蛋白酶体抑制剂Epoxomicin对视网膜色素上皮细胞自噬-溶酶体途径的影响

【目的】研究抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)对自噬-溶酶体途径(ALP)的影响及相关作用机制。【方法】人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19共分为3组,分别为DMEM空白对照组、DMEM+DMSO阴性对照组、DMEM+Epoxomicin实验组。应用蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光法检测泛素化蛋白的表达,观察UPP功能的改变情况;观察LC3,LAMP1、LAMP2的表达,评价自噬作用和溶酶体的功能变化情况;观察HDAC6,p62的表达,初步探索UPP抑制对ALP改变的分子机制。【结果】采用蛋白酶体抑制剂Epoxomicin抑制泛素-蛋白酶体途径后,细胞内泛素化蛋白质聚集物增多;自噬溶酶体途径被激活,自噬标志物LC3表达增高,溶酶体膜相关蛋白LAMP1、LAMP2蛋白水平表达亦增高;抑制UPP后HDAC6和p62表达升高,可能参与ALP的激活过程。【结论】泛素-蛋白酶体途径抑制后,自噬溶酶体途径被激活且参与蛋白质聚集物的降解。

抑制泛素-蛋白酶体途径对晶状体上皮细胞自噬的诱导作用

目的在晶状体上皮细胞中通过蛋白酶抑制剂MG132抑制泛素-蛋白酶体途径活性,探索其对自噬作用的影响及相关机制。方法使用蛋白酶抑制剂MG132作用于晶状体上皮细胞,阻断泛素-蛋白酶体途径的功能,通过蛋白免疫印迹法检测泛素化蛋白质水平评价泛素-蛋白酶体系统活性。蛋白免疫印迹法观察自噬作用活性标志蛋白LC3-Ⅱ的表达情况,共聚焦免疫荧光显微镜下观察LC3、p62的表达与分布。蛋白免疫印迹法检测p62表达的变化。结果在MG132作用后,晶状体上皮细胞中泛素化蛋白聚集物明显增加。随着抑制时间的延长,LC3-Ⅱ的表达量也随之增加,自噬作用活性增强,p62的表达也明显增加。结论在晶状体上皮细胞中,当泛素-蛋白酶体系统活性受抑制时自噬作用活性增强。

一个白内障家系的临床特征及基因突变研究

目的对1个先天性绕核粉尘状白内障家系的临床特点及基因突变进行研究,探索先天性白内障发病的遗传机制。方法收集确诊为常染色体显性遗传的一个绕核粉尘状白内障家系的外周静脉血,提取基因组DNA,针对现有国内外文献已报道的与该家系白内障表型相关的10个基因设计引物,对患者基因片段进行扩增和序列分析,比对已发现的10个基因序列,查找是否有序列改变。结果被检查者的10个发病相关基因片段的序列中,GJA3基因的外显子发现杂合性突变位点(912C>A,1372A>G),其余9个与GenBank发表的正常序列相同。结论 GJA3基因外显子上发现了新的杂合性突变位点,其对先天性白内障的作用需进一步的研究。

农村小学信息技术教育现状的分析与对策

当前农村中学信息技术教学存在很多问题,这些问题直接影响了老师的教学,限制了学生对计算机知识的掌握和发展。同时由于学生地处乡村,大多数学生到了初中后才有机会接触到计算机。这些都给信息技术教学造成相当大的困难。如何提高信息技术教学效果,探索适合农村学生信息技术教学模式,提高教学效率成为了当前信息技术教学的关键。

浅谈如何培养小学生学习信息技术的兴趣

小学生年龄较小,认识水平和认知水平相对较低,但孩子们有强烈的好奇心,好胜心也特别强,作为小学信息技术教师要结合小学生的心理特点,掌握最新的学术动态,不断更新并优化自身的知识系统,选择不同的教学方式,有计划、有目的地采取多种有效措施,以趣味性为导向设计教学环节,构建丰富、多彩、生动的课堂,以培养学生学习信息技术的兴趣,打开学生的智慧之门,让课堂焕发勃勃生机。

角膜后弹力层内皮移植治疗角膜内皮细胞功能失代偿的初步临床观察

目的 探讨在我国角膜内皮功能失代偿患者行角膜后弹力层内皮移植术（DMEK）的疗效.方法 病例系列研究.对2016年7至9月中山大学中山眼科中心收治的10例角膜内皮功能失代偿患者行DMEK,其中男性2例,女性8例,年龄（54.1±16.4）岁.采用徒手操作从供体角膜剥离出后弹力层和内皮层,形成内皮植片卷,经锥兰染色后用推注器注入患者前房,展平内皮植片后前房注入空气固定植片.术后随访3-6个月,观察视力、内皮植片位置、角膜厚度和内皮细胞密度.对术前和术后3个月的角膜厚度数据进行配对t检验.结果 术后第1天,除1例患者出现角膜植片卷曲需再次行DMEK外,其余9例患者角膜植片在位.术后1个月时,7例患者眼前节OCT提示角膜内皮植片贴附平整,角膜厚度从术前的（680±78）μm下降至（620±67） μm （t=2.677,P=0.025）,角膜后表面结构正常.术后3个月时,6例角膜透明,最佳矫正视力为0.4- 0.8,角膜内皮细胞密度为（1 342.3±436.5）个/mm^2.角膜厚度（612±70）.μm,与术前比较明显下降（t=2.971,P=0.016）.结论 我国角膜内皮功能失代偿患者行DMEK是可行的,能有效改善视力.由于手术难度较大,对眼前节异常的患者应审慎开展.

角膜后弹力层前内皮移植术治疗角膜内皮功能失代偿的临床观察

目的探讨角膜后弹力层前内皮移植术（PDEK）治疗角膜内皮功能失代偿的特点。方法回顾性病例系列研究。收集2016年7至12月在中山大学中山眼科中心就诊的角膜内皮功能失代偿患者20例，其中男性8例，女性12例，平均年龄（59.3±11.8）岁。对所有患者行PDEK，采用大气泡技术分离Dua层、后弹力层和内皮层，制作直径为7.75或8.00 mm的PDEK植片，经0.06%锥兰染色后植入患者前房，展平并注入空气固定植片。术后随访6个月，观察视力、内皮植片位置、角膜厚度和内皮细胞密度。对术前和术后6个月的角膜厚度进行配对t检验。结果采用大气泡技术制作PDEK植片的成功率为90%（18/20）。PDEK手术成功率为90%（18/20）。术后16例（16/18）患者眼前节相干光层析成像术检查结果显示角膜内皮植片贴附平整，仅2例（2/18）患者出现内皮植片脱离。术后6个月时，14例（14/18）患者角膜透明，最佳矫正视力为0.4~1.0。角膜内皮细胞密度为（1 389.3±373.2）个/mm2。术后6个月时中央部角膜厚度为（605±45）μm，与术前（655±56）μm比较差异有统计学意义（t=2.137，P=0.032）。结论PDEK植片制作成功率高，可以减少供体浪费。PDEK植片较容易展平和固定，提高了手术成功率。