SATB2在口腔鳞癌中的表达及对细胞增殖的影响

目的:检测核基质蛋白特异AT序列结合蛋白2(SATB2)在口腔鳞癌组织中的表达,探讨其对口腔鳞癌细胞增殖的影响。方法:采用实时定量RT-PCR和Western blot分别检测口腔鳞癌组织及HN4细胞系中SATB2的基因和蛋白的表达情况;采用免疫荧光染色检测SATB2在HN4细胞系中的分布情况;通过转染慢病毒的方法过表达SATB2后,CCK-8实验检测其对口腔鳞癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞周期相关蛋白P63、Cyclin B1及细胞内STAT3磷酸化水平;构建裸鼠荷瘤实验模型,观察其对移植瘤生长的影响。结果:SATB2在口腔鳞癌组织及HN4细胞系中呈高表达,而在癌旁组织和人口腔角质细胞中呈低表达(P<0.05);SATB2基因过表达后显著促进口腔鳞癌细胞的增殖能力,上调细胞周期相关蛋白P63、Cyclin B1,细胞内STAT3磷酸化明显上升,促进体内移植瘤的生长(P<0.05)。结论:SATB2在口腔鳞癌组织及细胞系中表达升高,过表达SATB2能促进肿瘤细胞的增殖能力。

SATB2在口腔鳞癌中的表达及其与迁移、侵袭的临床意义研究

目的:探讨口腔鳞癌中的核基质蛋白特异AT序列结合蛋白2(SATB2)表达水平的临床意义和对口腔鳞癌生物学行为的影响。方法:收集58例口腔鳞癌标本,检测SATB2的表达情况,分析SATB2表达水平与病理参数之间的关系及与患者总体生存率的关系;用载有SATB2的慢病毒转染HN6细胞,Western blot及实时定量RT-PCR检测转染效果,并通过划痕愈合、Transwell、Invasion实验检测SATB2对HN6细胞生物学行为的影响。结果:统计学结果表明,高表达的SATB2与患者年龄、性别、病理分级无关,但与TNM分期、颈淋巴结转移及临床分期密切相关,与患者的不良预后密切相关;SATB2成功转染HN6细胞系并得到稳定过表达SATB2的Lv-SATB2-HN6细胞;过表达SATB2的HN6细胞迁移、侵袭能力明显高于HN6细胞。结论:SATB2在口腔鳞癌组织及细胞系中表达增高,过表达SATB2能促进肿瘤细胞迁移、侵袭能力。

miR-34a通过下调SATB2抑制口腔鳞癌增殖、迁移和侵袭的初步研究

目的:检测mi R-34a在口腔鳞癌组织中的表达,探讨其是否可以通过调节SATB2的表达影响口腔鳞癌的增殖、迁移和侵袭。方法:采用实时定量RT-PCR的方法检验口腔鳞癌和正常组织、细胞中mi R-34a基因的表达水平;在过表达SATB2的HN6细胞中转染mi R-34a mimic质粒后,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,流式细胞术检验细胞周期,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化,细胞侵袭实验检测mi R-34a对细胞侵袭能力的影响;同时提取细胞内总蛋白,采用Western blot的方法检测与侵袭相关的基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9以及SATB2的表达;通过裸鼠荷瘤模型检验mi R-34a对SATB2表达及移植瘤生长的影响。结果:mi R-34a在口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系HN6中呈低表达,而在癌旁组织和人口腔角质形成细胞中呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.05);在过表达SATB2的HN6细胞中转染mi R-34a mimic质粒后,细胞的增殖,迁移和侵袭能力明显减弱;在裸鼠皮下荷瘤实验中,转染了mi R-34a mimic质粒的过表达SATB2的HN6细胞所成的瘤体较对照组明显减小(P<0.05)。结论:mi R-34a可以通过抑制SATB2的表达来抑制口腔鳞癌的增殖、迁移和侵袭。

miRNA-448在肿瘤中作用的研究进展

microRNA(miRNA)是广泛存在于真核生物中的一种具有高度保守序列的非编码蛋白,长度为20到24个核苷酸,它参与细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞活动的调控。其中miRNA448会降低脂肪细胞的分化,与甘油三酯的堆积和脂肪细胞的表达相关,参与肥胖的自我调控机制。而且miRNA-448在研究中被发现通过影响丙型肝炎病毒的复制,来影响机体被微生物感染后的免疫反应。同时在肝癌、乳腺癌、胶质瘤等肿瘤中的表达异常,成为一种新的生物标记物,并通过与多个靶基因SATB1,NF-κB和5-HT2B等的作用参与癌症分化、侵袭、转移。近来我们在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中通过高通量深度测序技术构建miRNA和mRNA表达谱,发现miRNA-448在OSCC中对比癌旁组织增高10倍,为数百种检测的miRNA中增高最多,miRNA-448可能在OSCC中起着十分重要的作用,但是miRNA-448在OSCC中尚无任何研究报道,为了奠定miRNA-448在OSCC中作用的深化认识,因此在此对miRNA-448的研究进展进行综述。

MageD1在口腔鳞癌中的表达及其促进凋亡作用的研究

目的:检测口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系中黑色素瘤相关抗原D1(Mage D1)的表达,并在口腔鳞癌细胞系HN6中通过转染慢病毒的方法过表达Mage D1,探讨其对细胞凋亡的影响。方法:收集临床标本,通过Western blot和RT-PCR的方法检测口腔鳞癌以及HN6细胞系中Mage D1的表达量,用载有Mage D1的慢病毒转染HN6细胞,检测转染效果和Bax、CleavedCasepase3等凋亡相关蛋白的表达,并采用裸鼠荷瘤实验研究肿瘤体内生长的情况。结果:Mage D1在口腔鳞癌组织及HN6细胞株中较正常组织呈低表达,Western blot及RT-PCR结果表明,Mage D1成功转染并得到稳定过表达Mage D1的Lv-Maged1细胞,并且过表达Mage D1的HN6细胞中Cleaved-Casepase3和Bax的表达量高于HN6细胞,荷瘤实验证明Mage D1具有抑制肿瘤生长作用(P<0.05)。结论:Mage D1在口腔鳞癌组织及细胞系中表达降低,过表达Mage D1能促进肿瘤细胞凋亡。

包载血管内皮生长因子的乙二胺/聚己内酯微囊的制备及其生物活性的研究

目的采用乳化溶剂挥发法制备一种新型的包载血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的经过乙二胺(ethylenediamine,ED)修饰的聚己内酯(polycaprolactoe,PCL)微囊支架(VEGF/ED-PCL),测试其表征,并研究其对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的粘附、增殖和成血管作用。方法运用乳化溶剂挥发法制备PCL微囊,以激光粒度分析仪测试其粒度分布;通过二氯甲烷蒸汽熏蒸微囊,扫描电镜扫描支架表面形态,选取融合度最适宜的支架;体外释放实验测试VEGF微囊的体外释放性能;使用乙二胺浸泡法修饰PCL微囊支架,利用接触角测试仪测试其亲水性;将HUVEC细胞接种于微囊支架上,扫描电镜观察细胞在支架上的形态,并通过CCK-8实验测试实验组和对照组细胞生长情况;同时将实验组和对照组支架植入小鼠皮下,2周后处死小鼠,取得支架周围组织,行免疫组化染色,光学显微镜下比较两组微血管形成数目。结果成功制备VEGF/ED-PCL微囊支架;VEGF/ED-PCL微囊支架细胞增殖高于VEGF/PCL微囊支架组、PCL微囊支架组;植入VEGF/ED-PCL微囊支架的小鼠皮下微血管生成高于PCL支架组,结果具有统计学差异(P<0.05)。结论通过制备乙二胺修饰的包载VEGF的PCL微囊支架有很好的体外缓释性能,表面适宜成血管细胞粘附及增殖,在小鼠体内促进血管的形成。