国内首例淋巴浆细胞性斑块

报告国内首例淋巴浆细胞性斑块。患儿男,9岁。右前臂伸侧红色斑块7年。皮肤科检查:右前臂伸侧不规则红色斑块,上覆白色鳞屑。皮损组织病理:连续性角化不全,表皮不规则增生,局部颗粒层变薄,基底层液化变性,真皮浅中层较密集的淋巴细胞、浆细胞及组织细胞浸润。免疫组化:真皮层浅中层浆细胞膜CD38及CD138弥漫散在阳性。诊断:淋巴浆细胞性斑块。给予克立硼罗软膏外涂治疗,2个月后可见红斑较前变平。

松针多糖微波提取工艺及抗氧化性研究

采用微波辅助法对松针多糖提取工艺进行了研究,通过考察提取温度、提取时间、提取功率和料液比对松针多糖得率的影响,在单因素实验基础上进行正交优化,确定了提取的最佳工艺参数为:提取温度90℃、提取时间10 min、提取功率800 W、料液比1∶14(g·m L^(-1)),提取两次,在优化条件下松针多糖的提取得率最高达2.1698%;此外,通过测定松针多糖还原能力、清除自由基的能力评价了其抗氧化活性,结果表明,松针多糖具有一定的抗氧化能力,对DPPH、·OH、ABTS^+·的半抑制浓度(IC_(50))分别为0.291、1.793、0.617 mg/m L。

火炬松松针多糖提取工艺及其抗氧化性研究

以多糖得率为指标,从火炬松松针中浸提多糖,并测定其体外抗氧化活性。在单因素试验基础上采用响应面法优化超声波辅助热水浸提火炬松松针多糖,最佳的工艺参数为:30 g松针粉末在超声波作用时间25 min,热水浸提1 h,液料比25∶1(m L∶g),热水浸提温度91℃。在此条件下,火炬松松针多糖得率达1.867%,提取率达91.39%。通过测定松针多糖对苯基苦基肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)和2,2-联氮-二-(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)自由基(ABTS+)的清除能力评价其体外抗氧化能力。结果显示:火炬松松针多糖对自由基DPPH·、·OH和ABTS+都有较强清除能力,且都呈较好的量效关系,火炬松松针多糖具有较强的体外抗氧化能力。

甜叶菊毛状根的诱导培养及茉莉酸甲酯对其绿原酸类物质积累的影响

以发根农杆菌ACCC10060诱导甜叶菊毛状根,建立毛状根培养生产绿原酸类物质体系,研究茉莉酸甲酯对绿原酸类化合物积累的影响。经发根农杆菌ACCC10060侵染的甜叶菊叶片外植体,共培养14 d后产生毛状根。聚合酶链式反应检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rol B和rol C基因已成功整合到甜叶菊毛状根基因组中。MS液体培养基较B5、WPM更利于甜叶菊毛状根生长及绿原酸类物质的积累,培养35 d后,干质量增加约30倍,绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸最高含量分别为3.47、11.47、3.04 mg/g。毛状根在MS液体培养基中培养至第3周时分别添加15、45、100μmol/L的茉莉酸甲酯进行诱导,处理后第1、2、4、8天收获,毛状根的生长量和绿原酸类物质含量均有提高,其中以45μmol/L茉莉酸甲酯的促进作用最为显著,3种绿原酸类物质的总产量是对照组的2.68倍(P<0.01)。以上结果表明,甜叶菊毛状根培养可用于绿原酸类物质的生产,经茉莉酸甲酯处理可显著提高绿原酸类物质的产量。

红巧梅花色苷树脂静态纯化工艺研究

以红巧梅提取液为试验对象,通过考察树脂的静态吸附率和解吸率,从8种树脂中优选出DM-28为适合纯化红巧梅花色苷的树脂,并研究了DM-28纯化红巧梅花色苷的工艺参数。结果表明,DM-28静态纯化红巧梅花色苷的工艺参数为:在吸附温度为50℃,最适吸附p H 2.8,吸附时间6 h的条件下进行吸附,在40℃条件下以体积分数为90%p H 5.0乙醇溶液解吸效果最好。纯化后红巧梅花色苷色价为纯化前的4.84倍。

黑曲霉诱导子促进青钱柳细胞合成三萜的氧化应激机制

本文旨在研究黑曲霉诱导子(Aspergillus niger elicitor,ANE)促进青钱柳细胞合成三萜类化合物的氧化应激机制。通过研究抗氧化应激相关酶活性的变化和相关基因的表达量,从氧化应激层面诠释ANE的诱导作用机制。结果表明,在ANE诱导后10 h时,青钱柳细胞的三萜合成量开始升高,至60 h时达到最高值,三萜含量达36.46 mg/g,为对照组的3.36倍。在ANE刺激之下,超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化物酶(Peroxidase,POD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanin ammo-nialyase,PAL)、磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)五类酶的活性均显著升高(p <0.05),且先后出现了数个酶活力峰值。转录组测序结果表明,3个SOD、20个POD、1个CAT、3个PAL、3个PLC相关基因的表达量升高,其中3个POD、1个CAT、3个PAL相关基因的表达量显著上升,此外,细胞中三萜合成酶相关基因表达亦发生上调。由此可以推断,在ANE刺激下青钱柳细胞出现氧化应激,导致抗氧化酶相关基因表达量的升高,相应酶的活性因此上升,进而引起细胞发生防御性反应,最终促进了细胞内三萜的合成。本文从氧化应激层面探索ANE促进细胞合成三萜的作用机制,为植物细胞培养生产活性次级代谢产物提供了理论依据。

青钱柳鲨烯合成酶(CpSS)全长基因的克隆、分析与表达

为研究和调控青钱柳三萜代谢,克隆了青钱柳鲨烯合成酶(CpSS)全长基因,研究该基因的特征和蛋白结构,以及青钱柳悬浮培养细胞在黑曲霉诱导子作用下该基因的表达变化情况。本文以青钱柳悬浮细胞RNA为模板,采用RT-PCR和RACE技术克隆出全长为1 667 bp的CpSS基因cDNA序列,该序列包含一个1 245 bp的完整ORF,编码414个氨基酸;CpSS序列与胡桃鲨烯合成酶基因的相似度最高,相似度达到97%,与白桦、葡萄、大豆、甘草、可可5个物种的相似度都在85%以上。序列分析表明,CpSS蛋白属于不稳定亲水蛋白,具有典型的鲨烯合成酶保守区和结构域,存在于内质网膜中,由多个α螺旋组成空穴状结构,该结构与大多数植物鲨烯合成酶蛋白的空间结构相似。实时荧光半定量RT-PCR检测结果表明,在黑曲霉诱导子作用下,悬浮培养细胞CpSS基因表达量显著增加,在诱导后60 h时的表达量最高。本文可为深入研究青钱柳三萜代谢途径及真菌诱导子的诱导作用机制提供参考。

紫扁豆花色苷提取工艺及树脂初步纯化研究

通过p H示差法定量,研究紫扁豆花色苷的提取工艺。通过单因素和正交试验确定最佳提取工艺条件,结果表明,p H为3,提取乙醇质量分数为60%,料液比1∶12,温度70℃,提取时间60 min得到花色苷最大提取含量为0.733 1 mg/g。同时对紫扁豆花色苷树脂纯化进行初步研究。

大孔树脂纯化桃花总黄酮工艺及抗氧化性研究

研究了桃花总黄酮的纯化工艺及抗氧化活性。采用静态吸附-解吸和动态吸附-解吸的方法,以吸附率和解吸率为指标,从8种树脂中筛选出最佳树脂为DM-28;以总黄酮浓度为指标,优选出大孔树脂DM-28纯化桃花总黄酮的最佳工艺参数为:静态吸附:最佳温度为30℃,最适p H为4.0,吸附3.5 h,60%乙醇洗脱;动态吸附:上样浓度为0.72 mg/m L、上样流速为2 m L/min,60%乙醇以2 m L/min流速进行洗脱,在此优化条件下,纯化后的桃花总黄酮(58.39%)比纯化前提高6.84倍。此外,通过测定桃花总黄酮清除自由基的能力对其抗氧化活性进行了评价,结果表明:桃花总黄酮的抗氧化能力较强,对DPPH、ABTS+自由基的半抑制浓度(IC50)分别为13.47μg/m L、32.16μg/m L。

巨型先天性黑色素细胞痣人源性异种移植模型的建立方法探究

目的探究巨型先天性黑色素细胞痣(giant congenital melanocytic nevus,GCMN)人源性异种移植模型的建立方法。方法将GCMN患者的皮肤标本移植到2只重度联合免疫缺陷小鼠的背部,加压包扎4周后拆开,观察移植GCMN皮肤的存活情况及组织病理学特征。结果1号小鼠术后1周时死亡,可能与移植面积过大有关。2号小鼠长期存活且移植部位皮肤稳定存活至少28周,移植皮肤与小鼠正常皮肤交界处无瘢痕形成。移植GCMN部位苏木精-伊红染色可见真皮内有上皮样痣细胞及黑素颗粒;免疫组化示黑色素抗原、小眼畸形相关转录因子、S-100蛋白及性别决定区盒基因10均为阳性。结论采用该方法构建的GCMN人源性异种移植动物模型可维持GCMN组织学特征及重要分子表型,移植皮肤长期存活,可用于后续基础实验的开展,有利于对GCMN发病机制及潜在药物研发的进一步探究。

松针多糖提取工艺及稳定性研究

对松针多糖水提工艺及多糖在不同条件下的稳定性进行了研究。结果表明：松针多糖的最佳提取工艺为：提取温度100℃、提取时间3h、pH值6．0、料液比1：8，在此优化条件下松针多糖提取得率最高达2．5247％，提取级数为二级，重复性试验的相对标准偏差（RSD）为0．6213％（n=5）；松针多糖耐热性较好，易于氧化，不易被还原，在pH6．0～8．0、柠檬酸、Na＋、K＋、Mg2＋、Mn2＋、Ca2＋中的稳定性较好，在光照、强酸、强碱或体系含有Vc、Al3＋、Fe3＋、cu2＋、Zn2＋、Nr等情况下稳定性较差。

甜叶菊毛状根培养系统的建立及绿原酸类成分的诱导

本文利用发根农杆菌A4诱导甜叶菊毛状根再生,建立毛状根生产绿原酸类物质的培养体系,并研究茉莉酸甲酯和水杨酸对毛状根中绿原酸类物质积累的影响。结果表明,经发根农杆菌A4侵染的甜叶菊叶片外植体在共培养14 d后诱导出了毛状根;PCR检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒中rol B和rol C基因均已整合到毛状根中;毛状根在MS液体培养基中,培养到第14 d时分别加入不同浓度(50、100、200μmol/L)的水杨酸和茉莉酸甲酯进行诱导,处理第1、3、6 d后均抑制了毛状根的生长,但茉莉酸甲酯促进了毛状根中绿原酸类物质的积累,而水杨酸却抑制了毛状根中绿原酸类物质的积累。由此说明,发根农杆菌A4侵染甜叶菊可诱导出毛状根,该毛状根可用于绿原酸类物质的生产,茉莉酸甲酯可提高绿原酸类物质的含量。

复合活性多肽通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对皮肤鳞癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨复合活性多肽(compound active peptides,CAP)对皮肤鳞癌细胞A431增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法选用人皮肤鳞癌A431细胞为研究对象,采用细胞增殖检测法(CCK8)检测不同浓度的CAP(0、50、100、150、200和250μg/mL)分别作用12、24、36和48 h后对A431细胞增殖的影响;选择50、100和150μg/mL CAP作用24 h进行后续实验。采用集落形成实验检测不同浓度的CAP对A431细胞的增殖能力,细胞划痕实验和流式细胞术检测对A431细胞迁移和凋亡的影响,Western blot法检测对细胞凋亡及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,CAP显著抑制细胞增殖(P<0.05),且呈时间和浓度依赖性;CAP处理后A431细胞的克隆形成率显著降低,呈现剂量依赖性(P<0.05),且A431细胞的迁移能力随浓度增高而显著降低(P<0.05)。与对照组相比,经过CAP处理A431细胞24 h后,细胞凋亡率随浓度升高而增加,凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-PARP的表达量显著增加(P<0.05),Bcl-2和cyclin-D1蛋白表达量随浓度升高显著降低(P<0.05)。此外,与对照组相比,CAP显著下调PI3K、磷酸化p70-S6K、S6、mTOR和Akt蛋白的表达(P<0.05)。结论CAP可以抑制皮肤鳞癌A431细胞的增殖,并通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导A431细胞的凋亡。