氧化苦参碱调控CTLA-4和PD-1缓解小鼠类风湿关节炎的作用

目的 观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)通过免疫负调控机制对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)的缓解作用。方法 将DBA/1J小鼠随机分为正常组、模型组、OMT组和地塞米松组,每组9只。采用胶原和佐剂等体积混合背部皮下多点注射诱导DBA/1J小鼠,构建CIA小鼠模型。OMT组和地塞米松组分别用氧化苦参碱和地塞米松进行腹腔注射,正常组注射同等剂量的生理盐水。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测脾淋巴细胞叉头样转录因子P3(forkhead box protein3,Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein-4,CTLA-4)和程序性死亡受体-1(programmed cell death protein-1,PD-1)的mRNA表达水平。采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察关节滑膜组织的异位生发中心。采用免疫组织化学法和Western blot检测Foxp3及CTLA-4和PD-1的表达。结果 OMT可缓解CIA小鼠关节肿胀度并降低其关节评分,增加脾淋巴细胞和关节组织Foxp3及CTLA-4的表达,降低PD-1的表达(P均<0.05),并减少炎性细胞大面积浸润。结论 OMT可能经增加调节性(Foxp3+)T细胞CTLA-4的表达但降低PD-1的表达而缓解RA。

氧化苦参碱经Bcl-6/CXCR5信号调控CIA小鼠Tfh-B细胞的实验研究

目的:初步探讨氧化苦参碱(OMT)通过Bcl-6/CXCR5信号通路调控胶原诱导关节炎(CIA)小鼠Tfh-B细胞的免疫学机制。方法:28只雄性DBA/1J小鼠随机分为正常对照组、CIA模型组、地塞米松(DXMS)组、OMT组,每组各7只。构建CIA模型并按分组方案给予药物腹腔注射,正常对照组注射等量生理盐水,1次/d,直至第45天结束模型。测量关节肿胀度和关节炎评分,采用ELISA方法测定小鼠血清CII-Ab、IL-21、IL-10及TGF-β水平;HE染色观察小鼠关节病理变化,IHC方法检测其关节滑膜组织Bcl-6及CXCR5的表达;测定脾指数;流式细胞术检测脾Tfh、B细胞的比例;RT-qPCR测定脾单个核细胞Bcl-6、Blimp-1 mRNA的转录水平。结果:OMT可明显缓解减轻CIA小鼠关节炎症,改善关节滑膜增生及软骨破坏,减少炎症细胞浸润;上调关节滑膜组织Bcl-6、CXCR5的表达。下调CIA小鼠血清CII-Ab、IL-21的表达水平而上调IL-10、TGF-β水平;降低脾指数,减少脾Tfh及B细胞的比例,下调脾单个核细胞Bcl-6 mRNA的表达而上调Blimp-1 mRNA的表达。结论:OMT可能经Bcl-6/CXCR5信号通路调控Tfh-B细胞反应从而减缓类风湿性关节炎(RA)的发生与进展。

类风湿关节炎滤泡调节性T细胞与血清免疫球蛋白及疾病活动度相关性研究

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者滤泡调节性T(Tfr)细胞与血清免疫球蛋白(Ig)M,IgG,IgA水平以及疾病活动度的相关性。方法:选择30例RA患者(RA组)和30例健康对照者(健康对照组),根据28关节疾病活动性评分(DAS28),将RA患者分为高度活动组和轻中度活动组。采用流式细胞术检测RA患者及健康者外周血中CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+)ICOS^(+)Tfr细胞的百分比。分析RA组与健康对照组、RA组中高度活动组与轻中度活动组的Tfr细胞比例以及RA患者Tfr细胞比例与血清IgM,IgG,IgA水平的相关性。结果:RA组患者外周血Tfr细胞比例低于健康对照组;RA组中高度活动组Tfr细胞比例低于轻中度活动组;RA患者Tfr细胞比例与血清IgM,IgG,IgA水平均呈负相关。结论:RA组患者外周血Tfr细胞减少可能与血清免疫球蛋白水平升高及疾病的活动度有关。

外周血IL-6可能通过促进滤泡辅助性T细胞的分化参与1型糖尿病的发生

目的观察白细胞介素(IL)-6是否作用于滤泡辅助性T(Tfh)细胞参与1型糖尿病(T1DM)的发病。方法选择2019年10月至2020年10月在宁夏医科大学总医院内分泌科住院的30例T1DM患者为研究组,同时募集20例健康者作为健康对照组。采集外周血,使用流式细胞术分析外周血CD4^(+)CXCR5^(+)ICOS^(+)PD1^(+)T细胞占CD4^(+)T细胞百分比;采用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-6、IL-21的表达水平,并分析T1DM患者外周血CD4^(+)CXCR5^(+)ICOS^(+)PD1^(+)T细胞占CD4^(+)T细胞百分比与血清IL-6、IL-21水平的相关性。结果研究组、健康对照组中CD4^(+)CXCR5^(+)ICOS^(+)PD1^(+)T细胞占CD4^(+)T细胞百分比分别为(23.8±0.68)%、(14.1±0.46)%;研究组、健康对照组中IL-6水平分别为(34.45±8.31)、(23.46±5.52)ng/L;研究组、健康对照组IL-21水平分别为(202.0±46.51)、(102.9±32.78)ng/L。研究组CD4^(+)CXCR5^(+)ICOS^(+)PD1^(+)T细胞占CD4^(+)T细胞百分比、IL-6、IL-21水平均明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。T1DM患者CD4^(+)CXCR5^(+)ICOS^(+)PD1^(+)T细胞占CD4^(+)T细胞百分比与外周血血清IL-6、IL-21水平均呈正相关(r=0.4492、0.5729,P<0.05)。结论IL-6可能通过促进Tfh细胞的分化进而辅助B细胞产生自身抗体,其在T1DM的发生中起重要作用。

氧化苦参碱治疗小鼠胶原诱导性关节炎的作用机制

苦参为豆科槐属植物苦参Sophorae flavescenstis的干燥根,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性,在医药领域有广泛应用。该实验以苦参中的有效成分氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)为研究对象,探究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)经“TLR9-MyD88-STAT3”通路对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠B细胞的功能影响从而发挥抗类风湿关节炎的作用。构建牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂诱导的DBA/1J胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,首次免疫后第15天腹腔注射OMT,持续30 d,每隔3 d监测CIA小鼠的关节肿胀度及关节评分;HE染色法观察关节组织病理学情况;采用免疫磁珠分离法(MACS)分选出CIA小鼠脾脏B淋巴细胞;运用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)法检测小鼠血清IL-21的表达水平;Western blot检测B淋巴细胞上Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)、信号转导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活因子3(phosphorylated signal transducers and activators of transcription3,p-STAT3)和白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测B淋巴细胞上TLR9、STAT3、IL-21 mRNA的表达水平。结果表明OMT缓解CIA小鼠足爪肿胀度、降低关节炎指数、减轻滑膜炎性细胞浸润及增生程度,降低炎症因子水平,同时抑制B淋巴细胞中TLR9、STAT3、p-STAT3、IL-21的表达。因此,OMT可能通过调节B淋巴细胞上TLR9-STAT3通路从而缓解类风湿关节炎,为临床应用氧化苦参碱治疗类风湿关节炎提供有价值的依据。