UPLC-MS/MS法检测人血浆中地塞米松浓度及其临床应用

采用超高效液相-串联质谱联用建立人血浆中地塞米松含量的检测方法.色谱柱为BEH C18,流动相为0.01%甲酸乙腈溶液-0.01%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,电喷雾正离子模式,多反应监测.调谐后,地塞米松定量分析检测的离子对为m/z 393.03→237.02.地塞米松在1.28~312.12 ng/mL(r^(2)=0.9988)质量浓度范围内与色谱峰面积线性关系良好;检测限和定量下限分别为0.50 ng/mL和1.00 ng/mL;日内精密度和日间精密度RSD均小于10.01%,准确度为100.65%~107.82%;提取回收率为80.90%~84.32%;基质效应为102.4%~120.0%;在多种试验条件下,血浆样品稳定性良好,相对误差均在±10%之内.由患有干燥综合征的妊娠母亲抗SSA/Ro或抗SSB/La抗体阳性所引起的免疫性胎儿房室传导阻滞目前临床上采用皮质类固醇治疗,但缺乏与药物疗效及安全性等内容有关的具体数据.本方法首次成功用于患有干燥综合征的妊娠母亲口服地塞米松治疗免疫性胎儿完全性房室传导阻滞病例,在新生儿体内定性和定量检测到DXM原形药物,分娩后同时定量检测母亲及新生儿血浆样品中地塞米松质量浓度分别为25.7 ng/mL和5.6 ng/mL,比例约为5∶1.本方法灵敏度高、准确性好、方便快捷,可同时测定母亲和新生儿血浆中地塞米松的浓度,为临床治疗提供精准的数据支撑,同时为进行系统全面的数据分析打下基础,确保患者用药安全有效.

血细胞微粒制备方法的建立及评价

目的建立血细胞微粒制备方法及流式细胞术检测方法。方法利用冻融、研磨及超速离心方法制备不同来源的血细胞微粒。透射电镜下观察微粒的形态。采用流式细胞术检测血细胞微粒表面标志物及微粒浓度。利用对荧光标准品浓度测量结果所得的日内差和日间差评价流式细胞术检测方法的精密度。选用同日内制备的5批血细胞微粒,及不同实验人员于不同时间用本方法制备的血细胞微粒,根据微粒中磷脂酰丝氨酸和来源细胞表面标志物的表达情况,评价血细胞微粒制备方法的重复性与重现性。结果制备的血细胞微粒均为直径0.1~1.0μm的不规则圆形结构,符合微粒典型的形态学结构。流式细胞术检测结果显示,血细胞微粒中来源细胞表面标志物表达阳性率均在90%左右,部分表达磷脂酰丝氨酸。流式细胞术测得红细胞微粒、白细胞微粒、血小板微粒浓度分别为(2.2±0.29)×106个/μL、(1.4±0.21)×106个/μL、(1.8±0.31)×106个/μL。流式细胞术对荧光标准品浓度测量的平均日内差为4.7%,平均日间差为4.9%,精密度较好,且符合相应的要求。同日内制备的不同批次血细胞微粒表面标志物阳性表达率差异较小,不同实验室工作人员于不同时间制备的血细胞微粒表面标志物表达阳性率差异也较小,说明本血细胞微粒制备方法的重复性和重现性均较好。结论以冻融、研磨及超速离心的方法成功制备了血细胞微粒,该方法重复性和重现性均较好。

UPLC-MS/MS法快速检测人血浆中5种磺酰脲类降糖药物

目的:建立并验证一种定性定量检测人血浆中5种常见磺酰脲降糖药的方法,并将其应用于临床检测。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,采用液相-串联质谱联用仪测定。色谱柱为BEH C18,以含0.01%甲酸乙腈溶液-含0.01%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL·min-1,电喷雾正离子模式,多反应监测。结果:格列齐特、格列吡嗪、格列美脲、格列本脲、格列喹酮质量浓度分别在0.037~9(r=0.998 3)、0.037~9(r=0.999 2),0.037~9(r=0.992 8),0.037~9(r=0.996 8),0.037~9(r=0.998 8)μg·mL-1内线性关系良好;定量下限分别为0.004 6,0.009 2,0.004 6,0.004 6,0.009 2μg·mL-1;日内和日间精密度均小于<13.88%,相对回收率均在77.57%~100.83%之间;提取回收率均在69.69%~91.54%之间;基质效应均在84.32%~102.86%之间;在多种储存条件下,处理前后的血浆样品稳定性好。本方法应用于1例2岁小儿格列本脲中毒检测,结果表明当血浆中格列本脲浓度为6.2,0.21,0.09μg·mL-1时,均呈现降低血糖作用。结论:该方法检测速度快、专属性高、重复性好,可用于磺酰脲类药物中毒检测。经临床实践证明,本方法提供的检测数据可作为磺酰脲中毒的重要临床指标,对处于不同治疗阶段的中毒患者,均具有重要的临床指导意义。

UPLC-MS/MS快速检测人血浆中7种苯二氮■类药物及其临床应用

目的:建立并验证一种定性定量检测人血浆中7种常见苯二氮[艹卓]类药物的方法,并将其应用于临床检测。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,采用液相-串联质谱联用仪测定。色谱柱为BEH C18,以含0.01%甲酸乙腈溶液-0.01%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,电喷雾正离子模式,多反应监测。结果:劳拉西泮、硝西泮、阿普唑仑、咪达唑仑、三唑仑、氯硝西泮、地西泮浓度分别在62.5~2 000(r=0.999 8)、62.5~2 000(r=0.999 7)、31.25~1 000(r=0.999 9)、62.5~2 000(r=0.999 7)、6.25~200(r=1)、62.5~2 000(r=0.999 7)、625~20 000(r=0.996 8)ng·mL^-1范围内线性关系良好;定量下限分别为7.8,3.9,1.9,3.9,3.1,3.9,19.5 ng·mL^-1;日内和日间精密度RSD均小于14.75%,方法回收率均在87.84%~116.06%之间;提取回收率均在74.55%~96.72%之间;基质效应均在81.68%~97.20%之间;在多种储存条件下,处理前后的血浆样品稳定性好。结论:本方法检测速度快、专属性高、重复性好、定性能力强,可有效检测治疗及中毒浓度范围内的7种苯二氮[艹卓]类药物。