黑曲霉变种RM48 α-半乳糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究

经硫酸铵沉淀、疏水柱层析和分子筛层析,从黑曲霉变种RM48(Aspergillus niger v.Tiegh RM48)固体发酵后的浸提液中分离纯化了α-半乳糖苷酶.SDS-PAGE分析表明,此酶蛋白的分子量约为108kDa.酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度是60℃,耐热温度为40℃;最适反应pH为4.5,在pH3.0～6.0之间保持90%以上的酶活性;在实验的金属离子范围内,所有金属离子对黑曲霉变种RM48α-半乳糖苷酶均有抑制作用,其中Cu2+和Fe2+抑制作用最为显著,Li2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+、Ca2+、Mg2+和Co2+对酶活性有轻微的抑制作用.在pH4.0和60℃反应条件下此酶的Km为7.37mmol·L-1,Vmax为5618IU·mg-1·min-1.成熟酶蛋白N端序列为DEKAYSPCYY,与已报道的α-半乳糖苷酶蛋白无同源性.

培养基组成及发酵条件对黑曲霉变种产α-半乳糖苷酶的影响

为获得高产α-半乳糖苷酶,通过单因素实验,研究黑曲霉变种Aspergillus nigerv.TieghCGMCC1182在固态发酵条件下产α-半乳糖苷酶的培养基组成和发酵条件,继而采用Ln18(37)正交试验设计,对影响黑曲霉A.nigerv.Tiegh CGMCC1182产α-半乳糖苷酶的7个主要因素进行研究,对影响产酶的重要因素进一步优化.结果表明,黑曲霉变种A.nigerv.Tiegh CGMCC1182产α-半乳糖苷酶的最适培养基组成为:麸皮∶豆粕=7∶3(W/W),在此基础上添加2.0%的棉子糖、2.5%的(NH4)2SO4和0.5%的MgSO4;产酶最适发酵条件为:培养温度30℃,培养基含水率55%,培养基装量为250 mL三角瓶中装入14 g培养基,接入10%(V/W)的孢子悬浮液(孢子浓度107个?mL-1),静置培养68 h获得最高α-半乳糖苷酶产量,酶活达308.5 U?g-1.

两种测定程序对饲用α-半乳糖苷酶活性检测结果的比较

根据α 半乳糖苷键物质及其结构组成,设计了两种饲用α 半乳糖苷酶活性的检测程序。结果表明,以棉子糖为底物的DNS法,因饲料中干扰因素较多,导致酶活性偏低。而以对硝基苯酚 α D 半乳糖吡喃糖苷底物的p NPG法,具有操作简便,灵敏度高,重现性好等特点。其测定条件为:反应系统pH4.0,反应温度40℃,反应时间10min,底物浓度5mmol/L。

CN-92植酸酶产生菌的诱变选育及产酶条件的研究

以无花果曲霉IFFI2227为出发菌株，通过NTGT和Co60复合诱变处理，获得5株产植酸酶活力比出发菌株高2．1～2．5倍的高产菌株。其中1株CN－92菌产酶性能稳定，研究了该菌株的最适产酶条件：培养温度30℃，培养基起始pH6．0培养时间72h。适宜于该菌株产植酸酶的优良固体培养基组成为：麸皮、豆饼粉、硫酸铵及少量无机磷，培养基含水率51％。葡萄糖、乳糖和MH4Cl、NH4NO3等不同程度地抑制植酸酶的合成，微量元素如Mn，Zn，Cu等对产酶无促进作用。

米曲霉ZW-06在固态基质上产高活性中性蛋白酶发酵条件研究

中性蛋白酶作为水产饲料用酶受到广泛的关注。为获得高产中性蛋白酶,研究了米曲霉ZW-06产中性蛋白酶的培养基组分和培养条件,在此研究基础上,采用Ln18(37)正交试验设计,对影响米曲霉ZW-06菌株产中性蛋白酶的7个重要因素进一步优化。结果表明,米曲霉Aspergillus oryzaZW-06产中性蛋白酶的最适培养基组成为:在麸皮∶豆粕粉为8∶2的基础培养基中,添加0.5%Na2CO3;产酶最适培养条件为:培养温度30℃,培养基含水率60%(W/W),装量26.7 g/L,接种量20%(V/W),静置培养48 h,将获得最高中性蛋白酶产量,酶活达23 738 U/g。研究结果为中性蛋白酶的工业化生产提供了技术参数。

在玉米--豆粕型日粮中添加α-半乳糖苷酶对生长猪生产性能的影响

试验研究了玉米—豆粕型日粮中添加α-半乳糖苷酶对生长猪生产性能的影响。选择128头平均体重为26kg左右的杜大长三元杂交仔猪,按体重和性别随机分成2个处理组,每处理4个重复,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂在基础日粮中添加0.15%含250U/g的α-半乳糖苷酶复合酶的日粮,进行为期66d的试验。结果表明,与对照组相比,玉米—豆粕型日粮中添加α-半乳糖苷酶的试验组,日增重提高9.59%,料重比降低9.03%,每千克增重饲料成本降低0.45元,经济效益提高8.06%。说明在玉米—豆粕型日粮中添加α-半乳糖苷酶可显著提高生长猪的生产性能。

酶制剂在乳猪及仔猪饲料中的应用效果试验

1.材料和方法 1.1 材料 1.1.1 酶制剂选用本所研制的饲用酸性蛋白酶和复合酶CA—Ⅱ。其中酸性蛋白酶中还含一定量的其他酶如a-淀粉酶等。复合酶CA—Ⅱ主要含β-葡聚糖酶和酸性蛋白酶,另外还含有纤维素酶、果胶酶。 1.1.2 试验猪选用丹英长白母猪(杭州大观山种猪场提供)

α-半乳糖苷酶产酶菌种的定向筛选及诱变选育

从土壤样品分离、实验室保藏菌种及引进菌种共200多个菌株中,经纸层析定向筛选,获得20株具有显著产α-半乳糖苷酶活性特性的菌株。进一步以R15#菌株为出发菌株,经60Co诱变处理,及紫外—亚硝基胍复合诱变,得到产α-半乳糖苷酶性能稳定、活力较高的变异菌株3个,其产酶活力达231 U/g以上,平均比出发菌株提高190.9%。其中RM48#菌株经连续传代7代,产酶性能未出现较大的变异,具有较好的遗传稳定性。该菌株经鉴定为黑曲霉变种(Aspergillus nigerv.Tiegh)。

酶技术在栽培食用菌废弃物二次利用中的研究

本研究运用酶工程技术,采用以纤维素酶为主的多酶系统强化降解经一定方法预处理后的栽培食用菌废弃物(简称菌渣),以提高其作为饲料原料的营养水平和对畜禽的适口性.结果表明,采用预处理——酶解工艺可使菌渣中粗纤维含量从28.13%降低到16.23%～21.20%;可溶性粗蛋白可从1.11%提高到3.4%～4.58%;可溶性还原糖从0.91%提高到1.27%～4.38%.蛋白氨基酸提高1.15%,总游离氨基酸提高近6倍,必需氨基酸提高近8倍.用该工艺制取的菌渣以20%的量替代饲料用粮,各项生产性能均优于常规饲料组.说明采用酶解法是进一步利用食用菌废弃物,开辟饲料资源的有效途径之一.

无花果曲霉植酸酶SY－03去植酸效果的研究

由无花果曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｉｃｕｕｍ）在小麦麸、豆饼组成的半固态基质上发酵产生的粗酶，经提取，乙醇沉淀及初步纯化后制取的植酸酶ＳＹ－０３，对某些谷物和豆科作物种子（饼粕）中植酸的降解作用。研究了影响植酸水解的因素，结果表明：该植酸酶对脱脂米糖（ＤＦＲＢ）的解磷去植酸效果，随每单位基质含植酸酶剂量的增加而提高，平均每单位植酸酶可从ＤＦＲＢ中解析２４００ｕｇ无机磷，对ＤＦＲＢ中植酸的最佳解析温度为５５－６０℃，最佳解析ｐＨ为３．０和５．０：在０－６ｈ内，其解磷去植酸效果，随着作用时间的延长而呈线性比例提高。利用植酸酶ＳＹ－０３处理ＤＦＲＢ、大豆粕、菜籽粕、玉米粉和小麦麸，可分别解除这些底物中４９．３５、４６．２５、３６．６２、４７．２７和４１．５７％的植酸，同时每克基质可分别多释放出２００３、１７５０、１６００、１２１４、和１３８８ｕｇ的无机磷。基质含有的内源植酸酶对其解磷去植酸效果有一定影响。

青贮饲料专用酶的研究

用作青贮的青绿秸秆富含纤维素、半纤维素等物质。在青贮草料中添加纤维素酶(FPA)、半纤维素酶、木聚糖酶等植物细胞崩解酶,不仅可有效地将纤维素等非淀粉多糖(NSP)分解为低聚糖、葡萄糖等物质供乳酸菌等细菌利用,而更重要的是随着植物细胞壁的崩解细胞内含物如淀粉、可溶性糖类(WSC)、蛋白质及油脂等一类物质的溢出,极大地提高了青贮料的营养价值。国外对这类酶制剂的研究已有较大的进展,如芬兰的Finnfeed公司成功研制出Glasszyme、Cornzyme等酶制剂用于青贮饲料。 我们根据青贮秸秆的青贮特点,通过对产酶菌种的诱变选育和发酵条件的优化,研制出一种含纤维素酶和木聚糖酶活力较高的酶制剂,经使用其效果达到国外同类产品水平。

酶制剂在乳猪及仔猪饲料中的应用效果

本试验应用饲用酸性蛋白酶和复合酶CA-Ⅱ制剂添加于乳猪及仔猪饲料,在基础日粮中添加0.1％的饲用酸性蛋白酶和复合酶CA-Ⅱ制剂,每头猪(7～60日龄)的日增重分别为333克和326克,比对照(不加酶)的309克分别提高7.77％和5.50％,料肉比分别为0.782:1和0.792:1,比对照组的0.819:1分别提高4.71％和3.41％;在53天的饲养期内,加酶两组每头猪盈利分别比对照组增加5.75元和3.75元。

复合酶CA-Ⅰ用作饲料添加剂的特性及应用效果的研究

本研究探讨了复合酶CA-I所含三种碳水化合物分解酶:纤维素酶、β-葡聚糖酶和果胶酶用于饲料添加剂的有关特性及其对饲料的降解效果。结果表明,三种酶的最适pH依次为5.0、4.0和3.0;最适温度依次为45、40和40℃。这些参数与动物体内生理条件极为相近。同时三种酶系能较好承受饲料造粒时高温处理,以及具有常温贮存的稳定性。在实验室条件下,模拟猪胃液对饲料的降解效果研究结果,该复合酶对饲料的复合糖化率比对照组提高97.63％,对饲料中各原料的粗纤维降解率达6.75到19 70％,对饲料中不溶物降解率比对照提高18.28％。表明复合酶CA-I可以作为一种比较理想的饲料添加剂。

CN-92植酸酶的酶学特性

ＡｓｐｅｒｇｉｌｕｓｆｉｃｕｕｍＣＮ９２植酸酶是经ＮＴＧ和Ｃｏ６０γ射线复合诱变发酵产生的菌株，用冷乙醇沉淀析酶而制得的植酸酶粗酶粉为实验样品，植酶钠（Ｐ３１６８，Ｓｉｇｍａ公司产）为底物，考察ＣＮ９２植酸酶的酶学特性，结果表明，该植酸酶的最适反应温度为５５℃，最适作用的ｐＨ值为５．５，反应初速度为１１μｇ／ｍｉｎＰｉ，米氏常数Ｋｍ为０．３４％。液态酶在５５℃处理２ｈ，酶存活率保持在８１％以上，固态酶在１０～３５℃下保存６个月，酶存活率为８８％。Ｍｎ２＋，Ｆｅ２＋，Ｃｏ２＋，Ｚｎ２＋，Ｃｕ２＋对此植酸酶有较强的抑制作用，而Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋，ＮａＮＯ３和ＥＤＴＡ等对其则无明显影响。

无花果曲霉Aspergillus ficuum CN-92在半固态基质上产植酸酶的研究

对无花果曲霉ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｉｃｕｕｍＣＮ－９２在几种常用农副产品基质的培养基上产植酸酶特性的研究表明，适宜于该菌株产植酸酶的优良培养基组成为：麸皮、豆饼粉、硫酸铵及少量无机磷。一些单糖、双糖（如葡萄糖、乳糖等）和无机氮（如ＮＨ４Ｃｌ、ＮＨ４ＮＯ３等）不同程度地抑制植酸酶的合成。一些微量元素如Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｍｇ等对产酶无促进作用。半固态基质的适宜含水率为５０％，适宜ｐＨ为６．０。在上述条件下，于３０℃培养７２～７６ｈ，达到产植酸酶高峰。

植酸酶及其应用前景

植酸酶及其应用前景浙江省农业科学院微生物研究所许尧兴，许少春植物饲料中的磷大部分存在于植酸及植酸盐中，难为单胃动物利用而随粪便排出，污染环境。而且植酸盐中的磷通过螯合作用还降低动物对锌、锰、铁、钙、钾等主要微量元素的利用率，以及通过与蛋白质结合成植酸...

饲用NSP分解酶体外评判体系的系统研究

本研究以DNS还原糖法为基础，探讨了酶促反应中几个主要因素如反应体系温度、pH、反应时间、底物种类和浓度以及酶样品的稀释度、反应体系加液量等对三种饲用NSP分解酶-木聚糖酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶活性测定结果的影响，结果表明：三种酶的酶促反应温度和反应时间以40℃和10min较为适宜；反应系统pH木聚糖酶和β-葡聚糖酶为5．0，而纤维素酶则为4．2较为合适。木聚糖酶和纤维素酶的测定底物及浓度分别为1％木聚糖（Sigma）、1％β-葡聚糖（β—glucan，frombarley）和1％羧甲基纤维素钠。

饲料中添加中性蛋白酶对青鱼生长、消化及鱼体组成的影响

用含中性蛋白酶8000U/g的酶制剂,制作酶制剂使用量分别为0、0.5‰、1‰、2‰和3‰的5种实验饲料,喂养平均初始重为(3.03±0.04)g的5组三重复的青鱼鱼种8周。实验在容积为80L的15只循环式水族箱中进行。实验水温为(25.0±0.5)℃。结果表明:实验饲料中酶制剂含量为0.5‰时,实验鱼的鱼体增重与摄食不含酶制剂饲料的实验组无显著差异(p>0.05),而当饲料中酶制剂含量提高至1‰时,鱼体增重出现显著提高(p<0.05)。但饲料中酶制剂含量从1‰进一步提高至2‰和3‰,则鱼体增重不再有显著变化(p>0.05);饲料中酶制剂含量为1‰、2‰和3‰实验组的摄食量显著高于饲料中酶制剂含量为0和0.5‰的实验组(p<0.05)。而饲料中酶制剂含量为1‰、2‰和3‰实验组的饲料系数显著低于饲料中酶制剂含量为0和0.5‰的实验组(p<0.05);青鱼饲料中使用酶制剂对饲料干物质的表观消化率、实验鱼的肠蛋白酶活性、肠和肝胰脏淀粉酶活性、全鱼营养组成、脏体指数、肝体指数无显著影响(p>0.05);饲料中0.5‰—3‰酶制剂含量时,实验鱼对饲料蛋白质的表观消化率均显著高于饲料中不含酶制剂的实验组(p<0.05)。青鱼鱼种肝胰脏蛋白酶活性随着饲料中酶制剂使用量从0增加0.5‰和1‰而呈逐渐升高的趋势,但饲料中酶制剂使用量继续增加则不再有显著变化。因此,在本实验条件下,饲料中使用1‰—3‰的中性蛋白酶制剂促进青鱼鱼种的生长和降低饲料系数。

低聚木糖的制备及其对益生菌体外增殖的作用

针对玉米芯微波消解-内切木聚糖酶水解制备低聚木糖的工艺,以低聚木糖的得率为主体评价指标,通过单因素实验对影响低聚木糖得率的微波消解过程和内切木聚糖酶水解过程的因素与水平进行研究,并考察获得的低聚木糖对益生菌的体外增殖作用.结果表明:玉米芯酶法制备低聚木糖的最佳工艺条件为微波处理压力1.6 MPa,微波处理时间5 min,内切木聚糖酶用量140 U·g-1,酶解时间6 h;在最适条件下,玉米芯酶解液中低聚木糖的得率为82.5%,质量浓度为11.02 g·L-1;低聚木糖对益生菌的体外增殖实验表明,低聚木糖添加量在0.2%和0.4%时,分别可以对乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌起到最好的增殖作用,分别达到311%和183%,添加量进一步提高反而会抑制这2种菌的生长.