沙门氏菌PCR检测方法的建立

根据GenBank沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因序列设计引物,扩增特异的202 bp核苷酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了沙门氏菌特异、敏感和快速的PCR检测方法。特异性试验结果表明,从沙门氏菌参考菌株中均能扩增出特异性的核苷酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用简便的直接煮沸裂解法制备样品DNA,该方法的敏感性可达2.43×103CFU/mL。

牛奶中志贺氏菌PCR检测方法的建立

根据Genbank志贺氏菌侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因序列,自行设计引物,扩增特异的326bp核酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了志贺氏菌特异、敏感、快速的PCR检测方法,并对牛奶中的志贺氏菌进行了检测。特异性试验结果表明,志贺氏菌参考菌株均能扩增出特异的核酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用试剂盒提取基因组,该方法的敏感性可达到1.75×102cfu/mL。人工污染牛奶的模拟检测结果表明,PCR方法的检测限为1.75×103cfu/mL。

薹菜再生体系的建立

为了建立薹菜再生体系进而为转基因工作做准备,以薹菜无菌苗子叶-子叶柄和下胚轴为外植体,研究了适于薹菜再生的外植体类型,以苗龄、AgNO3的质量浓度和植物生长调节剂组合,建立了薹菜的再生体系。结果表明,5 d苗龄的子叶-子叶柄为最佳外植体材料。筛选出最佳培养基为1/2NH4+浓度的MS+BAP5 mg/L+ZT 2 mg/L+NAA 0.7 mg/L+AgNO37.5 mg/L,子叶-子叶柄再生频率达67.8%。

农杆菌介导的薹菜遗传转化体系研究

以薹菜子叶-子叶柄为外植体,研究了根癌农杆菌介导的遗传转化技术。用含GUS和NPTⅡ基因的农杆菌侵染子叶-子叶柄,获得了具有卡那霉素抗性的再生植株。再生植株经GUS组织染色,证实外源基因转化到植物基因组中。卡那霉素敏感性测定结果表明,当培养基中含卡那霉素(Km)15 mg/L时,非转化再生植株全部白化。转基因抗性芽筛选的适宜的卡那霉素浓度为10 mg/L。

仓鼠源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性研究

从死亡仓鼠的血液及内脏器官中分离出一株细菌,经镜检、菌落形态观察、培养特性观察、生化试验、PCR鉴定及16 S rRNA基因测序和同源性分析,确定该分离菌株为缓慢葡萄球菌。动物回归试验表明,分离菌可以引起实验小鼠的慢性死亡,这表明缓慢葡萄球菌具有致病性并很可能会对公共卫生安全具有潜在威胁。药敏试验显示,该分离菌株对大多数抗生素均十分敏感,但对氟喹诺酮类药物及复方新诺明有很强的耐药性。

牛、羊布鲁菌多重PCR方法的建立与应用

根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成了3对引物,以牛种布鲁菌544A、104M和羊种布鲁菌16M基因组DNA为模板,通过优化反应条件,建立了可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法。牛种布鲁菌可扩增出301和114bp 2条带,羊种布鲁菌可扩增出301和253bp 2条带,该方法对牛种布鲁菌544A和羊种布鲁菌16M混合DNA模板的最小检出量为100pg,对大肠杆菌O157∶H7、小肠结肠炎耶尔森菌等15种参照菌的核酸扩增结果均为阴性。应用该方法对吉林省某牛场的106份粪便进行检测,虎红平板凝集试验作对照,结果PCR检测9份为阳性,且全为牛种布鲁菌阳性,对应的虎红平板凝集试验也为阳性。结果表明,建立的多重PCR方法具有良好的敏感性和特异性,为布鲁菌病的鉴别诊断提供了一种分子检测工具。

仓鼠致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为探讨长春地区某仓鼠饲养场中仓鼠急性死亡的原因及应对该突发性疾病,对死亡仓鼠进行实验室检查并分离得到1株细菌,通过对该分离株进行形态学观察、培养特性观察、生化试验、小鼠致病性试验、PCR鉴定和23SrRNA基因同源性分析,判定该分离菌为1株高致病性大肠杆菌。该菌可致仓鼠突发急性致死性大肠杆菌病,死亡率达到100%,死亡小鼠出现胃肠道极度膨胀的典型症状。药敏试验结果表明,该大肠杆菌对多种抗生素敏感,但对四环素类抗生素及复方新诺明(SXT)有很强的耐药性,可用庆大霉素进行治疗。研究结果为探讨急性大肠杆菌病的发病机制及其防治提供了理论基础。

金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps抗原表位的串联表达及多克隆抗体的制备

为获得金黄色葡萄球菌特异性抗原蛋白并以此制备多克隆抗体,应用DNAStar软件筛选金黄色葡萄球菌FnbpA、Clf A、Ebps的抗原表位,以柔性氨基酸序列连接后进行全基因合成,将目的基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞,诱导表达,采用Sepharose 4B柱亲和层析纯化表达蛋白,制备抗原后对家兔进行皮下多点注射,于第42天采集外周血,获得血清。结果表明,本试验成功构建了金黄色葡萄球菌抗原基因表达载体,并获得了高免血清,经ELISA的方法检测血清效价可达到1∶10000以上,成功制备多克隆抗体,为以后采用免疫学方法快速检测金黄色葡萄球菌奠定了基础。

中国对韩农产品出口现状分析

2015年6月1日，中韩自贸协定正式签署，中韩自贸区建设即将进入实施阶段。中韩自由贸易协定的签定，为中韩两国各领域经贸发展带来新的机遇。双方就有关农产品方面也达成了共识，采取多种措施保障促进中韩农产品贸易发展。本文基于对2002年～2014年中国对韩农产品出口数据，从总体、细分两个层次分析中国对韩农产品出口贸易的现状。并针对存在问题提出建议以便在新形势下抓住机遇，更好地促进中国对韩农产品出口。

定量检测牛奶中蛋白质ELISA方法的建立

本试验旨在建立特异检测牛奶蛋白质含量的ELISA方法。利用提纯酪蛋白免疫试验动物,获得针对酪蛋白的多克隆抗体;利用棋盘格试验确定抗原抗体的最佳作用浓度,并优化各步骤反应条件;根据标准样品建立牛奶中蛋白质含量的定量ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、检测范围及重复性进行评价。通过试验确定封闭液为1%BSA,37℃孵育120 min;血清抗体工作浓度为1∶12000稀释,37℃孵育90 min;酶标二抗最适浓度为1∶3000稀释,37℃孵育30 min。牛奶酪蛋白检出范围为0.063~0.500μg/mL;该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,回归率范围为97.6%~123%。成功建立了牛奶蛋白含量的定量ELISA检测方法。

施用硼肥对苹果产量及品质的影响

以6年生红富士苹果为研究对象,观察检测基施硼砂0~0.1 kg/株对苹果生物学性状、品质、产量及产值的影响。结果表明:基施硼肥的果园,果树树体生长健壮、叶色浓绿、枝叶繁茂;果实着色均匀、颜色鲜亮,烂果、病果数量少,株施0.05 kg硼砂和株施0.1 kg硼砂的苹果商品率比不施用硼肥相比分别提高了4.67%和4.92%;施用硼肥的果树果实可溶性糖含量有所提高、可滴定酸含量有所下降,与不施用硼肥相比株施0.05 kg硼砂和株施0.1 kg硼砂的果树果实糖酸比分别提高3.74和4.02,果实口感更好;与不施用硼肥相比,株施0.05 kg硼砂和株施0.1 kg硼砂的苹果亩增产量分别为87.63 kg/亩和94.42 kg/亩,每亩果园增收分别为466.85元和489.04元。

含氨基酸水溶肥对葡萄产量与质量及经济效益的影响

选用八年生玫瑰香葡萄作为试验材料,研究在葡萄坐果期开始喷施不同浓度的含氨基酸水溶肥对葡萄产量、品质及经济效益的影响。结果表明,喷施含氨基酸水溶肥对葡萄有显著的增产效果。综合考虑产量、品质和经济效益等因素,喷施含氨基酸水溶肥1 500 g/hm^2效果最好,较清水对照增产5.83%,增收8 613元/hm^2,产投比为31.9∶1。因此建议在葡萄生产上施用含氨基酸水溶肥。

涉及分担函数的全纯函数正规定则

本文主要研究全纯函数族的正规问题,采用Nevanlinna理论证明了一类零点个数为有限的全纯函数族在分担条件下的正规性,改进了Pang X.C.和Zalcman L.于2000年得到的亚纯函数族关于分担值的正规定则.

农业信息化在蔬菜病虫害防治技术上的应用探究

农业生产技术水平持续提升,结合信息时代发展要求,积极引用现代化信息技术和手段,有助于提升农业信息化水平,促使各项工作发生巨大的变化。在蔬菜病虫害防治技术层面,通过农业信息化技术应用,可以实现信息高效传输和共享,深层次分析其中存在的问题,并且为蔬菜生产与病虫害防治提供坚实保障和支持。因此,现代农业信息化已经成为主要趋势,不容忽视。主要分析蔬菜病虫害防治中农业信息化的应用情况,在把握其特点和必要性基础上,制定有效措施积极践行应用。

涉及导函数与分担函数的全纯函数正规定则

针对一类零点个数为有限的全纯函数族,在函数与其导函数分担一个极点均为重级的亚纯函数的条件下,利用Nevanlinna理论及其方法改进了已有文献在分担值条件下得到的一个定理.

不同品种绿芦笋品质比较试验

为了比较不同品种绿芦笋品质的优劣性,通过测定其商品品质、可溶性糖含量、持水力、叶绿素含量和V_C含量等指标,分析比较了各品种绿芦笋的品质差异。结果表明,4个品种绿芦笋的商品率均在95%以上,但无显著性差异;直径均在8 mm以上,无显著性差异;含水量均在98%左右,其中格里斯含水量显著高于其他品种;4个品种的可溶性糖含量均较低,在20%～30%之间,但无显著性差异;持水力在4%～8%之间,其中达宝利品种持水力最强;达宝利和2000—3品种叶绿素含量均在0.6 mg/g以上,格里斯和冠军品种均在0.4～0.6 mg/g之间;不同品种绿芦笋的V_C含量差别较大,总体在50～200 mg/100 g之间,其中达宝利品种含量最高。综合比较,达宝利品种的品质较为优良。

初中音乐高效课堂教学“以学为主,先学后教”的模式初探

“以学为主,先学后教”是一种与传统“先教后学”相对的教学模式。在此模式下,学生以完成任务与既定目标为目的,通过对知识与问题的自主探索、分析、研究,掌握一定的知识与技能。本文简单阐述“以学为主,先学后教”对音乐教学的重要意义,重点讨论了初中音乐高效课堂上该模式的构建,以及该模式的应用反思,以供参考。

非洲猪瘟病毒CP204L基因的生物信息学分析、载体构建及蛋白表达

【目的】非洲猪瘟病(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)导致的,能引起猪高度致死的急性传染病。采用生物学手段制备检测试剂能更快、更有效地监测疫情,对ASF疫情的防控尤为重要。【方法】根据ASFV的CP204L基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与p EASY-T5连接构建克隆载体,利用生物信息学软件对蛋白进行生物信息学分析,用T4连接酶构建重组载体pET-32a(+)-CP204L,将成功构建的重组表达载体质粒转入感受态Rosetta(DE3)中,用1 mmol/L IPTG、37℃诱导表达8 h后进行SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达。【结果】生物信息学分析结果表明,P30蛋白是一种主要由无规卷曲α螺旋和β折叠组成的亲水和稳定蛋白,PCR扩增及测序比对结果证明成功构建了重组表达载体,SDS-PAGE电泳验证了在24.3 ku处有潜在的P30蛋白表达。【结论】通过生物信息学软件在分子层面分析了P30蛋白的理化性质及蛋白结构,P30蛋白的表达为制备ASFV血清学诊断试剂及诊断技术奠定了基础。

多效唑对夏秋季番茄穴盘苗质量的影响

为了探明多效唑(PP333)浓度对夏秋季穴盘番茄苗质量的影响,配制不同浓度的PP333溶液对2叶期番茄苗进行喷施处理,并对处理后穴盘苗的主要形态指标和生理指标进行测定分析。结果表明,夏秋季不同浓度的PP333与对照相比均有不同程度的壮苗效果,2次试验中200 mg/L PP333处理的壮苗效果最为明显,与各自对照相比,株高均显著下降,根冠比均显著增加,壮苗指数和G值均显著升高,根系活力和叶绿素含量均显著增加,可溶性蛋白质和可溶性糖含量均有所下降。

提高溧阳抽水蓄能电站人工砂混凝土和易性

在混凝土施工方面对合格率低的人工砂有效利用率提高，很大程度上节约了细骨料；且拌制的混凝土出机口坍落度、含气量稳定，流动度好，和易性佳，现场施工良好，极大地方便了混凝土施工。