布鲁氏菌OMP25与OMP31蛋白的表达及其间接ELISA诊断试剂盒研制

目的为建立布鲁氏杆菌间接ELISA检测方法。方法本研究根据GenBank中已登录猪种布鲁氏菌S2株全基因组序列,分别针对omp25和omp31设计一对引物,分别扩增并回收573 bp与783 bp目的基因片段,将其分别克隆入pET-28a原核表达载体中,构建重组质粒pET-OMP25与pET-OMP31,进行酶切鉴定与基因序列测定后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导表达,OMP25与OMP31蛋白主要以包涵体形式存在;将目的蛋白纯化,应用Western blot进行蛋白活性的检测。结果纯化的目的蛋白具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为包被抗原,在确定了OMP25与OMP31蛋白最佳配比为4∶1、抗原最佳包被浓度为10μg/mL、血清的最佳稀释倍数为1∶50倍稀释、临界值为0.314的基础上,建立羊布鲁氏菌病抗体间接ELISA诊断方法并组装成诊断试剂盒,并将试剂盒进行了特异性、敏感性、重复性、符合率试验、血清交叉反应性等检测。结论研制的羊布鲁氏菌病抗体ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,可重复性,可应用于临床样本检测。

羊布鲁氏菌病胶体金抗体检测方法的建立

为了建立羊布鲁氏菌胶体金检测方法,本试验在对猪种布鲁氏菌S2株外膜蛋白OMP25表达纯化的基础上,对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上,制备布鲁氏菌抗体检测胶体金免疫层析试纸条。结果表明,SPA蛋白标记胶体金溶液的pH为5.6;金标垫上SPA标记物的浓度为7.8μg/mL;检测线包被条件为OMP25蛋白的浓度为1.20 mg/mL,点膜仪参数为Speed 40 mm/sec,1.0μL/cm;质控线包被条件为羊IgG的浓度为1.60 mg/mL,点膜仪参数为Speed 40 mm/sec,1.0μL/cm;待检血清样品的稀释倍数为20倍;特异性试验表明,该试纸条对羊布鲁氏菌病阳性血清具有高度特异性,与大肠杆菌等阳性血清无交叉反应;灵敏度检测结果与ELISA相当;试纸条在4℃保存9个月,室温6个月,其敏感性和特异性不发生改变;对临床采集的320份血清样品进行检测,结果与ELISA试剂盒符合率为95.9%,敏感性为95.8%,特异性为97.0%。表明本试验建立的布鲁氏菌病抗体免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合于羊布鲁氏菌病抗体的现场检测。

一例犬膀胱结石的诊疗

在犬泌尿系统疾病中，尿石症是常见的一种疾病，是由尿路中形成的无机盐或有机盐类结晶物刺激尿路黏膜，而引起尿血、尿淋漓，尿路阻塞、发炎。按结石所在位置有肾结石、输尿管结石、膀胱结石以及尿道结石，临床中以膀胱结石多为常见。笔者将临床中一例犬膀胱结石病例的诊断与治疗介绍如下．和大家共同讨论交流。

手术治疗犬膀胱结石

尿石症是常见的一种泌尿系统疾病，是由尿液中无机盐或有机盐类形成的结晶物体，尿结石刺激尿路黏膜引起尿血、发炎，尿结石阻塞尿路而致尿淋漓，甚至尿路阻塞。按结石所在位置有肾结石、输尿管结石、膀胱结石以及尿道结石，临床中以膀胱结石多为常见。笔者将临床中一例犬膀胱结石的诊断与治疗作一总结。

规模猪场非洲猪瘟监测净化技术的研究与应用

本课题组通过对非洲猪瘟采样方法、兽医实验室布局进行优化,对检测仪器、检测试剂和检测方法进行筛选比对,探索适合日照市东港区的非洲猪瘟规模场监测净化方法。并将本方法应用于日照原种猪场、五莲新好农牧有限公司(新希望集团子公司)、莒县双胞胎畜牧有限公司等规模场,成效显著。

禽白血病ELISA试剂盒的筛选技术研究与应用

为筛选出合适的国产禽白血病ELISA试剂,对86份已知样品使用2种国产试剂和进口爱德士公司生产的禽白血病p27抗原ELISA试剂开展检测,比较2种国产试剂与进口爱德士公司试剂的符合率和Kappa值。2种国产试剂与爱德士公司试剂的符合率均在91%以上,Kappa值均大于0.61。结果表明,2种国产ELISA试剂适合于禽白血病的净化检测。将筛选试剂应用于辖区种禽场流行病学调查,掌握了辖区禽白血病的流行状况,为净化禽白血病提供重要的技术支撑。本文为禽白血病检测试剂的选择应用提供了参考。

乳化维生素ADE对蛋鸡生产性能和血清生化指标的影响

选用600只260日龄的健康海蓝褐蛋鸡,随机分为4组,每组设3个重复,每个重复50只鸡。试验B,C,D组分别饲喂在对照组的基础日粮中添加0.02%,0.04%和0.06%乳化维生素ADE的日粮。研究乳化维生素ADE对蛋鸡生产性能及血清指标的影响。结果表明,在添加剂量范围内,试验组产蛋率、平均产蛋量显著提高(P<0.05),破蛋率降低显著,平均蛋重与对照组相比差异不显著(P>0.05);血清总胆固醇显著降低,血清钙、磷浓度显著增高,免疫球蛋白有随其添加量增加而提高趋势。其中以日粮中添加0.04%的乳化维生素ADE改善蛋鸡生产性能效果较好。

2019-2021年日照市种猪场主要疫病净化监测

为了解日照市种猪场净化效果,2019-2021年日照市动物动物疫病预防控制中心对4个种猪场采集扁桃体和抗凝血样品进行非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)检测,采集血清进行CSFV、PRRSV、PRV免疫抗体检测。监测结果显示,2019-2021年4个种猪场均未检测到ASFV、CSFV核酸阳性,只有1个猪场在2020年检测到PRRSV核酸阳性。PRV、PCV、PPV病原阳性率整体呈下降趋势,但污染面仍较广,全部猪场均检测到PCV、PPV核酸阳性,感染较严重。CSFV、PRRSV、PRV免疫抗体均超过了国家规定的70%的最低标准。结果表明,这4个种猪场ASF、CSF、PRRS净化效果较好,但PRV、PCV、PPV仍感染严重,需通过免疫、监测、生物安全控制等综合措施,进一步加强控制与净化。

肉鸡气囊炎的病因分析与预防措施

随着养殖业的高度密集化,肉鸡的养殖变得越来越难,呼吸道疾病防不胜防。肉鸡出栏快,饲养周期短,其饲养环境大多拥挤潮湿,且免疫、换料、转群等应激因素频繁,从而极易发生多种呼吸道疾病,气囊炎就是其中棘手的疾病之一。

2017—2021年日照市规模鸡场鸡白痢净化监测情况分析

为了解山东省日照市鸡白痢的流行状况,更好地开展鸡白痢净化工作,2017—2021年日照市动物疫病预防中心采用流行病学抽样方式,对20个养鸡场开展鸡白痢净化监测。结果显示,日照市鸡白痢群体阳性率和个体阳性率总体呈下降趋势,但部分种鸡场和商品场阳性率仍较高,需进一步加大监测净化力度。

蛋鸡不同阶段疾病的防治

蛋鸡的养殖在我区禽类养殖过程中占据非常重要的地位，针对蛋鸡生长的不同阶段，其管理方式和疫病防治也有所差异，笔者在此简要分析引起蛋鸡疫病的主要因素，从蛋鸡生长的不同阶段出发来讨论易发生的疫病，并且对蛋鸡的疫病防治提出针对性方案。

促进羊运动功能的一种驱赶装置设计

为了提高羊肉的质量以满足人们的需求,针对羊运动量少、人工驱赶羊运动成本高和现有的驱赶设备赶羊效果不佳的现状,本文从设计原理、装置结构、工作流程3个方面介绍了一种促进羊尤其是种羊运动的驱赶装置,能有效增加羊的运动量,提高羊肉品质。

新型养鲍网笼的结构及实用效果

综合现有养鲍器材的优缺点及养殖工人在海上作业的习惯,采用目前扇贝养殖的物资而设计一种新型养鲍网笼。新型养鲍网笼在结构上的特点是:(1)采用具有鲍活动孔的塑料盘将网笼分隔成饵料区及鲍栖息区两个部分,改变了饵料与鲍在同一部位的格局;(2)采用顶端封口,比侧面缝合或拉链式封口更经济耐用。

日照市东港区布鲁氏菌病区域净化工作进展及建议

为加快牛羊布鲁氏菌病净化步伐,促进畜牧业健康发展,保障公共卫生安全,山东省日照市东港区加强畜牧兽医体制、动物防疫、动物卫生监督、动物疫情监测、动物防疫屏障、法律法规体六大基础体系建设,制定了科学的净化实施方案,采取监测净化、检疫监管、淘汰扑杀等综合措施,开展布鲁氏菌病区域净化,取得了一定成效。下一步要继续务实兽医基础体系建设,研究适合科学有效的净化技术,持续开展“检测-扑杀”,直至达到布病全区无疫。

强化企业屠宰安全主体责任保障肉品质量安全

近年来,为保障畜产品质量安全,规范生猪屠宰监督检查行为,畜牧检疫部门加强畜禽屠宰行业管理、屠宰监管及猪肉市场经营秩序整顿为工作重点,狠抓企业规范化管理,强化企业主体责任,夯实部门监管职责,保障了肉品质量安全。

争创绿色发展示范区 实现畜牧业新腾飞

为贯彻落实中央关于生态文明建设的总体部署,树立畜牧业绿色发展理念,推动畜牧业转型升级,农业部在2016年4月部署启动畜牧业绿色发展示范县创建活动。山东省已启动畜牧业绿色发展示范县创建活动,首批共创建4个国家级、16个省级示范县。

猪流行性腹泻病毒S1蛋白B细胞表位原核表达及间接ELISA方法的建立

应用DNAStar软件在猪流行性腹泻病毒S1蛋白70~280位氨基酸序列间预测出1个优势B细胞抗原表位,氨基酸序列为IARLRICQFP,命名为PEP3。借助基因工程技术成功对PEP3进行融合表达,经动物试验、Western blot和间接免疫荧光试验均表明,PEP3蛋白具有良好的抗原性。基于PEP3蛋白建立的ELISA检测方法,与用N蛋白建立的检测方法的符合率为95.94%;该方法具有较高的敏感性和良好的特异性,批内和批间变异系数分别为1.68%~4.65%和4.21%~9.32%。研究表明,本试验建立的基于PEP3蛋白的ELISA检测方法特异性强、敏感性好、重复性高,可以用于临床样本的检测,丰富了现有的猪流行性腹泻病的诊断防控技术。

仔猪水肿病的诊断和综合防治

2011年3月初,日照市某个体养猪场,仔猪断奶后1周左右突然发病,运动共济失调,惊厥,头部特别是眼睑水肿,局部或全身麻痹。根据发病情况、临床症状、剖检变化、实验室细菌学检查,确诊为仔猪水肿病。现将诊断与防治情况总结如下。

山羊痘病毒P32基因的截短表达及间接ELISA方法的建立和应用

为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,通过PCR技术扩增了P32蛋白优势抗原区(2-141AA)基因序列,将其连接至原核表达载体pET-28a(+)上,转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和抗原反应性。以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件建立了快速检测GTPV抗体的间接ELISA方法,该方法具有良好的特异性、敏感性与可重复性,为GTPV的免疫抗体检测及流行病学调查提供了一种血清学诊断方法。