环介导等温扩增技术在弓形虫感染小鼠腹腔液检测中的应用

目的环介导等温扩增(LAMP)检测弓形虫感染小鼠腹腔液的反应条件及反应体系的优化与筛选。方法建立弓形虫感染小鼠模型,酚氯仿法抽提小鼠腹腔液DNA作为反应模板,在弓形虫大小为529 bp的高度重复序列中选择一段靶序列设计内外引物,建立LAMP反应并对反应体系及条件中Mg^(2+)、甜菜碱及反应温度条件进行优化。结果所建立的LAMP反应以Mg^(2+)浓度和反应温度影响较为明显,而甜菜碱浓度变化的影响不大,优化后的LAMP反应体系能够特异性扩增弓形虫感染小鼠的腹水微量DNA,且对日本血吸虫、肝吸虫及盾盘吸虫的DNA的扩增显示为阴性。结论以弓形虫529 bp建立并优化后的LAMP技术可以检测到弓形虫微量DNA,并且具有较好的特异性,可对人体弓形虫轻度感染诊断技术的建立提供一定的科学依据。

齐齐哈尔市孕妇弓形虫感染情况调查

目的调查齐齐哈尔市孕妇弓形虫感染情况。方法统计分析齐齐哈尔市几所医院的妊娠期妇女以及部分自愿检查的妊娠期妇女的刚地弓形虫血清学检查结果,共统计562名22~35岁妊娠期妇女的血清Ig M检查数据。结果发现共9人的检测结果为阳性,阳性率为1.60%,表明该孕妇为呈现为近期的急性感染。结论齐齐哈尔市妊娠期妇女近3年来的弓形虫感染率明显高于黑龙江省的弓形虫平均感染率。

刚地弓形虫蛋白磷酸酶的全蛋白质组鉴定及生物信息学分析

从相关数据库分别下载刚地弓形虫GT1、 ME49、 VEG虫株,疟原虫以及44个其他真核生物物种的全蛋白质组氨基酸序列,应用HMMER3软件搜索弓形虫不同虫株及其他物种氨基酸序列,鉴定出弓形虫及其他物种磷酸酶家族蛋白。对所有鉴定出的磷酸酶家族蛋白进行聚类分析,提取相对保守的磷酸酶家族蛋白氨基酸序列,分别用邻接法和最大似然法构建系统进化树。应用Pfam在线工具对鉴定出的弓形虫磷酸酶蛋白的结构域进行注释,并进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,利用基因芯片数据分析并比较蛋白磷酸酶在不同虫株及ME49虫株不同发育时期的转录水平。共鉴定出64个弓形虫磷酸酶蛋白,分属5个磷酸酶亚家族,其中,磷蛋白磷酸酶家族蛋白11个,酪氨酸磷酸酶样蛋白A家族蛋白1个,天冬氨酸依赖的酪氨酸磷酸酶家族蛋白8个,双特异性磷酸酶家族蛋白9个,Mg^(2+)或Mn^(2+)依赖的磷酸酶家族蛋白35个。系统进化树分析结果显示,蛋白磷酸酶在不同弓形虫虫株间高度保守,仅有2个蛋白磷酸酶无直系同源蛋白,为VEG虫株所特有。GO富集分析结果显示,弓形虫蛋白磷酸酶主要具有磷酸酶、水解酶及催化活性的分子功能,参与调节去磷酸化的生物学过程。芯片分析结果显示,蛋白磷酸酶在弓形虫不同虫株速殖子时期的表达谱相似,虫株间表达水平差异最大的为TG312200,其在ME49虫株中的表达水平约为GT1和VEG虫株的4倍;部分蛋白磷酸酶的转录水平在ME49虫株不同发育阶段差异显著,如TG318660在未孢子化的卵囊中低表达,TG304955在速殖子和缓殖子期高表达,这些在不同发育时期差异表达的蛋白磷酸酶可能在虫体发育过程中发挥重要作用。