大鼠纹状体中间神经元对兴奋毒性损伤特征性反应的形态学证实

目的兴奋毒性是导致中枢神经元死亡的主要因素之一。为此,本实验旨在形态学探察证实纹状体不同类型中间神经元对兴奋毒性损害因素的特征性反应。方法借助喹啉酸(QA)兴奋毒性损伤模型、组织化学和免疫组织化学方法探察证实纹状体损伤区不同类型中间神经元的形态和数量变化。实验数据以SPSS软件统计分析。结果①纹状体损伤区神经元的丢失显示不同的形式;即在损伤灶中央区绝大部分神经元均显著减少;在过渡区中等大小的神经元严重损害,一些大体积、组织化学深染色的神经元仍然幸存。②五种中间神经元的免疫组化结果显示在纹状体损伤中央区中间神经元完全丢失,但具有特征性变化的是过渡区,该区域中间神经元胞体数量变化不明显,而轴突出现大量的增生性变化,尤其是Cr最为显著,其表现为密集纤维网络的形成及大量的串珠样变化。结论纹状体中间神经元对兴奋毒性损伤的反应程度与受累区域相关,损伤过渡区中间神经元轴突形态和数量显示增生特征性的变化。结果提示过渡区可能是决定中间神经元生存和死亡的关键部位,以及中间神经元可能牵涉到纹状体兴奋毒性损伤的病理机制。

BDA神经示踪研究证实大鼠纹状体神经通路连接

目的为了观察证实纹状体神经元的形态定位和突触连接,以及由此证实神经示踪技术在此领域的实用性和有效性。方法实验借助示踪剂立体定位注射,并结合免疫组化和免疫电镜超微结构技术,实验数据以SPSS10.0软件统计处理。结果 (1)神经示踪剂BDA显示较好的定向运送特性,具有敏感和理想的标记效果。借助示踪剂BDA注射的逆行单标记实验结果显示纹状体-SNr和-GPe两类投射神经元的胞体大小和分支数量无明显的形态学差异,在免疫电镜下明显可见阳性树突和树突棘及其所形成的兴奋性突触连接。光镜下可见BDA顺行标记的PFn神经元的轴突终末密集分布于纹状体,并在电镜下清晰可见这些阳性终末与纹状体神经元之间的突触连接。(2)神经示踪结合免疫组化双标记显示纹状体-SNr和-GPe神经元均较少定位于Patch间区,而且均与纹状体Parv中间神经元之间无明显定性关系,但可见中脑TH阳性纤维的密集分布。在电镜超微结构水平可见BDA顺行标记的PFn阳性终末分别与纹状体-直接通路和纹状体-间接通路神经元形成典型的兴奋性突触连接,但与两者之间,及其所属的树突和树突棘之间的突触连接百分率均没有明显的统计学差异(P>0.05,P>0.05)。(3)荧光双标记结果显示BDA标记的PFn阳性终末和VG lut2抗体的免疫标记的背侧丘脑-纹状体阳性终末,在纹状体内呈现95.4%的共存率,而且后者标记更充分。同时也证实纹状体-SNr和-GPe两类投射神经元相互之间不显示可见的共存关系。结论 BDA为高度敏感的神经示踪剂,能够较为方便和充分地标记目的神经元和突触结构。纹状体-SNr和-GPe两类投射神经元的形态结构、分布形式无明显的差异。中脑和背侧丘脑神经元均与纹状体神经元之间存在形态学联系,尤其是背侧丘脑神经元与纹状体-直接通路和纹状体-间接通路神经元之间形成典型的兴奋性突触连接,提示其对纹状体神经元可能具有广泛的兴奋作用。

3-NP诱导大鼠纹状体损伤的组织病理学证实

目的探察证实3-NP对实验大鼠纹状体的损害作用。方法实验借助行为学探测、经典组化和免疫组化染色技术对大鼠运动行为学和纹状体组织病理学变化进行形态学探察,实验数据采用SPSS软件统计学处理。结果①运动行为学探测显示大鼠过平衡木的启动延搁时间和完成全过程时间明显延长(P<0.05,P<0.05),以及前爪滑落次数与3-NP处理之前比较具有统计学差异(P<0.05),其抓握时间也明显比3-NP处理之前延长(P<0.05)。②组织学探察显示,多种组化染色均在实验大鼠纹状体的背外侧区恒定出现一块明显的坏死灶,发生率为80%。坏死区及其周边区绝大部分神经元发生丢失,仅有少数体积较大的细胞幸存。Golgi染色显示在周边区幸存神经元的树突发生明显断裂和弯曲。酶组化显示病灶区SDH明显淡染,周边区可见一些强反应的细胞。③神经元特异性抗体探察显示坏死灶及其周边区神经元丢失严重,纹状体投射神经元的丢失更显著。对神经元死亡和损伤性质的进一步鉴定结果显示在坏死灶及其周边区均可见大量凋亡细胞。结论 3-NP特异性地诱导纹状体背外侧区神经元损伤,纹状体不同类型神经元对3-NP损伤显示不同的敏感性,凋亡和能量代谢障碍因素牵涉到此病理过程。