DKK3在慢性肾小球肾炎中表达及诱导肾小球足细胞迁移的机制研究

目的研究DKK3在慢性肾小球肾炎中的表达,分析DKK3在慢性肾小球肾炎发生、发展中的意义。方法选取人正常肾组织20例、慢性肾小球肾炎组织80例为研究材料,通过实时定量PCR和免疫蛋白印迹实验验证DKK3在人正常肾组织、慢性肾小球肾炎组织中的相对表达;实时定量PCR分析β-catenin mRNA在人正常肾组织、慢性肾小球肾炎组织中的相对表达,Pearson相关性分析DKK3与β-catenin在慢性肾小球肾炎组织中的表达相关性;选取肾小球足细胞MPC5进行DKK3基因过表达,transwell实验验证实验组和对照组中细胞迁移和侵袭的影响;免疫蛋白印迹实验验证DKK3对细胞迁移和侵袭的影响机制。结果与正常肾组织相比,DKK3在慢性肾小球肾炎组织中表达上调(P<0.01),同时DKK3的表达与β-catenin呈正相关性,并参与慢性肾小球肾炎的进展(P=0.0002,r^2=0.1651);DKK3基因过表达后能明显促进细胞迁移和侵袭(P<0.01);免疫蛋白印迹实验显示DKK3基因过表达后能上调Vimentin、N-cadherin、MMP7、β-catenin蛋白的表达,下调E-cadherin蛋白的表达水平(P<0.01)。结论 DKK3在慢性肾小球肾炎组织中表达上调,可能是重要的调控因子参与慢性肾小球肾炎的进展。

miR-450b-3p/TLR8轴在RSV感染肾细胞后对细胞因子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ分泌的研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染后细胞因子风暴引起肾损伤的潜在机制。方法 RSV感染肾细胞ACHN后,检测细胞因子风暴关键分子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平。通过miRNA高通量测序检测RSV感染后不同时间段ACHN细胞中miRNA水平,并通过Pearson相关系数分析miRNA表达水平与IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ分泌水平的相关性。通过miRNA inhibitor筛选高相关的miRNA与细胞因子的关系。此外,鉴定miRNA的关键底物。结果 RSV感染肾细胞ACHN后,细胞因子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平随着感染时间增加而升高。干扰miR-450b-3p后,IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平上升。敲低TLR8时,RSV感染肾细胞后IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平下降。过表达miR-450b-3p后,TLR8的mRNA水平和蛋白水平均下降;干扰miR-450b-3p后,TLR8的m RNA水平和蛋白水平均上升。此外,miR-450b-3p靶向TLR8 mRNA的3’端非编码区。TLR8敲除后,RSV感染时过表达miR-450b-3p,IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平无显著变化。过表达miR-450b-3p后,MyD88与TRAF6的相互作用水平下降,IRF7和p65的磷酸化水平下降;干扰miR-450b-3p后,MyD88与TRAF6的相互作用水平上升,IRF7和p65的磷酸化水平上升。结论 miR-450b-3p靶向TLR8 mRNA的3’端非编码区,减少了TLR8的蛋白表达水平。RSV感染肾细胞后,miR-450b-3p水平下降,TLR8水平上升,MyD88与TRAF6的相互作用水平上升,转录因子IRF7和p65被激活,细胞因子IL-6、IL-10、IL-17和IFN-γ的分泌水平升高。

PAX-5在Barrett食管、食管腺癌中的表达及其对食管腺癌细胞侵袭和转移的影响

目的检测配对盒基因-5(paired box,PAX-5)在Barrett食管、食管腺癌组织和食管腺癌细胞系中的相对表达,及其对食管腺癌细胞转移的作用和机制。方法以食管腺癌细胞、正常食管组织、Barrett食管和食管腺癌组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PAX-5mRNA在食管腺癌细胞系中表达;qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证PAX-5 mRNA和蛋白在组织中的相对表达。采用表达最低的OE33为研究对象,分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-PAX-5质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至OE33细胞系,利用Transwell迁移和侵袭实验检测PAX-5的迁移和侵袭的影响,并用qRT-PCR和免疫蛋白印迹验证PAX-5基因迁移和侵袭的分子机制。结果食管腺癌中PAX-5mRNA和蛋白的表达显著低于Barrett食管和正常食管组织(P<0.001),PAX-5mRNA在食管腺癌细胞系中表达下调(P<0.001);Transwell实验研究显示:与对照组相比,实验组迁移和侵袭能力明显受到抑制;过表达PAX-5抑制上皮-间质转化(EMT)相关基因的表达(P<0.001)。结论PAX-5在食管腺癌中表达下调,可能作为潜在的抑癌基因参与食管腺癌的进程。

基于WNT/β-catenin信号通路研究DMBT1调控慢性肾小球肾炎发生发展的作用机制

目的研究DMBT1在人慢性肾小球肾炎(chronic glomerulonephritis,CGN)中相对表达及甲基化水平,分析DMBT1与WNT/β-catenin信号通路在CGN发生发展中的关联。方法收集30例正常人肾组织(肾癌手术中切除的癌旁正常肾组织)、86例CGN患者肾组织作为研究对象,通过实时定量PCR和免疫蛋白印迹实验验证DMBT1在CGN肾组织中的表达,采用甲基化PCR分析DMBT1在CGN患者中甲基化水平。选取人肾小球足细胞分为两组:DMBT1转染组(进行DMBT1基因过表达)和对照组,采用细胞划痕实验研究两组细胞迁移情况;通过免疫蛋白印迹实验验证DMBT1对WNT/β-catenin信号通路的影响。结果与正常肾组织相比,DMBT1在CGN患者肾组织中表达下调(P<0.01);甲基化PCR结果显示CGN患者的DMBT1甲基化程度明显增高;DMBT1基因过表达能抑制细胞迁移和侵袭(P<0.01);过表达DMBT1后,WNT/β-catenin信号通路及其下游细胞因子明显受到抑制。结论DMBT1在CGN中下调,能作为重要的调控因子参与CGN的发生发展。

双能量CT对痛风的诊断价值

目的评价双能量CT对痛风的诊断价值。方法对试验组的25例痛风患者双侧足部、踝关节、膝关节、手部、腕关节及肘关节行双能量CT扫描成像，统计尿酸盐结晶沉积病灶数，对出现临床症状的关节行X线检查。对患者四肢关节进行临床体检，统计临床病灶数目及部位。对照组的20例类风湿关节炎（RA）患者的受累关节及对侧关节行双能量CT扫描成像。同时检测所有患者的血尿酸、血肌酐、总胆固醇及甘油三酯水平。对比2组患者双能量CT检查结果与x线及临床体检之间的差异。统计学处理采用t检验和，检验。结果双能量cT检查中各关节发现病灶的病例数及比例分别为足部及踝关节23例（92％），膝关节17例（68％）、手与腕关节3例（12％）及肘关节1例（4％），足部及踝关节受累患者最多（P〈0．05）。尿酸盐沉积病灶共184处，其中足与踝关节、膝关节、手与腕关节及肘关节的病灶数分别为107处（58．2％）、72处（39．1％）、4处（2．2％）、1处（0．5％），足部及踝关节中尿酸盐沉积病灶数最多（P〈0．01）。临床统计病灶数为64处，仅占双能量CT发现病灶数的34．8％，差异具有统计学意义（P〈0．01）。而x线检查仅6例患者发现骨质破坏等非特异性改变。试验组患者血尿酸、血肌酐及甘油三酯水平较对照组明显增高，差异具有统计学意义（P值分别为〈0．01，〈0．05，〈0．05）。结论双能量CT对痛风的诊断有重要的临床价值。

CBD寻梦

和所有的外地"进京"的务工人员一样,顾静带着一个所有"北漂一族"都拥有的关于梦想的念头,只身来到了这座如梦的城市。顾静,并不像她的名字一样安静,她是个十分闹腾的女孩,敢想敢做。打小她就有一个绰号——顾吵吵,并且因为这个外号,她漫长的学生时代里一直不寂寞。此时,顾静正站在拥挤的地铁里,十号线的国贸路线和一号线的建国路线在上下班期间总是拥挤着攒动的人头。