耐顺铂人肺腺癌细胞系A_(549)^(DDP)耐药机理进一步探讨

应用递增浓度的方法建立了一株顺铂（ＣＤＤＰ）耐药细胞系Ａ５４９ＤＤＰ。用溴化乙啶荧光分光光度法测定细胞内Ｐｔ－ＤＮＡ链间交联物（ＩＣＬ）；用无焰原子吸收光谱法测定细胞浆内及细胞核内铂含量；用流式细胞法及荧光显微镜测定铂的外排速度。结果显示：耐药细胞Ａ５４９ＤＤＰ较亲代敏感细胞Ａ５４９对ＣＤＤＰ耐受性增加８．９倍，与亲代敏感细胞Ａ５４９相比，Ａ５４９ＤＤＰ胞浆内及核内ＣＤＤＰ积聚分别为亲代细胞的１６．９％与２４．３％，铂含量与ＣＤＤＰ浓度正相关；Ａ５４９ＤＤＰ外排ＣＤＤＰ的功能较Ａ５４９明显增强，ＩＣＬ形成量低８４．１％，而修复功能增强２倍。结果提示：Ａ５４９ＤＤＰ细胞内ＣＤＤＰ积聚减少和修复功能增强是ＣＤＤＰ的主要耐药机理。

110例肺癌疗前MRP检测的临床意义

目的：检测１１０ 例疗前肺癌标本多药耐药相关蛋白（ ＭＲＰ） 的表达与预后的关系。方法：采用免疫组化法。结果：ＭＲＰ 总检出率６３ ．６ ％ （７０／１１０） ，ＳＣＬＣ、ＮＳＣＬＣ 分别为４６ ．７ ％ （７／８） 和６５ ．３ ％ （６２／９５） 。尽管鳞癌ＭＲＰ 的表达（７２ ．４ ％ ） 略高于腺癌（５８ ．３ ％ ） ， 但ＭＲＰ 的表达与病理类型、ＴＮＭ 分期及鳞癌、腺癌的分化程度无关。９０ 例接受化疗，７３ 例ＮＳＣＬＣ 中ＭＲＰ（ － ） 者及ＭＲＰ（ ＋ ～＋ ＋ ） 者中位生存期分别为１８ ．９ 个月和１２ ．６ 个月，Ｌｏｇ － Ｒａｎｋ ｔｅｓｔ 及Ｋａｐｌａｎ － Ｍｅｉｅｒ 生存曲线均示ＭＲＰ（ － ） 者较ＭＲＰ（ ＋ ～＋ ＋ ） 者有生存期优势（ Ｐ＜ ０ ．０２） ；３４ 例鳞癌中，ＭＲＰ（ － ）者生存率明显高于ＭＲＰ（ ＋ ～＋ ＋ ） 者。但ＭＲＰ 表达与腺癌预后无关。结论：ＭＲＰ 可能为鳞癌的负性预后因子。

5-氟脲嘧啶对耐顺铂人肺腺癌细胞A_(549)^(DDP)的程序依赖性逆转作用

用耐顺铂（ＣＤＤＰ）人肺腺癌细胞系Ａ５４９ＤＤＰ作模型，研究了５－ＦＵ对ＣＤＤＰ耐药的程序依赖性逆转作用。５－氟脲嘧啶（５－ＦＵ）预处理Ａ５４９ＤＤＰ２４ｈ后立即给予ＣＤＤＰ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加３．９倍；５－ＦＵ预处理Ａ５４９ＤＤＰ后间隔２４或４８ｈ再给予ＣＤＤＰ，其细胞毒性分别增加２０倍和２５０倍，甚至较亲代细胞Ａ５４９更为敏感；如先给ＣＤＤＰ后给５－ＦＵ则细胞毒性仅增加１．８倍。５－ＦＵ对亲代细胞亦有类似效应但细胞毒性增加程度明显低于耐药细胞。５－ＦＵ预处理后间隔２４，４８ｈ，细胞内ＧＳＨ含量逐渐降低，与细胞毒性逐渐增加相一致。如用ＢＳＯ耗竭Ａ５４９ＤＤＰ细胞内ＧＳＨ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加６．４倍，仅能部分逆转ＣＤＤＰ耐药。５－ＦＵ明显抑制ＭＲＰ的表达，但对ＧＳＴπ的表达无影响。在５－ＦＵ预处理后的无药间隔时间内，给予无毒浓度的三苯氧胺则有明显的协同效应。

中性红清除法测定大鼠胃粘膜血流量实验观察

介绍了一种简便的胃粘膜血流量(GMBF)测定方法——中性红清除法(NRC),并用此法测定了正常大鼠、肝硬化大鼠和侧脑室注射五肽胃泌素大鼠的GMBF。结果表明:NRC是一种操作简便、结果可靠、对GMBF变化较敏感的GMBF测定方法,可用于对胃粘膜生理、病理方面的研究.

应激性溃疡的发病机制

本文从胃粘膜血流量、胃壁微循环、胃腔内酸度、心理因素、中枢内变化等几方面综述了近几年有关应激性溃疡发病机制的研究进展情况。提出应激时胃粘膜血流量降低、胃壁微循环障碍是应激性溃疡的主要原因;胃粘膜屏障功能降低、H^+逆流、胆汁返流和中枢内变化加速、加重溃疡的发生和发展,心理因素也通过以上途径引起溃疡。

电刺激室旁核对大鼠应激性胃粘膜损伤的影响

电刺激室旁核(PVN)有加重大鼠应激性胃粘膜损伤的作用;PVN内微量注射神经元胞体兴奋剂L-谷氨酸钠和电刺激PVN的效应相同;电解损毁双侧PVN或对其电刺激后,使应激性胃粘膜损伤明显减轻,切断膈下迷走神经或皮下注射阿托品后,可显著减轻电刺激PVN加重大鼠应激性胃粘膜损伤的效应;电刺激PVN使胃粘膜血流量减少,但对胃液量、胃酸排出量、胃蛋白酶活性及胃壁结合粘液量均无显著影响。从而表明,PVN是影响应激性胃粘膜损伤的特异性中枢部位之一,当其兴奋时,可加重应激性胃粘膜损伤,并可能是通过迷走神经胆碱能纤维起作用的,且与胃粘膜血流量的减少有关;电刺激PVN加重胃粘膜损伤似不是由胃液量、胃酸、胃蛋白酶活性及胃壁结合粘液量等因素的改变引起的。

115例肺癌及肺转移癌^(99m)Tc-甲氧基乙丁基异睛功能检测MDR1 P-gp的临床分析

目的：研究９ ９ｍ Ｔｃ －ｓｅｓｔａｍｉｂｉ（ 甲氧基乙丁基异睛） ＭＤＲ１ Ｐ－ｇｐ 的检出率与疗效、预后的关系，及与免疫组化结果的相关性。方法：疗前、疗后检测９９ ｍ Ｔｃ－ｓｅｓｔａｍｉｂｉ 的滞留值判断肿瘤细胞Ｐ－ ｇｐ 泵出功能。结果：全组检出率５０％ （５７／１１５） ，肺癌５１％ （５５／１０８） ，肺转移癌２９％ （２／７）。ＮＳＣＬＣ与ＳＣＬＣ检出率无差别，但在９９ ｍ Ｔｃ－ｓｅｓｔａｍｉｂｉ 检出Ｐ－ ｇｐ（＋ ）中ＮＳＣＬＣ７８％ （４３／５５） ，明显高于ＳＣＬＣ２２％ （１２／５５） 。５９ 例疗前，疗后总符合率９０ ％（５３／５９）：阳性符合率４６ ％ ；阴性符合率４４％ 。疗前Ｐ－ ｇｐ（－ ） 、疗后Ｐ－ｇｐ（ ＋）１０％ 。Ｐ－ ｇｐ 特异性单抗Ｃ２１９ 免疫组化检测２５ 例肺癌标本，与９９ ｍ Ｔｃ－ ＭｉＢｉ 总符合率７２ ％（１８／２５），互补２８％ （７／２５） 。９９ｍ Ｔｃ － ＭｉＢｉ 示Ｐ－ ｇｐ（ －） 者ＣＲ＋ ＰＲ均明显优于Ｐ－ｇｐ（ ＋ ）者（ Ｐ＜ ０．０１） 。４１／５７ 例Ｐ－ ｇｐ（＋ ）者化疗期并用耐药调变剂，ＲＲ２４％ 。肺癌２８％（１＋ １０／３９） ：ＮＳＣＬＣ２１％（０＋ ６／２９） ；ＳＣＬＣ?

侧脑室注射NE和ACh和电刺激室旁核对大鼠应激性胃粘膜损伤的影响

近年发现脑疾患特别是下丘脑损伤与应激性溃疡有关。关于应激性胃粘膜损伤发生的机制,目前尚未阐明。现已知道,室旁核(PVN)神经元能接受多种神经递质的影响,它们在应激性反应和痛调制中起着重要作用,最近有报道NE和ACh对室旁核神经元具有兴奋和抑制作用。因此,探讨下丘脑室旁核对应激性胃粘膜损伤的影响以及脑内重要递质NE和ACh在这一过程中的作用.是具有一定意义的。本工作采用电刺激PVN及侧脑室内注射NE和ACh的方法,阐明PVN和NE、ACh之间在应激性胃粘膜损伤发病中的作用和关系。

侧脑室注射去甲肾上腺素对大鼠应激性胃溃疡的影响

用束缚+浸水应激模型,观察了侧脑室内注射去甲肾上腺素(NE)对大鼠应激性胃溃疡的影响,并对其作用机制进行了初步的探讨。结果为:侧脑室内注射NE后,能明显减轻大鼠应激性胃溃疡,并似有剂量一效应依赖关系;脑室内和皮下注射酚妥拉明及心得安后,能阻断NE的效应;室旁核内分别注射NE及心得安,能各自减轻和加强应激性胃溃疡的发生。这些结果表明,脑内NE可能通过室旁核的作用,参与了对应激性胃溃疡的调节。

胰蛋白酶对半胱胺诱发大鼠十二指肠溃疡的保护作用

观察了胰蛋白酶作为“弱刺激”对盐酸-半胱胺诱发的大鼠十二指肠溃疡的适应性细胞保护作用。主要结果如下:①胰蛋白酶能明显减轻由盐酸-半胱胺所致的大鼠十二指肠溃疡,且有量效依赖关系;②切除大鼠腹腔交感神经节或肌注肾上腺素能受体阻断剂对胰蛋白酶对抗十二指肠溃疡效应没有影响;③切断大鼠膈下迷走神经或皮下注射阿托品后,能完全阻断胰蛋白酶对抗十二指肠溃疡的效应。胰蛋白酶作为一种弱刺激,对十二指肠粘膜具有适应性细胞保护作用,这种作用可能是通过迷走神经胆碱能纤维实现的。

脂质体和牛磺酸对阿霉素心肌毒性的影响

在大鼠阿霉素急性心肌损伤的模型上，观察了脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸对阿霉素所致心肌损伤作用的影响。结果表明：阿霉素可引起血浆ＬＤＨ、ＣＰＫ、ＭＤＡ及心肌组织ＭＤＡ和Ｃａ２＋水平明显升高，心肌组织细胞出现广泛的变性和水肿。用牛磺酸或脂质体包裹阿霉素均可降低阿霉素对心肌毒性的作用，血浆ＬＤＨ、ＣＰＫ、ＭＤＡ及心肌ＭＤＡ和Ｃａ２＋水平比损伤组织降低５％～４６．９％（Ｐ＜０．０５）。脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸，上述生化指标进一步降低，与正常组无明显差异，病理检查结果与上述生化指标变化一致。结果提示：脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸具有显著减轻阿霉素心肌毒性作用。

RESISTANT MECHANISMS OF CISPLATIN IN HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A_(549)DDP

To study the resistant mechanisms of cisplatin in human lung adenocarcinoma cell line A 549 DDP. A 549 DDP cells was established by stepwise increasing concentration of cisplatin (CDDP) in medium. Interstrand cross linked DNA (ICL) was measured by ethidium bromide fluorescence assay. The intracellular and intranuclear accumulation of cisplatin was measured by atomic absorption spectrometry. The removal of GS X was determined by FCM and fluorescence microscopy. Results: The A 549 DDP cell line was 8.9 fold resistance relative to the parental A 549 cell line. The formation of ICL in A 549 was 6.28 times higher than that in A 549 DDP cells. The intracellular and intranuclear accumulation of cisplatin in A 549 cells was 5.9 times and 4.1 times higher than that in A 549 DDP cells, respectively. The ability of GS X pump pumped GS X complex (GS Pt) in A 549 DDP cells was higher than that in A 549 . The repair rate in A 549 DDP cells was 2 times higher than that in A 549 . Conclusions: Decreased accumulation and increased export of cisplatin might be the main mechanism of cisplatin resistant A 549 DDP cells while the enhanced repair capacity of DNA may play a role in CDDP resistance.

大剂量三苯氧胺提高非小细胞肺癌疗效的研究

目的：研究大剂量三苯氧胺 (Tamoxifen,TAM)提高非小细胞肺癌化疗效果。方法：将 108例患者按信封法随机分入 A、 B、 C、 D组，每组 27例患者， A、 B、 C三组为研究组， D组为对照组。研究组化疗前 3天至化疗最后 1天口服 TAM，共 11天。 TAM剂量 A组为 40 mg，每日 3次； B组为 60 mg，每日 3次； C组 80 mg，每日 3次； D组单纯化疗。每组化疗用药相同，均为长春碱酰胺 2.5 mg/m2 d1、 d8，阿霉素 30 mg/m2 d2，顺铂 80 mg/m2分 d4、 d5 2天。每组完成 3周期化疗后休息 30天，复查并评价疗效。结果： A、 B、 C、 D各组有效率分别为： 33.3％ (9/27)、 48.1％ (13/27)、 55.6％ (15/27)、 25.9％ (7/27)， C组有效率最高， D组有效率最低。将 A、 B、 C三组分别与 D组比较，经统计学处理， A∶ D P >0.05； B∶ D P >0.05； C∶ D P< 0.05，有临床意义。各组化疗副作用无区别，仅 C组中有 4例患者用药 5～ 6天后出现精神症状，停服 TAM 1～ 3天后自动恢复正常。结论：大剂量 TAM有拮抗癌细胞对化疗耐药的作用，其剂量与疗效成正相关。

MOLECULAR BIOLOGICAL EVIDENCES FOR THE GENETIC STABILITY OF DOXORUBICIN RESISTANT CELL LINE S-180R IN VIVO

Objective: In order to assess the genetic stability of doxorubicin resistance sarcoma S 180R cell line in vivo . Methods: The drug resistant genes and molecules were examined by flow cytometry, Southern blot, Northern blot and RT PCR. Results: The results showed that drug efflux in S 180R increased nearly 100 folds, as compared with its parent cells, the rate of half peak width resistant cell/peak high decreased from 0.56 to 0.23 measured by flow cytometry after two years. The mdr1 gene amplified and overexpressed significantly in S 180R and the expression of topoisomerase II α gene decreased remarkably in S 180R. There was no significant different of the MRP expression between S 180R and S 180. Conclusion: These results indicated that drug resistance of S 180R was maintained and also increased. The major mechanism of drug resistance is the amplification and overexpression of mdr1 gene, the decreased expression of topoisomerase II α also contributed to it. So, S 180R is an ideal experimental model for the study of doxorubicin resistance and its reversion in vivo .

多药耐药相关蛋白基因在非小细胞肺癌表达的临床意义

目的探索多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的表达，以及与病理类型、病期及预后的关系。方法以原位杂交法检测冰冻ＮＳＣＬＣ组织。结果全组５８例ＮＳＣＬＣ、ＭＲＰｍＲＮＡ总表达率为７４．１％，鳞癌为７２．０％，腺癌为７３．３％。ＭＲＰ的表达与病理类型、ＴＮＭ分期及分化程度无关。４７例接受化疗的ＮＳＣＬＣ中，３５例ＭＲＰ表达（＋～＋＋）者生存率明显低于ＭＲＰ表达（－）者（Ｐ＜０．０５），中位生存期分别为８．７个月和２１个月（Ｐ＜０．０５）；１２例ＭＲＰ表达（＋～＋＋）鳞癌生存率亦明显低于７例ＭＲＰ表达（－）者（Ｐ＜０．０５），中位生存期分别为６个月和１９．５个月（Ｐ＜０．０５）。

肺癌组织端粒酶表达与耐药、凋亡相关基因关系及其临床意义

目的 探讨肺癌冰冻组织端粒酶催化亚单位（ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｕｂｕｎｉｔ，ｈＴＲＴｈＥＳＴ２） 编码基因ｍＲＮＡ表达与细胞凋亡、增殖、耐药及凋亡相关基因的关系及其预后意义。方法 应用ＴＲＡＰＰＣＲ、原位杂交检测端粒酶活性（ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ＴＡ）及ｈＴＲＴｈＥＳＴ２ 表达，ＲＴＰＣＲ、免疫组化检测耐药及凋亡相关基因ｍＲＮＡ 及蛋白水平，原位末端标记（ｉｎ ｓｉｔｕ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ，ＩＳＥＬ） 检测凋亡细胞。结果 非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｈＴＲＴｈＥＳＴ２ ｍＲＮＡ 阳性率７３－２ ％ （ 腺癌７１－４ ％ ，鳞癌７６－０％ ） ，小细胞肺癌（ＳＣＬＣ） 阳性率８５－０％ 。ＮＳＣＬＣｈＴＲＴｈＥＳＴ２ ｍＲＮＡ阳性率与ＴＡ一致。ＮＳＣＬＣｈＴＲＴｈＥＳＴ２ 与ｂｃｌ２（ｒ＝０－７３２７，Ｐ＝０－０１５）、ｃｍｙｃ（ｒ＝０．８２６３，Ｐ＝ ０．００１） 表达具高度相关性；与ＭＲＰ（ｒ＝ ０．３９７１ ，Ｐ＝ ０－００３）、Ｎｅｕ（ｒ＝０．３２０８，Ｐ＝ ０－０１７） 呈弱相关；与ＭＤＲ１ 无关（ｒ＝ ０ ．２４１５，Ｐ＝ ０－６７２） 。ＳＣＬＣｈＴＲＴｈＥＳＴ２

Schedule-dependent reversion of cisplatin resistance by 5-fluorouracil in acisplatin-resistant human lung adenocarcinoma cell line A549^(DDP)

Objective To study the schedule dependent reversion of cis diamminedichloroplatinum (CDDP) resistance by 5 fluorouracil (5 Fu) in a CDDP resistant human lung adenocarcinoma cell line A 549 DDP . Methods Dimethylthiazol dipheryltetrazolium bromide (MTT) assay and immunocytochemistry were used. Results After the A 549 DDP was treated with CDDP, followed immediately by exposure to 5 Fu, cytotoxicity of CDDP increased 1.8 fold. After pretreatment of A 549 DDP with 5 Fu, followed immediately by exposure to CDDP, the cytotoxicity of CDDP increased 3.9 fold. After pretreatment of A 549 DDP with 5 Fu, after a 24 or 48 hour drug free interval, followed by exposure to CDDP, the cytotoxicity of CDDP increased 20 and 250 fold, respectively, and the A 549 DDP was rendered more sensitive than its parental cell line A 549 . In parallel with the increased cytotoxicity, the cellular GSH content was significantly reduced at 24 or 48 hour after 5 Fu pretreatment. However, depletion of GSH by buthionine sulfoximine (BSO) only resulted in partial reversion of CDDP resistance. 5 Fu could also inhibit the expression of MRP, but had no effect on the expression of GSTπ. The effect of 5 Fu on the parental cell line A 549 was much smaller than that in A 549 DDP . Conclusion Scheduled administration of 5 Fu can reverse CDDP resistance completely through reduction of GSH and inhibition of MRP expression.