广东地区黄羽肉鸡肠杆菌中碳青霉烯耐药基因的流行病学调查

为了调查广东地区黄羽肉鸡肠杆菌的耐药性以及碳青霉烯耐药基因的流行病学特征,本研究于2020年8—10月从广东省4个黄羽肉鸡养殖场累计收集的248份样品中分离肠杆菌,利用大肠杆菌基因phoA和细菌16S rRNA进行菌种鉴定,采用琼脂扩散法和微量肉汤稀释法测定肠杆菌对13种药物的敏感性,通过PCR方法检测bla_(NDM)、bla_(KPC)、bla_(OXA)和bla_(IMP)四种常见碳青霉烯类耐药基因,并对耐碳青霉烯肠杆菌进行全基因组测序分析,通过接合转移试验探究碳青霉烯耐药基因的水平传播特征。细菌分离和鉴定结果显示,共计分离肠杆菌206株,分离率为83.06%,其中包括186株大肠杆菌、18株肺炎克雷伯菌和2株阴沟肠杆菌。药物敏感性试验结果显示,肠杆菌对氨苄西林钠(94.66%)、复方新诺明(94.66%)、氟苯尼考(86.89%)、盐酸多西环素(70.87%)和硫酸新霉素(61.17%)的耐药性较高,对硫酸阿米卡星(5.83%)、美罗培南(3.40%)和硫酸黏菌素(1.46%)的敏感性较高。PCR结果显示,共有7株肠杆菌检测到碳青霉烯耐药基因,检出率为3.40%,包括5株bla_(NDM-5)基因阳性和2株bla_(OXA-181)基因阳性菌株。全基因组分析结果显示,7株耐碳青霉烯肠杆菌分别为3株大肠杆菌(携带bla_(NDM-5)基因)、2株拟肺炎克雷伯菌(携带bla_(NDM-5)基因)和2株阴沟肠杆菌(携带bla_(OXA-181)基因);7株耐碳青霉烯肠杆菌均携带有大量的耐药基因,且3株大肠杆菌可分为2个序列型(ST)。接合转移试验结果显示,7株耐碳青霉烯菌株均可通过质粒将携带的碳青霉烯耐药基因传播至工程菌C600。结果表明,广东地区黄羽肉鸡肠杆菌耐药状况严峻,耐碳青霉烯基因在肠杆菌的流行率较低,但可通过质粒接合方式发生水平传播,亟需加强监测。

14种中药对临床大肠杆菌的体外抑菌效果

为了明确不同中药对标准菌及广东地区临床分离大肠杆菌(Escherichia coli)的抗菌活性及菌种优势血清型的地区差异性,本试验用管碟法比较14味中药对2株大肠杆菌标准菌株及22株广东地区分离的临床大肠杆菌的抑菌作用;用K-B纸片扩散法进行抗菌药药敏试验。结果显示,14种中药中仅白头翁(Anemone)、金银花(Lonicera japonica)、五倍子(Galla chinensis)、秦皮(Ash bar)、黄连(Coptis root)、大青叶(Isatis indigotica)6种对临床大肠杆菌菌株有抑菌作用,其中金银花和五倍子抑菌活性最强,穿心莲(Andrographs paniculata)、大黄(Rheum palmatum)、苦参(Lightyellow sophora root)等无抑菌作用;在抗菌药药敏试验中,临床大肠杆菌菌株对多黏菌素B(Polymyxin B)最为敏感。本试验为有效利用中药防治广东地区大肠杆菌病打下试验基础,对消除细菌耐药性提供科学依据。

二氧化氯对鸡柔嫩艾美耳球虫病的防治效果研究

为了探究二氧化氯(ClO_(2))对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)的防治效果,试验使用1.2,0.6,0.12,0.06,0.012 g/L的ClO_(2)水溶液和2.5%的K_(2)Cr_(2)O_(7)溶液(空白对照)孵育E.tenella,在培养第15,20,25,30小时统计E.tenella孢子化率。另外,使用1.2,0.6,0.3,0.15 g/L ClO_(2)水溶液按体重1 mL/kg直接灌服雏鸡,观察鸡群的死亡情况及肠道的损伤情况。另使鸡群内服浓度为0.24 g/L的ClO_(2)水溶液及1.0×10^(5)个E.tenella GD株孢子化卵囊,观察ClO_(2)的抗球虫效果,统计抗球虫指数(ACI)。结果表明:用0.12~1.2 g/L的ClO_(2)水溶液培养15~30 h,E.tenella孢子形态发生变化,孢子化率均为0;雏鸡内服浓度为1.2,0.6,0.3,0.15 g/L的ClO_(2)水溶液后均未见死亡且肠道组织均无损伤;感染E.tenella的鸡只内服浓度为0.24 g/L的ClO_(2)水溶液后,其ACI值为163.00,即ClO_(2)为中效抗球虫药,具有一定的抗球虫效果。说明高浓度的ClO_(2)水溶液长时间作用对E.tenella卵囊有明显的抑杀效果,且效果稳定,直接内服ClO_(2)水溶液有明显的抗E.tenella作用,且无毒、安全。

中药复方制剂抗鸡柔嫩艾美耳球虫感染效果研究

考察青蒿、诃子、苦参、柴胡、黄芪、山楂、木香7味中药组成的复方中药制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的防治效果。选取120只健康雏鸡,随机分为6组,除空白对照组外,其余各组(阳性对照组,药物对照组及复方中药低剂量组、中剂量组、高剂量组)试验鸡均经口感染1.5×10^(4)个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,考察各组试验鸡相对增重率、病变值、抗球虫指数ACI、相对球虫卵囊产量及血清生化指标等,评价不同剂量复方中药制剂的抗球虫效果。结果显示,复方中药中剂量组与低剂量、高剂量、磺胺氯吡嗪钠组的相对增重均有显著差异(P<0.05)。ACI与相对卵囊产量统计结果表明,复方中药低剂量组与中剂量组之间无显著差异(P>0.05),且均呈低效抗球虫作用。同时,复方中药中剂量组的耗料量增长率最高,雏鸡总蛋白、白蛋白、总胆固醇等3个生化指标均在攻虫第7天呈升高趋势。复方中药3个试验组雏鸡丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平在攻虫后均呈升高趋势,但未达到肝损伤标准。结果表明,该中药复方制剂中剂量浓度有一定的抗球虫作用,可促生长,且在推荐的剂量下使用安全。

清解合剂提取工艺优化

优化清解合剂的提取工艺,充分提取药物中的有效成分。采用单因素试验确定不同因素对提取工艺的影响以及正交试验的因素与水平;用高效液相色谱检测黄芩苷的含量,以黄芩苷含量和干膏得率为综合评价指标,采用加权评分法进行综合评分,筛选出清解合剂的最佳提取工艺。结果表明,最优提取工艺为料液比1∶15(g∶mL),提取时间1 h,提取次数2次,黄芩苷的线性回归方程为y=37 499x-112 622(R2=0.999 6),黄芩苷对照品质量浓度在7.81~500.00μg/mL范围内呈现良好的线性关系。表明优选的提取工艺稳定可行,为规模化生产提供一定的理论依据。

缓释型干粉环境改良剂的性能评估及临床应用

本试验通过在实验室中对缓释型干粉环境改良剂各指标的测定及采用细菌定性杀灭试验,同时结合缓释型干粉环境改良剂在猪养殖场的应用情况,对缓释型干粉环境改良剂效果进行评价。结果表明,缓释型干粉环境改良剂各项指标均高于试验中选择的市面上其他同类产品,其中系水力达19mL,吸氨量为136.58 mmol/100 g,吸蓝量为21.08(g/100 g)且pH值趋于中性;在细菌定性杀灭试验中,0.78 mg/L(即3.9μg)的亚氯酸钠可杀灭2 × 107 CFU/mL大肠杆菌;并且在临床上持续以50 g/m2喷洒每周2次的方式使用缓释型干粉环境改良剂可以有效降低养殖环境中氨气浓度和湿度,减少猪只呼吸道感染与腹泻等疾病的发生。缓释型干粉环境改良剂对大肠杆菌具有良好的破坏和杀灭作用,在养殖场中的使用可以有效地提高栏舍周转率,降低人工、物料成本.