东北梅花鹿发情期血浆中LH、雌二醇含量变化

本文用放射免疫测定法测定了5头发情期东北梅花鹿血浆中促黄体素(LH)和17β-雌二醇的含量。所得结果:LH在发情前(0.288～0.321ng/ml血浆)与发情后(0.364～0.841ng/ml血浆)都处于低稳水平(P>0.05),但发情时出现非常显著的高峰(2.742ng/ml)(P<0.01);雌二醇在整个发情前后没有出现显著的高峰(P>0.05),仅在发情前约24小时发现一小峰(16.4±4.4pg/ml血浆),发情后12小时发现一小峰(24.9±6.1pg/ml血浆)。结果表明,东北梅花鹿发情期血浆LH、雌二醇含量的时相变化与其他已研究过的鹿种及一些反刍家畜基本一致。

我国A群脑膜炎奈瑟氏菌的克隆群体结构与流行病学意义

应用多位点酶电泳技术对从我国17个省市搜集的200株A群脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)进行了克隆群体结构分(?)。结果表明,可将200株A群Nm分为23个电泳型(ET),7个克隆群,其中Ⅳ克隆群和Ⅴ克隆群为优势克隆群,两者的遗传距离为0.53。自60年代以来,每次流脑流行周期均以一种克隆群为主,如60年代和80年代主要由Ⅳ克隆群引起流行,分别占同时期菌株数的85.7％和82.4％;70年代的流行主要由Ⅴ克隆群引起,占该期间菌株数的88.4％。优势克隆群优势十分明显,流行时间长,地区分布广,而且不同周期A群Nm优势克隆群的变迁与其优势亚型的变化基本吻合。我国A群Nm的优势克隆群及优势亚型在流脑不同流行周期内皆显示了周期性变换的特征。

我国不同流行周期脑膜炎奈瑟氏菌的亚型与流行病学意义

以11种抗脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)1类外膜蛋白的单克隆抗体和全细胞酶联免疫吸附试验,对我国17省市于60年代至80年代,从流脑病人与带菌者中所搜集的193株A群Nm进行了亚型检定,并分析了其亚型与流脑周期流行的关系。分型结果表明,上述菌株至少可分成10个亚型,分型率为80.8％,其中P1.9亚型最多占39.9％,是我国60年代与80年代流脑流行时A群Nm的优势亚型,分别占两次流行时可分亚型菌株的100％和85.9％。其次为P1.7,10复合亚型,占29.5％,为70年代流行时的优势亚型,占可分亚型株数的74.3％。流行年A群Nm的优势亚型很突出,非流行年亚型分布则不集中,无明显的优势亚型。从病人及其密切接触者中可检出同一亚型。因此,A群Nm亚型的检定可以清楚地揭示流脑在我国周期流行的特征与其传播规律。

我国流脑流行特征监测研究

流脑在发展国家中对儿童身体健康的威胁仍很严重。为了监测此病流行特征的变化,以便有针对性地进行预防,我们向卫生部提出了上述科研招标的课题。中标后我们不仅组织协作在全国范围进行宏观监测,更重要的是采用了几种先进的技术方法并结合几十年的流行病学资料进行综合分析,揭示了我国流脑流行的分子生物学规律。

金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因的克隆、表达及其生物活性分析

目的体外表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)凝固酶Coa,评价其生物学活性。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因序列设计特异性引物,采用PCR方法从S.aureus USA300 CA-MRSA 923株基因组中扩增coa基因片段,将其克隆至pET-24b(+)表达载体,构建重组表达质粒pET-24b-coa;将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化感受态细胞E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组Coa(rCoa)进行鉴定,测定rCoa对人血液和兔血浆的凝固活性;最后用纯化的重组蛋白rCoa免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和Western blot分析其免疫原性。结果构建的重组质粒pET-24b-coa在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达rCoa,分子量约74.8 ku,与预期蛋白大小相符;rCoa在体外具有凝固人全血和兔血浆活性,能刺激小鼠产生高效价的抗Coa特异性抗体。结论成功地获得了具有良好凝固酶活性和抗原性的金黄色葡萄球菌凝固酶重组蛋白rCoa,为进一步深入研究S.aureus凝固酶Coa的功能及以Coa为靶点的抗金黄色葡萄球菌抑制剂和疫苗的研制奠定基础。

金黄色葡萄球菌coa和saeRS基因对小鼠部分生物学指标的影响

试验旨在探索金黄色葡萄球菌saeRS和coa对小鼠体重、感染部位皮内细菌数、感染部位伤疤面积及机体产生IL-17a的影响。利用金黄色葡萄球菌923及其突变菌株923/coa、923/saeRS和923/coa/saeRS皮内感染小鼠背部皮肤,测定感染后不同时间点各试验组小鼠体重、感染部位皮内细菌数、血清IL-17a浓度及感染部位的伤疤面积,计算小鼠血清IL-17a浓度与伤口面积之间的相关系数。结果表明:(1)923/coa/saeRS菌株感染组体重显著(P<0.05)/极显著(P<0.01)高于923/saeRS和923/coa感染组,923/saeRS感染组体重极显著(P<0.01)高于923/coa菌株感染组;(2)每克感染部位皮肤内细菌数,923菌株感染组显著(P<0.05)/极显著(P<0.01)高于923/coa、923/saeRS和923/coa/saeRS菌株感染组;(3)感染细菌后,小鼠血清IL-17a浓度逐渐升高,在24 h达到浓度峰值,随后逐渐下降;感染后8 h,菌株923组血清IL-17a浓度显著(P<0.05)低于923/saeRS组;(4)923/saeRS和923/coa/saeRS感染组小鼠皮肤伤疤面积显著(P<0.05)/极显著(P<0.01)低于923和923/coa感染组;(5)感染后24 h血清IL-17a浓度与感染后120 h小鼠感染部位伤疤面积的相关系数较强,并且达到极显著水平(P<0.01)。coa和saeRS基因缺失降低菌株923的毒性,使突变菌株感染小鼠体重提高,感染部位细菌含量降低,感染部位皮肤伤疤面积减小,血清IL-17a浓度降低。

乳糖发酵奈氏菌和脑膜炎奈氏菌诱生的流脑杀菌抗体抗原特异性研究

利用杀菌力试验测定不同来源血清对脑膜炎奈氏菌（Ｎｍ）的杀菌抗体水平。结果表明Ａ群流脑病人恢复期血清、带菌者及乳糖发酵奈氏菌（Ｎｌ）带菌者血清、兔抗Ｎｍ及Ｎｌ血清中均具有对Ｎｍ的杀菌抗体。通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析发现上述人血清ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ均与这两种奈氏菌的５２ｋＤ，１、２或３类外膜蛋白发生特异反应。用纯化的１和３类外膜蛋白及脂寡糖免疫小鼠制备免疫血清，测定抗体水平表明，Ｎｌ、Ｎｍ的１和３类外膜蛋白及脂寡糖抗原对小鼠具有一定的免疫作用；其中１类外膜蛋白主要诱生ＩｇＧ，３类外膜蛋白诱生ＩｇＧ和ＩｇＭ，脂寡糖则主要诱生ＩｇＭ。通过杀菌抑制试验证实１类、３类外膜蛋白及脂寡糖均可抑制ＩｇＧ的杀菌作用；抑制效价ＬＯＳ＞１类ＯＭＰ＞３类ＯＭＰ。由此可见，Ｎｌ和Ｎｍ的脂寡糖及１类ＯＭＰ是幼儿咽部携带Ｎｌ或Ｎｍ诱生的流脑杀菌抗体主要特异性抗原。这一研究结果为提高流脑Ａ群多糖菌苗对婴幼儿的预防效果提供了线索。

外源IL-17抗体对金黄色葡萄球菌感染小鼠的影响

为了证明外源白细胞介素-17(IL-17)抗体在抵御金黄色葡萄球菌皮肤感染中的重要性,试验于小鼠背部皮内接种金黄色葡萄球菌923及IL-17抗体(抗体组)或免疫球蛋白G2A(同型对照组)混合物,对接种后小鼠感染部位的伤口面积及接种后11天血液和各器官内细菌数,小鼠体重,肾脏、淋巴结和脾脏重量和器官指数进行了研究。结果表明:抗体组小鼠接种混合物后第3,5天感染部位伤口面积显著大于同型对照组(P<0.05);抗体组单位体积血液中的细菌数极显著高于同型对照组(P<0.01),单位重量心脏和肺脏中的细菌数显著高于同型对照组(P<0.05);抗体组小鼠接种混合物后第3天体增重高于同型对照组,从第5天开始到第11天同型对照组小鼠体增重均高于抗体组,但两组的体增重未达到统计学显著水平(P>0.05);两组小鼠肾脏、脾脏和淋巴结的重量和器官指数无统计学差异(P>0.05)。说明IL-17抗体与金黄色葡萄球菌混合注入小鼠背部皮内后能直接与机体产生的IL-17发生抗原抗体反应,阻碍IL-17发挥抵御金黄色葡萄球菌皮肤感染的作用,进一步证实IL-17在抗金黄色葡萄球菌皮肤感染中的重要性。

外源rIL-17a对金黄色葡萄球菌感染的影响

为了探索外源重组白细胞介素17a(rIL-17a)对金黄色葡萄球菌感染的影响,试验在小鼠背部皮内注射金黄色葡萄球菌923与不同剂量(0.2μg、0.4μg、0.6μg、0.8μg、1.0μg)rIL-17a或牛血清白蛋白(BSA)的混合液,测定接种后不同时间点rIL-17a组和BSA组小鼠感染部位的伤口面积,接种6 d后血液、感染部位皮肤、肝脏、肾脏和脾脏内细菌数以及小鼠体重。结果表明:0.2μg rIL-17a与金黄色葡萄球菌混合皮内注射小鼠可极显著或显著减小感染第1,3天伤口面积(P<0.01或P<0.05),1.0μg rIL-17a可使感染第3天小鼠伤口面积显著增大(P<0.05)。感染6 d后,0.2μg和0.8μg rIL-17a组小鼠单位体积血液中的细菌数极显著低于相应剂量的BSA组(P<0.01),rIL-17a组和BSA组间皮肤内细菌数差异不显著(P>0.05),0.2μg rIL-17a组单位重量肝脏内细菌数极显著低于0.2μg BSA组(P<0.01),1.0μg rIL-17a组单位重量肝脏内细菌数则极显著高于1.0μg BSA组(P<0.01),1.0μg rIL-17a组单位重量肾脏内细菌数显著低于1.0μg BSA组(P<0.05),单位重量脾脏内细菌数在rIL-17a组和BSA组间的差异未达到统计学显著水平(P>0.05)。0.2μg和0.6μg rIL-17a组第5,6天可显著或极显著降低金黄色葡萄球菌对小鼠体重的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。说明适当剂量的rIL-17a有助于皮肤感染处伤口愈合、血液和肝脏内金黄色葡萄球菌的清除、降低金黄色葡萄球菌对体重的影响;高剂量的rIL-17a不仅不利于清除细菌和促进伤口愈合,反而有利于细菌的生存和伤口恶化。