枯草杆菌及大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶的酶学性质研究

对枯草杆菌异柠檬酸脱氢酶(BsIDH)、大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶(EcIDH)和大肠杆菌异柠檬酸脱氢酶的突变体酶(EmIDH)进行了纯化和酶学性质鉴定。BsIDH和EcIDH对辅酶NADP^+的特异性与NAD^+相比,分别是NAD^+的1 330倍和3 890倍。而EmIDH对NAD^+的特异性与NADP^+相比,是NADP^+的122倍。因此,BsIDH和EcIDH是NADP^+依赖性异柠檬酸脱氢酶,而EmIDH的辅酶特异性已转换为NAD^+依赖性。EcIDH、BsIDH和EmIDH对底物异柠檬酸的K_m值分别为67.4 μmol/L、60.6μmol/L和105.6μmol/L。BsIDH和EcIDH的最适反应pH分别为8.2和8.0,EmIDH的最适反应pH为7.0。BsIDH和EmIDH的最适反应温度是45℃,EcIDH的最适温度为43℃。三种IDH的活性依赖于不同的二价金属离子的存在,Mn^(2+)、Mg^(2+)存在时酶活性最强,Cu^(2+)、Ca^(2+)、Zn^(2+)和Ni^(2+)强烈抑制酶的活性。系统的酶学性质研究为深入认识IDH的催化与调节机制提供了更多依据。