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表达苏云金杆菌δ-内毒素基因的转基因烟草的抗虫性 被引量:39
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作者 田颖川 秦晓峰 +8 位作者 许丙寅 李太元 方荣祥 莽克强 李文谷 符文俊 丽一平 张书芳 谢强江 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期1-10,共10页
苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)HD-1的δ-内毒素基因原始克隆TH12和TH48分别含有5.3kb和6.6kb型两类同源异族基因。经定点突变改造其5′端,酶切对3′端进行缺失后,在大肠杆菌中仍能表达出有杀虫活性的被修饰的毒蛋白。将上述加工... 苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)HD-1的δ-内毒素基因原始克隆TH12和TH48分别含有5.3kb和6.6kb型两类同源异族基因。经定点突变改造其5′端,酶切对3′端进行缺失后,在大肠杆菌中仍能表达出有杀虫活性的被修饰的毒蛋白。将上述加工过的基因插入到双元载体pBin437(pBin19的派生质粒)中,借助辅助Ti质粒pAL4404转入烟草,获得了抗卡那霉素的再生植株。经Southern印迹和狭槽印迹(Slot blot)杂交证明有1—5个拷贝的毒素基因整合至烟草染色体中。Northern印迹法分析结果表明这两类基因都在转基因植株中得到表达。有4株5.3kb类型,3株6.6kb类型的转基因植株对烟青虫有高抗性,与对照相比,这7株转基因烟草植株的杀虫率可达40—50%,并能显著抑制昆虫蜕皮和生长发育,表现明显的抗虫作用。结果表明这两类毒蛋白基因都可在植物中表达并赋于转基因植株以抗虫性。 展开更多
关键词 BT毒蛋白基因 转基因烟草 抗虫性
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水稻黄矮病毒的纯化和病毒蛋白质及RNA组分的分析 被引量:5
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作者 方荣祥 庞震 +5 位作者 许丙寅 莽克强 高东明 李爱民 秦文胜 陈声祥 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期62-68,共7页
从人工接种水稻黄矮病毒(Rice yellow stunt virus,RYSV)的水稻茎杆中提取到部分纯化的RYSV制品。分析了RYSV的蛋白质组分,表明它的结构蛋白含有L(170k)、G(84k)、N(60k)、M1(31k)、M2(29.5k)和一个分子量为42k的蛋白,并测定了G蛋白氨... 从人工接种水稻黄矮病毒(Rice yellow stunt virus,RYSV)的水稻茎杆中提取到部分纯化的RYSV制品。分析了RYSV的蛋白质组分,表明它的结构蛋白含有L(170k)、G(84k)、N(60k)、M1(31k)、M2(29.5k)和一个分子量为42k的蛋白,并测定了G蛋白氨基末端的部分氨基酸序列。经测定,RYSV RNA的分子量约为12kb。 展开更多
关键词 水稻黄矮病毒 病毒RNA 病毒蛋白质
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双抗转基因烟草纯合系的选育及田间试验 被引量:21
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作者 方荣祥 田颖川 +9 位作者 王桂玲 许丙寅 李太元 莽克强 张振臣 吴青 周汝鸿 王凤龙 史万华 韩晓东 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1993年第5期481-488,共8页
为了将双抗转基因烟草推向实用,进行了双抗转基因烟草纯合系的选育。在试验田中利用人工攻毒进行了T1代植物的抗病毒特性的分离试验;在抗性良好的T1植株的后代T2代植物上进行了田间的病毒接种试验和转基因表达的分析,从中选育出双抗转... 为了将双抗转基因烟草推向实用,进行了双抗转基因烟草纯合系的选育。在试验田中利用人工攻毒进行了T1代植物的抗病毒特性的分离试验;在抗性良好的T1植株的后代T2代植物上进行了田间的病毒接种试验和转基因表达的分析,从中选育出双抗转基因烟草纯合系。又于试验田中,在这些纯合系后代T3代上验证了抗病毒特性的遗传稳定性。在转基因表达分析中,发现CMV外壳蛋白基因的表达在翻译水平上受到抑制。 展开更多
关键词 烟草 花叶病毒 转基因烟草 纯合系
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表达烟草花叶病毒外壳蛋白的转基因烟草及其对TMV的抗性 被引量:18
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作者 田颖川 秦晓峰 +4 位作者 王桂玲 杨毛周 方荣祥 许丙寅 莽克强 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 1990年第8期822-831,共10页
利用体外重组DNA技术构建携带烟草花叶病毒(TMV,国内流行的普通株)外壳蛋白基因(CP)的中间表达载体,通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒,重组TMV-CP基因被转移至烟草细胞,并获得大量再生的转基因烟草。工程烟草的基因组经... 利用体外重组DNA技术构建携带烟草花叶病毒(TMV,国内流行的普通株)外壳蛋白基因(CP)的中间表达载体,通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒,重组TMV-CP基因被转移至烟草细胞,并获得大量再生的转基因烟草。工程烟草的基因组经Southern印迹法分析证明,CP基因在再生工程株染色体中有1—5个拷贝的插入。分子杂交分析确证TMV-CP基因在转基因株中获得正确表达,其mRNA和蛋白产物的丰度分别达0.005—0.01%及0.05—0.2%。攻毒实验表明90%以上的能表达TMV—CP基因的工程烟草能不同程度地抑制病毒的复制、扩散,并显著延缓,减轻系统病状的发生。有3株工程植株直至花期无病状表现,生长正常。这一抗性作用机制在于转化细胞中的外壳蛋白在病毒侵染早期有效地抑制了入侵病毒颗粒的脱壳,从而阻断病毒的复制。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 转基因烟草 抗病毒
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TRANSGENIC TOBACCO PLANTS RESISTANT TO INFECTION OF BOTH TOBACCO MOSAIC VIRUS AND CUCUMBER MOSAIC VIRUS
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作者 方荣祥 田颖川 +10 位作者 王桂玲 秦晓峰 杨毛周 李太元 许丙寅 莽克强 张振臣 周汝鸿 王凤龙 赵钢 韩晓东 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1991年第6期524-526,共3页
Transgenic plants resistant to infection of viruses such as tobacco mosaic virus (TMV),
关键词 TOBACCO TRANSGENIC MOSAIC BREEDING TRANSGENIC CaMV transformed normally PROMOTER inoculation
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VIRUS RESISTANCE OF TRANSGENIC TOBACCO PLANTS EXPRESSING TOBACCO MOSAIC VIRUS COAT PROTEIN GENE
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作者 田颖川 秦晓峰 +4 位作者 王桂玲 杨毛周 方荣祥 许丙寅 莽克强 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1991年第11期1329-1340,共12页
An intermediate expressing vector carrying the tobacco mosaic virus (TMV, Chinese common strain) coat protein (CP) gene was constructed by recombinant DNA techniques. The TMV-CP gene was transferred into the tobacco g... An intermediate expressing vector carrying the tobacco mosaic virus (TMV, Chinese common strain) coat protein (CP) gene was constructed by recombinant DNA techniques. The TMV-CP gene was transferred into the tobacco genome via Ti plasmid and a large number of regenerated plants, including both systemic and local lesion hosts for TMV, were obtained. Southern blot analysis revealed that 1-5 copies of the CP gene were integrated into the tobacco genome. RNA and protein analysis demonstrated that the TMV-CP gene was correctly expressed in the transgenic plants. The abundance of TMV-CP mRNA in total leaf RNA accounted for 0.005-0.01%, while the amount of coat proteins reached 0.05-0.2% of the total leaf soluble proteins. Virus challenge experiments showed that the symptom development of virus infection was markedly delayed and the replication as well as the spread of the virus was significantly inhibited in the transgenic plants expressing the TMV-CP gene. Three of these plants were completely protected 展开更多
关键词 TOBACCO MOSAIC VIRUS TRANSGENIC TOBACCO PLANTS VIRUS resistance.
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