PRRSV、SS和Pm多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

为了建立一种可同时检测并鉴别猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪链球菌(SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pm)多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,本试验通过MEGA7.0分析NCBI上已登录的3种病原体基因序列,分别根据PRRSV的ORF6基因、SS的GDH基因和Pm的KMT1基因设计出特异性引物和探针,并对反应条件进行优化。结果显示,该方法能够特异性地检测PRRSV、SS和Pm,对其他病原无交叉反应;对PRRSV、SS和Pm的最低检测浓度分别为9.93×10^(2)、1.10×10^(2)和1.07×10^(2)拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于1.85%。结果表明,该方法特异性强、灵敏性高、稳定性好,可应用于临床检测。

猪轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立及初步应用

为了对早期猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染情况进行监测,根据GenBank中已有的A型PoRV VP6序列,设计2对引物和荧光定量探针,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并对该方法特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法特异性强、重复性好、灵敏度高,可检测到101拷贝/μL。经对2366份腹泻仔猪的粪便样品进行检测,所建立的方法检出率(5.92%,140/2366)高于常规RT-PCR(4.95%,117/2366),两者的符合率为98.58%。结果表明,本研究建立的PoRV TaqMan荧光定量RT-PCR方法可用于猪轮状病毒病的临床检测。

PRRSV感染仔猪腹股沟淋巴结组织病理学观察及转录组分析

为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染仔猪导致的腹股沟淋巴结的组织病理学变化及致病机制,对PRRSV感染仔猪腹股沟淋巴结进行组织病理学观察及转录组分析。结果显示,PRRSV感染仔猪腹股沟淋巴结肿胀出血,镜检观察可见淋巴组织结构模糊,淋巴细胞减少,出血;淋巴小结数量减少,界限不清,生发中心大量淋巴细胞坏死。基于Illumina测序平台,运用RNA-seq技术进行建库测序和生物信息分析,发现TLR8、CCL5、CCL8、IFNG、IRF5、TNFSF13B等炎性因子差异性表达,Toll样受体通路、NF-κB信号通路、TNF信号通路等通路被激活,提示这些细胞因子及信号通路参与PRRSV感染引起的淋巴结炎的病理变化过程。