同步热放化疗对宫颈癌组织C-myc、HSP70蛋白表达的影响

目的:研究同步热放化疗治疗宫颈癌的疗效及其对宫颈癌组织C-myc、HSP70蛋白表达的影响。方法:将40例宫颈癌Ⅲb期随机分为同步热放化疗组(H+CRT组)和同步放化疗组(CRT组),观察比较局部肿瘤消退情况和1,2,3年无进展生存期;采用免疫组化法检测两组治疗前、中宫颈肿瘤组织中C-myc、HSP70蛋白表达。结果:在完成体外照射45Gy时H+CRT组局部肿瘤完全消退率高于CRT组(P<0.05),但两组患者的1,2,3年无进展生存期差异无统计学意义(P>0.05)。在治疗前,两组C-myc、HSP70蛋白阳性表达强度差异均无统计学意义(P>0.05)。在治疗中,H+CRT组较CRT组的C-myc蛋白阳性表达强度减弱(P<0.05);H+CRT组较CRT组HSP70蛋白阳性表达强度增强(P<0.05);H+CRT组治疗中较治疗前HSP70蛋白表达强度增强(P<0.05)。结论:热疗与同步放化疗具有协同增强作用,但1,2,3年无进展生存期无差异。热放化疗能减弱C-myc蛋白阳性表达强度;可以上调HSP70蛋白阳性表达强度。同步热放化疗是否通过干扰肿瘤细胞HSP70通路诱导或对抗凋亡,有待进一步研究。

金黄色葡萄球菌Hla基因的原核表达及其溶血活性鉴定

α毒素(Hla)作为重要的毒力因子,在金黄色葡萄球菌感染宿主的过程中具有破坏宿主细胞免疫屏障的效应。通过基因工程手段对金黄色葡萄球菌Hla基因进行克隆与原核表达,分离纯化得到重组Hla融合蛋白,对其进行SDS-PAGE和Western blot检测,并检测其溶血活性。结果显示,重组Hla融合蛋白的大小约为53ku,与预期的蛋白大小一致,纯化后蛋白浓度为0.70mg/mL;重组Hla融合蛋白对山羊血红细胞有良好的溶血活性,溶血指数为92.84%±3.73%。本研究获得有活性的重组Hla融合蛋白,为下一步研究α毒素的作用机制和防御金黄色葡萄球菌的感染提供了有价值的参考资料。

应用锥形束CT校正宫颈癌调强放疗摆位误差的研究

目的应用锥形束CT实时在线校正宫颈癌调强放疗的摆位误差,确定宫颈癌患者外照射治疗计划中外扩边界值的范围,并分析体质量差别对摆位的影响。方法调强放疗的宫颈癌患者按体质量指数(body mass index,BMI)分为A组(BMI≥24)和B组(BMI<24),将所获得锥形束CT(cone-beam com-puter tomography,CBCT)与计划CT图像进行灰度自动配准,计算摆位误差并进行在线评价。结果 37例患者在X轴(左右)、Y轴(头脚)、Z轴(前后)方向摆位误差分别为(1.1±2.3)、(2.1±5.0)、(-1.1±2.2)mm,外扩边界分别为5.2、11.0、5.6mm。A组患者在Y轴方向摆位误差较B组增大,差异有统计学意义(P<0.05)。而两组在X轴、Z轴方向差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用锥形束CT在线校正可减小宫颈癌患者摆位误差、提高放疗的精确性,可利用摆位误差估算放疗摆位外扩边界值。体质量指数大者应适当增加外扩边界。

羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立

为检测羊口疮病毒,本研究设计了针对羊口疮病毒B2L、F1L和VIR 3个基因的特异性引物,建立了一种针对羊口疮隐性感染的三重PCR检测方法,并分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定。结果表明,其对羊口疮病毒的最低检测下限可达到100.2 TCID50/mL,能够特异性地扩增出3个检测基因的相应片段。应用本方法对临床采集的羊口疮阳性样品和待检样品检测结果显示,阳性样品的羊口疮病毒检出率为100%,待检样品的检出率为73.3%。

羊口疮病毒B2L和VIR基因原核表达及抗原性鉴定

为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。用灭活的羊口疮病毒免疫家兔,制备多克隆抗体,Western blot、ELISA鉴定B2L和VIR蛋白的抗原性。结果显示B2L、VIR蛋白均能与兔抗羊口疮病毒抗血清结合,证明B2L、VIR蛋白具有与羊口疮病毒共同的B细胞表位。

羊口疮病毒灭活疫苗的制备及免疫效果观察

从杨凌奶山羊养殖场羊口疮临床症状典型的奶山羊唇部结痂部位分离病毒,采用羊口疮病毒敏感的牛睾丸原代细胞进行病毒的增殖培养,将不同稀释度的羊口疮病毒液接种到牛睾丸原代细胞中,测定病毒滴度。将羊口疮病毒液用4mL/L甲醛溶液灭活48h,取少量样品,鉴定病毒灭活效果,并进行灭活疫苗的安全性进行检测。待孕羊分娩前42、28、14d分别免疫1次,均为颈部皮下注射,然后利用固定病毒稀释血清法进行中和抗体的测定。结果显示,从羊口疮结痂中成功地分离出了病毒,其能够引起原代犊牛睾丸细胞病变;测得羊口疮病毒液滴度为108.1 TCID50/mL;灭活的病毒不能引起犊牛睾丸细胞病变,也未导致羔羊发生羊口疮;灭活病毒免疫孕羊后的中和抗体效价为1∶24,对羔羊的保护率为60.1%。

关中奶山羊隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

为摸清近年来陕西关中奶山羊隐性乳房炎病原菌种类,利用奶山羊隐性乳房炎诊断试剂盒对陕西富平关中奶山羊进行随机抽样检测,采集乳房炎阳性乳样进行细菌的分离与鉴定。结果显示,从364份阳性样品中共分离出337株细菌,其中凝固酶阴性葡萄球菌186株,占所分菌的55.2%;金黄色葡萄球菌50株,占所分菌的14.8%;乳房链球菌24株,占所分细菌的7.1%;猪链球菌9株,占所分细菌的2.7%;大肠埃希菌61株,占所分细菌的18.1%;其他细菌7株,占所分细菌的2.1%。表明凝固酶阴性葡萄球菌是引起奶山羊隐性乳房炎的主要病原菌,其次是大肠埃希菌,金黄色葡萄球菌,链球菌。本研究结果为奶山羊乳房炎防治和鲜乳质量控制提供了重要的依据。

C-MYC基因在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌治疗前后的表达及其与HPV的相关性

目的:探讨宫颈上皮内瘤变及宫颈癌治疗前后C-MYC基因扩增和HPV感染的变化,分析C-MYC基因扩增和宫颈HPV感染转归的关系。方法:对确诊为宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的79例患者治疗前后分别采用FISH方法检测C-MYC基因的表达情况;并采用基因芯片法检测HPV-DNA。结果:①治疗前C-MYC基因阳性表达率随病理级别的增加逐渐升高,治疗后C-MYC基因阳性表达率较治疗前明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。②治疗前HPV阳性感染率随病理级别的增加而升高,治疗后HPV感染率较治疗前明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且HPV持续感染率在CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈癌组中分别是1/3、50.00%、20.00%和17.24%。③C-MYC基因扩增与HPV感染转归情况无相关。结论:C-MYC基因扩增与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发展关系密切,与HPV的感染转归无明显相关关系。

福州市土地集约利用模糊评价研究

城市土地集约利用,对于提高城市土地利用效率、实现耕地总量动态平衡和社会经济可持续发展有着重大而深远的意义;宏观上建立了城市土地集约利用评价指标体系,运用模糊数学等方法,得出目前福州市城市土地利用仍处于适宜利用水平,对集约利用的隶属度为0.34,未来城市土地集约利用有较大的提升空间,潜力主要包括存量建设用地和一定量的旧城改造潜力、土地置换潜力;今后必须适时实行"挖、储、供、管"等一揽子集约用地工程,制定并贯彻促进土地集约利用的政策和制度。

甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素化学发光免疫检测方法的建立及分析性能评估

目的构建甲氧基肾上腺素(MN)和甲氧基去甲肾上腺素(NMN)的化学发光免疫检测试剂。方法将MN、NMN的特异性抗体分别包被到磁微粒表面,通过标本前处理工艺将待测物生物素化,把与生物素特异性结合的亲和素用辣根过氧化物酶(HRP)标记,通过免疫反应,可以形成固相化的抗体-待测物-生物素-亲和素-HRP免疫反应产物。结果分别建立了MN、NMN的校准曲线,通过性能评估试验测得该检测试剂与多种结构类似物均无明显的交叉反应;MN检测试剂的分析灵敏度为10.21 ng/mL,NMN检测试剂的分析灵敏度为6.91 ng/mL;MN、NMN检测试剂变异系数分别为4.79%~5.25%、3.85%~4.73%;且两种检测试剂的稳定性评估结果显示试剂稳定性较好。结论该研究成功构建了MN、NMN化学发光免疫检测试剂。

磁微粒化学发光法测定人尿液/血浆中儿茶酚胺类物质

目的建立血浆和尿液中游离儿茶酚胺类物质的化学发光免疫检测方法。方法将血浆或尿液标本进行提取、酰化、释放、甲基化处理,处理后的待测物分别与固相化的特异性抗体反应,再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶(HRP),与待测抗原上的生物素结合,可以形成固相化的抗体-抗原-HRP免疫反应复合物,HRP催化底物发光。结果建立的肾上腺素(E)检测试剂的灵敏度为6.2 pg/mL,去甲肾上腺素(NE)检测试剂的灵敏度为11.9 pg/mL,多巴胺(DA)检测试剂的灵敏度为4.2 pg/mL,且与多种结构类似物均无明显的交叉反应;E、NE、DA检测试剂的变异系数分别为1.12%~1.77%、1.45%~3.65%、1.30%~1.96%;3种检测试剂的稳定性较好。结论本研究成功建立了检测尿液和血浆中游离E、NE、DA的化学发光免疫检测方法。

血浆中游离甲氧基肾上腺素类物质化学发光免疫检测方法的建立及性能确认

目的建立血浆中游离甲氧基肾上腺素类物质的化学发光免疫检测方法并对检测方法部分性能进行确认。方法将待测样品(校准品、血浆或质控品)进行萃取、酰化,处理后的待测物分别与固相化甲氧基肾上腺素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)的特异性抗原竞争结合辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性抗体,通过免疫反应,形成固相化的抗原-抗体-HRP免疫反应复合物,HRP催化底物发光。用特异性、灵敏度、精密度、热加速稳定性和准确度进行性能确认。结果建立的MN、NMN检测方法检测多种结构类似物均无明显的交叉反应;MN检测试剂的空白限、检出限、功能灵敏度分别为10.51、21.15、25.76 ng/L,NMN检测试剂分别为11.54、28.43、31.29 ng/L;MN、NMN检测试剂变异系数分别为2.41%~5.38%,1.61%~3.22%;2种检测试剂的热加速稳定性试验显示检测试剂在2~8℃可以稳定存放1年,且该方法量值结果可溯源至质谱。结论本研究成功建立了检测血浆中游离MN、NMN的化学发光免疫检测方法。