临床级人脐带间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠神经功能的改善作用

背景:创伤性脑损伤是世界范围内发生病率最高、最严重的神经系统疾病之一,暂无有效治疗方法,有研究表明间充质干细胞对创伤性脑损伤有一定的修复作用。目的:观察临床级人脐带间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠神经功能的改善作用。方法:将45只雌性SD大鼠随机分为3组,分别为假手术组(n=15)、模型组(n=15)和干细胞组(n=15),除假手术组外,其余两组采用改良的Feeney自由落体方法建立创伤性脑损伤模型,造模24 h后,模型组脑定位注射20μL生理盐水,干细胞组注射20μL临床级人脐带间充质干细胞悬液,共1×10^(6)个细胞,细胞移植后1,3,7,14,21 d采用改良神经功能缺损评分评估大鼠的神经功能运动;移植后21 d,采用RT-qPCR检测Bcl-2/Bax mRNA比值,RT-qPCR及免疫荧光法检测胶质细胞标记物GFAP和IBA1的表达,ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素10水平,苏木精-伊红染色观察脑组织结构。结果与结论:①与模型组相比,干细胞组改良神经功能缺损评分明显降低,大鼠的运动功能明显改善;②与模型组相比,干细胞组脑组织Bcl-2/Bax mRNA比值显著升高,胶质细胞标记物GFAP和IBA1 mRNA的表达显著降低,血浆肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素10水平差异不显著;③苏木精-伊红染色观察干细胞组大鼠脑组织缺损、水肿和神经元凋亡等情况均有不同程度的改善;④结果表明,在创伤性脑损伤后移植临床级人脐带间充质干细胞可促进神经功能恢复,减少神经元细胞凋亡,抑制胶质细胞过度活化。

三维或二维培养间充质干细胞联合水凝胶治疗宫腔粘连大鼠的疗效比较

目的:比较三维培养人脐带间充质干细胞(3D-hUC-MSCs)或二维培养人脐带间充质干细胞(2D-hUC-MSCs)联合水凝胶应用于宫腔粘连(IUA)大鼠的疗效差异。方法:将32只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、2D治疗组和3D治疗组各8只。将2D-hUC-MSCs贴附在微载体制备成3D-hUC-MSCs。采用机械刮宫+脂多糖感染双重损伤法构建IUA大鼠,对IUA大鼠进行2D-hUC-MSCs或3D-hUC-MSCs联合水凝胶治疗。用HE染色检测子宫内膜腺体数目,Masson染色检测子宫内膜纤维化面积比,免疫组化法检测子宫内膜整合素αVβ3表达,通过合笼实验评价妊娠结局。结果:与模型对照组相比,2D治疗组和3D治疗组大鼠的子宫内膜腺体数明显增加、纤维化显著减少,且3D治疗组效果接近于正常对照组水平。在大鼠子宫内膜αVβ3表达和胎鼠数目方面,2D治疗组与模型对照组比较差异无统计学意义,而3D治疗组较模型对照组明显改善,且接近于正常对照组水平。结论:3D-hUC-MSCs联合水凝胶可有效改善IUA大鼠子宫内膜纤维化、子宫内膜容受性及妊娠结局,并且相比于2D-hUC-MSCs联合水凝胶有更好的改善趋势。

基于松材线虫全基因组序列的SSR标记开发

为了研究松材线虫在我国的群体遗传关系及传播路径,获得更为稳定的松材线虫分子标记,使用MISA软件对松材线虫全基因组10 432条DNA片段进行搜索,共获得95个gSSR位点。其中,二核苷酸重复出现频率最高,占全部SSR位点的66.3%。依据所有gSSR位点共设计出36对引物,以1份松材线虫DNA pooling(包含我国46个不同地理来源的松材线虫虫株DNA)为模板进行PCR,产物由QIAxcel全自动凝胶电泳分析系统检测,获得17对可能具有多态性的gSSR引物。进一步对这17对引物的PCR产物进行单克隆试验并测序,BioEdit软件拼接比对结果表明,其中9对确实具有多态性。

两种不同来源间充质干细胞的生物学特性比较

背景:间充质干细胞来源广泛,不同组织来源的间充质干细胞在生物学特性上可能存在差异。目的:比较脐带间充质干细胞和壁蜕膜间充质干细胞的生物学特性。方法:分离及体外培养脐带间充质干细胞和壁蜕膜间充质干细胞,绘制生长曲线,计算细胞倍增时间和克隆形成率,检测免疫表型、分化能力及分泌因子水平。结果与结论:(1)两种间充质干细胞均为梭形,漩涡状生长;(2)两种间充质干细胞的生长曲线均为S型;(3)第2代和第5代脐带间充质干细胞的倍增时间均短于同代数的壁蜕膜间充质干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);(4)第2代和第5代脐带间充质干细胞的克隆形成率高于同代数的壁蜕膜间充质干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);(5)两种间充质干细胞的表面标记CD73、CD90以及CD105的阳性率均在95%以上,CD34和CD45的阳性率均在1%以下;(6)两种间充质干细胞均可诱导分化为成骨细胞、成脂细胞;(7)脐带间充质干细胞分泌的表皮生长因子水平显著高于壁蜕膜间充质干细胞(P<0.05);脐带间充质干细胞分泌血管内皮生长因子和干细胞生长因子水平显著低于壁蜕膜间充质干细胞(P<0.05);(8)结果提示,两种间充质干细胞具有相似的功能,但脐带组织可能是一个更有应用前景的干细胞来源。