓度、绘制细菌生长曲线及红细胞溶血试验,发现低浓度下的毛蕊花糖苷不影响猪链球菌的正常生长,但对其溶血活性有显著抑制作用;免疫印迹试验表明,毛蕊花糖苷不影响2型猪链球菌分泌溶血素蛋白(suilysin, SLY);通过分子对接预测毛蕊花糖苷可与SLY的2个氨基酸残基(SER-388、GLN-441)形成3条氢键结合从而使毛蕊花糖苷嵌入SLY蛋白的第4结构域,同时体外溶血活性试验进一步证实毛蕊花糖苷可直接抑制SLY介导的溶血活性;最后,小鼠体内试验结果表明,毛蕊花糖苷可明显提高2型猪链球菌感染小鼠的存活率。综上,毛蕊花糖苷在不影响2型猪链球菌生长活性的情况下,可通过抑制溶血素活性来降低2型猪链球菌对小鼠的致病性。

川射干鸢尾苷元磺酸钠体外抗病毒作用研究

目的:研究川射干鸢尾苷元磺酸钠体外抗柯萨奇病毒和副流感病毒的效果,为抗病毒新药研发提供依据。方法:建立柯萨奇病毒感染Vero细胞、副流感病毒感染LLC-MK2细胞模型,以细胞增殖检测(CCK-8)法或细胞病变效应(CPE)法作为检测方法,了解药物对细胞的毒性以及体外抗病毒的效果,实验中以利巴韦林作为对照药物。结果:川射干鸢尾苷元磺酸钠对Vero细胞和LLC-MK2细胞的TC50浓度分别为2157.50μg/ml和1577.29μg/ml,川射干鸢尾苷元磺酸钠能明显抑制柯萨奇病毒和副流感病毒所致的细胞病变,IC50分别为114.05μg/ml和312.50μg/ml,治疗指数(TI)分别为18.92和5.05。结论:在体外抗病毒实验中,川射干鸢尾苷元磺酸钠显示出抑制柯萨奇病毒和副流感病毒的作用。