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亚位点+1处突变提高软化类芽胞杆菌环糊精糖基转移酶底物麦芽糊精特异性
被引量:
8
1
作者
许乔艳
韩瑞枝
+3 位作者
李江华
堵国成
刘龙
陈坚
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期98-108,共11页
通过改造来源于软化类芽胞杆菌Paenibacillus macerans的环糊精糖基转移酶(Cyclodextrin glycosyltransferase,CGT酶)的+1亚位点提高其对麦芽糊精的底物特异性,并进一步提高以麦芽糊精为糖基供体催化合成2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸(AA...
通过改造来源于软化类芽胞杆菌Paenibacillus macerans的环糊精糖基转移酶(Cyclodextrin glycosyltransferase,CGT酶)的+1亚位点提高其对麦芽糊精的底物特异性,并进一步提高以麦芽糊精为糖基供体催化合成2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的效率。首先对+1亚位点附近的3个氨基酸残基Leu194、Ala230和His233分别进行定点饱和突变,得到3个优势突变体L194N(亮氨酸→天冬酰胺),A230D(丙氨酸→天冬氨酸),H233E(组氨酸→谷氨酸),然后以这3个优势突变体为模板进一步进行两点和三点复合突变,获得7个复合突变体。研究结果表明,突变体L194N/A230D/H233E以麦芽糊精为底物合成AA-2G的产量最高,达到1.95 g/L,比野生型CGT酶提高了62.5%。对获得的突变体进行动力学分析,发现高浓度的底物L-AA对突变型CGT酶催化的酶促反应具有抑制作用。确定了突变体酶促反应的最适温度、pH和反应时间。模拟突变体的三维结构并进行分析,突变体底物特异性的改善可能与CGT酶第194位、230位和233位的氨基酸残基的亲水性及与底物分子间的作用力的改变有关。
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关键词
环糊精糖基转移酶
L-抗坏血酸
麦芽糊精
2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸
定点饱和突变
原文传递
题名
亚位点+1处突变提高软化类芽胞杆菌环糊精糖基转移酶底物麦芽糊精特异性
被引量:
8
1
作者
许乔艳
韩瑞枝
李江华
堵国成
刘龙
陈坚
机构
江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
江南大学粮食发酵工艺及技术国家工程实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期98-108,共11页
基金
111工程(No.111-2-06)
江苏省科技支撑计划项目(No.BE2011624)资助~~
文摘
通过改造来源于软化类芽胞杆菌Paenibacillus macerans的环糊精糖基转移酶(Cyclodextrin glycosyltransferase,CGT酶)的+1亚位点提高其对麦芽糊精的底物特异性,并进一步提高以麦芽糊精为糖基供体催化合成2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸(AA-2G)的效率。首先对+1亚位点附近的3个氨基酸残基Leu194、Ala230和His233分别进行定点饱和突变,得到3个优势突变体L194N(亮氨酸→天冬酰胺),A230D(丙氨酸→天冬氨酸),H233E(组氨酸→谷氨酸),然后以这3个优势突变体为模板进一步进行两点和三点复合突变,获得7个复合突变体。研究结果表明,突变体L194N/A230D/H233E以麦芽糊精为底物合成AA-2G的产量最高,达到1.95 g/L,比野生型CGT酶提高了62.5%。对获得的突变体进行动力学分析,发现高浓度的底物L-AA对突变型CGT酶催化的酶促反应具有抑制作用。确定了突变体酶促反应的最适温度、pH和反应时间。模拟突变体的三维结构并进行分析,突变体底物特异性的改善可能与CGT酶第194位、230位和233位的氨基酸残基的亲水性及与底物分子间的作用力的改变有关。
关键词
环糊精糖基转移酶
L-抗坏血酸
麦芽糊精
2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸
定点饱和突变
Keywords
cyclodextrin glycosyltransferase, L-ascorbic acid, maltodextrin, 2-O-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid,site-saturation mutagenesis
分类号
TQ466.3 [化学工程—制药化工]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
亚位点+1处突变提高软化类芽胞杆菌环糊精糖基转移酶底物麦芽糊精特异性
许乔艳
韩瑞枝
李江华
堵国成
刘龙
陈坚
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
8
原文传递
已选择
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参考文献
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