基于“五原则”的经典名方玉女煎质量标志物辨析

玉女煎是治疗胃热阴虚所致慢性牙周炎的经典名方,化学成分主要包括环烯醚萜苷类、甾体皂苷类、双苯吡喃类、异黄酮类、糖类、生物碱、无机盐等成分。文章根据中药质量标志物(Q-marker)的研究方法预测玉女煎的质量标志物。在此基础上,根据成分传递与溯源性筛选从药材传递到方剂的成分,根据特有性筛选方剂专属性成分,根据可测性评测指标成分的可测性,将成分重要性按配伍规律排序,再对玉女煎药效成分进行分析,明确有效性评价指标。基于“五原则”预测发现芒果苷、知母皂苷BⅡ、β-蜕皮甾酮、鲁斯可皂苷元、地黄苷D、梓醇可作为玉女煎的质量标志物,为相关产品研发和质量评价体系提供参考。

一测多评法同时测定薏苡仁油中4种甘油三酯类抗肿瘤成分的含量

目的:建立同时测定薏苡仁油中4种甘油三酯类抗肿瘤成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)。色谱柱为Inertsil ODS-3 C_(18),流动相为乙腈-异丙醇(57∶43,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL;蒸发光散射检测器漂移管温度为70℃,气体流速为2 L/min。以甘油三油酸酯为内标,分别计算其与甘油三亚油酸酯、1,2-亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯的相对校正因子(RCF),通过RCF计算薏苡仁油中上述3种成分的含量,同时采用外标法测定薏苡仁油中这4种成分的含量,比较一测多评法和外标法的含量测定结果。结果:甘油三亚油酸酯、1,2-亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、甘油三油酸酯进样量检测线性范围分别为0.15～4.50、0.15～4.50、0.35～10.50、0.35～10.50μg(r≥0.999 5);定量限分别为0.13、0.06、0.07、0.12μg,检测限分别为0.04、0.02、0.02、0.03μg;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%(n=6);加样回收率为95.43%～102.67%(RSD<2.0%,n=6)。甘油三亚油酸酯、1,2-亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯的平均RCF分别为0.31、0.88、1.21。在不同试验条件下,RCF重现性良好。一测多评法和外标法的含量测定结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该方法操作简单快捷、结果准确可靠,可用于薏苡仁油中甘油三亚油酸酯、1,2-亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、甘油三油酸酯4种抗肿瘤成分含量的同时测定。

淫羊藿-仙茅药对中6种成分的含量测定方法及配伍影响研究

目的:以淫羊藿-仙茅药对为研究对象,分析淫羊藿和仙茅配伍前后的水提物、醇提物中化学成分及含量的变化。方法:采用HPLC-DAD法,XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%醋酸溶液(B),梯度洗脱。结果:药对配伍后,水提物中苔黑酚葡萄糖苷含量不变,朝藿定A和仙茅苷含量稍有降低,朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的含量提高;醇提物中苔黑酚葡萄糖苷、朝藿定A、朝藿定B的含量降低,仙茅苷、朝藿定C、淫羊藿苷的含量均有提高;药对水提物的干浸膏和粗多糖质量均有提高。结论:该方法简便快速,结果准确可靠,可为淫羊藿-仙茅的配伍研究及临床应用提供科学依据。

基于DPPH-HPLC的食凉茶抗氧化组分的快速筛选及分析

建立DPPH-HPLC方法快速筛选、鉴别和测定食凉茶中抗氧化活性成分。食凉茶提取物与80μg/mL DPPH自由基室温避光孵育30min后,13000r/min,离心10min,取上清进行高效液相色谱分析,以峰强度减少大于80%的成分,认定为潜在的抗氧化活性物质,结合对照品对照,确定抗氧化活性成分为东莨菪内酯、槲皮素、山奈酚。建立HPLC法同时测定3个抗氧化活性成分的含量,并评价其抗氧化能力。利用DPPH-HPLC方法可快速、灵敏、准确筛选食凉茶中的抗氧化活性成分,并对其进行测定和评价,为开发利用食凉茶中抗氧化活性成分提供科学依据。

地稔水提液抗氧化活性的紫外光谱快速预测方法

目的建立基于紫外光谱和偏最小二乘回归算法的地稔水提液抗氧化活性快速预测方法。方法采用1,1-二苯基-2-苦腈基(DPPH)自由基清除活性表征地稔水提液的抗氧化活性,采集190~600 nm的紫外光谱,通过优化光谱波长范围和预处理方法,建立抗氧化活性与紫外光谱的最优偏最小二乘回归模型。采用Visual Basic开发应用软件,将最优模型嵌套入软件,为快速分析待测地稔水提液的抗氧化活性提供工具。结果紫外光谱的最优波长范围为200~290 nm,将光谱经标准化处理后建立抗氧化活性的最优偏最小二乘回归模型,校正集相关系数、拟合均方根误差、交叉验证均方根误差分别为0.887、2.20%、2.17%,验证集相关系数、预测均方根误差分别为0.868、2.08%,平均预测回收率为(100.1±2.3)%。基于所开发的软件,采集待测地稔水提液的紫外光谱后,通过软件中的预测功能可在2 s内得到抗氧化活性的快速预测结果。结论本方法可为地稔水提液抗氧化活性的快速预测提供依据。

成骨细胞膜色谱/超高效液相色谱-飞行时间质谱法快速筛选六味地黄汤抗骨质疏松活性成分

采用成骨细胞建立了细胞膜色谱/超高效液相色谱-飞行时间质谱(CMC/UPLC-TOF/MS)的分析方法。该法可快速筛选中药方剂六味地黄汤中潜在的抗骨质疏松活性成分,通过细胞试验和斑马鱼骨质疏松模型试验验证了筛选结果梓醇的体内外药效作用。以六味地黄汤水提物(90 g/L)为样品,通过CMC/UPLC-TOF/MS分析,快速鉴别细胞膜色谱柱保留成分群,高选择性获取六味地黄汤中16种潜在活性成分。该文以前沿色谱法分析梓醇、丹皮酚、齐墩果酸与细胞膜色谱固定相的亲和强度,选择亲和强度和含量较高的梓醇进行体内外药效验证,发现梓醇在对小鼠成骨细胞有显著促生长作用,能提高骨质疏松斑马鱼头部骨矿化面积。CMC/UPLC-TOF/MS筛选方法能在复杂中药方剂中快速得到抗骨质疏松活性成分,具有操作简便、快速、高效灵敏的优势。

淫羊藿-仙茅药对有效成分在骨髓炎兔体内的药动学研究

骨髓炎具有病程长、反复发作、易致残等特点,是骨科复杂病种。淫羊藿-仙茅是常用治疗骨病的温补肾阳药对,能促进成骨细胞生长,修复骨缺损。本研究采用骨髓炎兔模型,研究淫羊藿和仙茅配伍前后有效成分的体内药动学行为变化,探讨药对配伍协同增效的机制。

UPLC-MS/MS法分析大鼠血清中二仙汤5种抗骨质疏松成分含量

建立了超高效液相色谱-电喷雾串联三重四级杆质谱法,对大鼠血清中二仙汤抗骨质疏松成分(仙茅苷、淫羊藿苷、小檗碱、阿魏酸、知母皂苷BII)的含量进行了同时测定。通过大鼠灌胃给药20g/kg二仙汤水提物,得到含药血清,经乙腈沉淀蛋白,浓缩定容后进行色谱分析,外标法定量。该方法对5种抗骨质疏松有效成分的检出限为在0.5～5.0ng/mL,加标平均回收率为90%以上,采用该方法分析含药血清中有效成分含量进行测定,发现含量在0.19～0.80mg/L范围内。

麸炒炮制对薏苡仁中甘油三油酸酯含量的影响

目的:通过比较麸炒炮制前后薏苡仁中甘油三油酸酯的含量变化,研究麸炒炮制对薏苡仁化学成分的影响。方法:采用不同麸炒辅料炒制薏苡仁炮制品;采用HPLC-ELSD法测定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量。色谱参数:资生堂Capcell Pak C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;流动相乙腈-二氯甲烷=60:40;柱温30℃;流速0.5ml/min;蒸发光散射检测器参数:飘移管温度70℃,载气流速2.0L/min。结果:同一批次薏苡仁的不同麸炒炮制品中甘油三油酸酯含量都有一定程度的增加,其中1/3蜜炙麸皮炒制品含量增加最高。结论:麸炒炮制可增加薏苡仁中甘油三油酸酯的含量。

不同炮制方法对知母饮片化学成分的影响

目的:建立HPLC-UV-ELSD方法同时测定七种知母炮制品(净知母、清炒知母、麸炒知母、酒知母、醋知母、盐知母、知母炭)中芒果苷、知母皂苷BⅡ含量,探讨不同炮制方法对知母化学成分和浸出物的影响。方法:采用InertsilODS-3C18色谱柱(4.6×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%醋酸水溶液,柱温30℃,流速1.0mL/min,检测波长258nm,ELSD气体流速1.6mL/min,漂移管温度80℃,进样量20μL。结果:芒果苷的含量范围为0.35%~1.90%,含量高低依次为醋知母>酒知母>麸炒知母>净知母>盐知母>清炒知母>知母>知母炭;知母皂苷BⅡ的含量范围为2.19%~3.55%,含量依次为净知母>酒知母>醋知母=盐知母>清炒知母=麸炒知母>知母>知母炭;浸出物的含量范围为45.25%~58.72%,含量依次为酒知母>醋知母>盐知母>清炒知母>净知母>知母>知母炭>麸炒知母。结论:知母经炮制后,各类含量均发生了不同程度的改变,表明不同炮制方法对其化学成分的含量影响较大。

知母皂苷元固体分散体颗粒的制备及溶出度研究

目的:采用固体分散技术提高知母皂苷元颗粒的体外溶出度。方法:以聚维酮K30(PVP-K30)为载体,采用溶剂法制备知母皂苷元固体分散体,分别采用流化床一步制粒与高速搅拌湿法制粒,考察不同载药量、不同工艺对固体分散体溶出曲线度的影响。结果:以流化床一步制粒制备的固体分散体颗粒(知母皂苷元∶PVP-K30=1∶9)为载体,能够显著提高知母皂苷元的体外溶出度,溶出度可达80%以上。结论:以PVP-K30为载体的固体分散体颗粒可提高知母皂苷元的溶解度,流化床一步制粒法制备知母皂苷元固体分散颗粒达到设计要求,且制法简便可行。

知母黄柏药对治疗糖尿病骨质疏松症的药效物质和作用机制研究进展

糖尿病骨质疏松症是由长期高血糖造成的全身代谢性骨病,已成为糖尿病的主要并发症之一,具有骨量减少、骨微结构破坏、骨脆性增加等特点。知母黄柏药对是一个经典中药配伍组合,在多数抗糖尿病骨质疏松症方剂中都有体现。现代药理研究表明,药对促进骨形成和抑制骨吸收的药效作用与Nrf2、MAPK、Wnt、RANK/RANKL信号通路及细胞自噬等密切相关。药对配伍能改变药效物质的溶出度和药动学,且药效物质有协同增效的作用。本文总结了知母黄柏药对的药效物质和抗糖尿病骨质疏松症作用机制,为该药对的进一步研究和开发提供参考。

生物亲和色谱法及在中药药效物质研究中的应用

生物亲和色谱是指利用分析物与色谱固定相的生物亲和结合特点,鉴别出特定活性化合物的一种色谱方法,具有高灵敏度和高选择性等特点。本文主要介绍了免疫亲和色谱、凝集素亲和色谱、细胞膜色谱以及固定化金属亲和色谱的选择原理,重点介绍不同亲和色谱柱的制备方法及在中药药效物质研究中的应用,并就其应用前景做了展望,为进一步研究生物亲和色谱和中药药效物质基础提供了参考。

白术挥发油GC-MS指纹图谱与抗氧化活性的谱效关系研究

目的研究白术挥发油指纹图谱与抗氧化活性的谱效关系,筛选主要抗氧化活性成分。方法采用GC-MS测定不同产地的15批白术饮片挥发油指纹图谱,通过清除1,1-二苯基-2-苦腈基(DPPH)和Fe^3+还原/抗氧化能力法测定白术挥发油的抗氧化能力,运用偏最小二乘回归法进行数据分析,研究白术挥发油指纹图谱和抗氧化活性的相关性,并筛选活性色谱峰。结果 28个匹配指纹峰中,对挥发油清除DPPH自由基活性贡献度最大的前5个峰依次为:峰11>峰25>峰2>峰4>峰24;对挥发油还原Fe^3+能力贡献度最大的前5个峰依次为:峰11>峰8>峰14>峰19>峰26。其中峰11的峰面积与挥发油清除DPPH自由基能力和还原Fe^3+能力均呈正相关。通过与对照品比对确定峰11为苍术酮,并具有显著的抗氧化活性。结论苍术酮不仅是白术挥发油的主要成分,还是主要的抗氧化活性物质。

基于紫外光谱和偏最小二乘回归算法的畲药地稔中浸出物和6种活性成分快速预测方法

目的建立基于紫外光谱的畲药地稔中浸出物、没食子酸、阿魏酸、芦丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚的快速分析方法。方法测定地稔水提液中的浸出物和6种化合物浓度,采集紫外光谱。采用SIMCA-P+软件,分别建立浸出物、6种化合物浓度与紫外光谱的偏最小二乘回归模型。采用Visual Basic开发应用软件,将所建模型嵌套入软件,为同时快速分析待测溶液中浸出物和6种化合物浓度提供工具。结果验证集浸出物和6种化合物浓度的预测均方根误差分别为39.1,0.263,19.0,93.8,0.894,0.593,0.896 ng·mL^-1,预测值和真实值的相关系数均>0.9,并通过软件在10 s内得到了浸出物和6种化合物浓度的预测结果。结论本方法可为地稔的快速质量评价提供依据。

地稔水提液中6种活性成分含量的近红外光谱快速预测方法研究

目的研究基于近红外光谱的地稔水提液中6种活性成分含量的快速预测方法。方法采用HPLC测定地稔水提液中没食子酸、阿魏酸、芦丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚的含量;采集4000~10000 cm^(-1)的近红外光谱;分别优化光谱预处理方法和波数范围,建立6种活性成分含量与近红外光谱的偏最小二乘回归模型。采用Visual Basic开发应用软件,将所建模型嵌套入软件,为后续待测溶液中6种活性成分含量的快速预测提供工具。结果基于所开发的应用软件,采集待测溶液的近红外光谱后点击软件中的“预测”按钮,可在20 s内自动计算得到6种活性成分含量的预测结果。验证集中6种活性成分近红外光谱预测含量和HPLC测定含量的相关系数分别为0.966,0.983,0.850,0.946,0.977和0.979,预测均方根误差分别为9.23,0.496,4.07,0.0596,0.0234,0.0399μg·mL^(−1)。结论近红外光谱结合偏最小二乘回归算法可用于准确、快速分析地稔水提液中没食子酸、阿魏酸、芦丁、槲皮素、木犀草素、山奈酚的含量,可为地稔的快速质量评价提供依据。

基于近红外光谱的地稔抗氧化活性快速预测方法研究

目的:开发基于近红外光谱的地稔抗氧化活性快速预测方法。方法:采用1,1-二苯基-2-苦腈基(DPPH)法测定地稔水提液的抗氧化活性;采集10000~4000 cm^-1的近红外光谱;优化光谱预处理方法和波数范围,建立抗氧化活性与近红外光谱的偏最小二乘回归模型;采用Visual Basic开发应用软件,将模型的预测公式嵌套入软件,为后续待测溶液抗氧化活性的快速分析提供工具。结果:基于所开发的应用软件,采集待测溶液的近红外光谱并点击"预测"后,可在5 s内得到抗氧化活性的预测结果。抗氧化活性的近红外光谱预测值和DPPH测定值之间有良好的线性关系,校正相关系数为0.874,校正相对误差为2.09%;验证相关系数为0.844,预测相对误差为2.18%。结论:本方法可为地稔的快速质量评价提供依据。

基于HPLC指纹图谱聚类分析和主成分分析的麸炒薏苡仁饮片质量评价方法

目的:建立基于聚类分析和主成分分析的麸炒薏苡仁高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)指纹图谱,对麸炒薏苡仁饮片进行等级划分。方法:采用HPLC-ELSD法测定15批不同批次麸炒薏苡仁指纹图谱,从相似度、聚类以及主成分等方面对其进行分析,并用碎瓣度和醇溶性浸出物含量等外观和内在指标,进一步对等级划分进行验证。结果:麸炒薏苡仁指纹图谱中有7个共有峰,并对其进行指认,15批麸炒薏苡仁相似度达到0.831~0.952。通过聚类分析和主成分分析,可将15批麸炒薏苡仁样品分为3个等级:一等、二等和三等,即从化学成分和外观上表明其相似性和差异性。外观和内在指标水平与指纹图谱等级划分结果一致。结论:以指纹图谱数据为基础,经外观和内在指标验证,进行聚类分析和主成分分析,能够实现麸炒薏苡仁的等级划分,为中药饮片的质量评价提供新思路。

基于HPLC多波长融合指纹图谱及谱效关系的熟地黄活性成分研究

目的建立熟地黄HPLC多波长融合指纹图谱并筛选抗糖尿病骨质疏松的活性成分。方法采用HPLC建立10批熟地黄多波长(203,210,254,334 nm)融合指纹图谱;通过糖尿病骨质疏松大鼠模型药效评价,运用偏最小二乘回归法进行谱效分析,得到主要活性成分并以高糖成骨细胞模型验证其药效,并考察熟地黄的体内抗糖尿病骨质疏松作用。结果10批熟地黄融合指纹图谱共确定26个共有峰,鉴定出的17个色谱峰与骨形成指标(血清碱性磷酸酶活性)呈正相关,其中峰8(梓醇)和峰12(地黄苷D)的标准回归系数和VIP值最显著,二者均能提高成骨细胞增殖活性和细胞碱性磷酸酶水平。结论梓醇和地黄苷D具有显著抗糖尿病骨质疏松作用,为熟地黄主要活性成分。多波长融合指纹图谱结合谱效关系可作为活性成分筛选的有效策略。

麦冬提取物治疗2型糖尿病小鼠的血清代谢组学研究

目的:采用代谢组学方法研究麦冬对2型糖尿病(T2DM)小鼠内源性代谢物的影响。方法:腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM小鼠模型。连续4周灌胃给予麦冬水提物后,检测血清中糖尿病相关指标,且以超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-Q/TOF-MS)技术,研究麦冬对T2DM小鼠血清中代谢物质的影响,分析相关代谢通路。结果:与正常对照组相比,模型组血清的空腹葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量显著升高,高密度脂蛋白胆固醇含量显著降低;灌胃给予麦冬水提物后,T2DM小鼠血清中以上指标均明显改善。代谢组学结果显示,正常组与模型组共有43个差异代谢物,富集于18条通路;麦冬提取物明显降低T2DM小鼠的甘油酸、丙二酸半醛和4-羟基苯基丙酮酸含量,差异代谢物富集于泛醌和其他萜类醌生物合成代谢等7条通路。结论:麦冬水提物具有降低T2DM小鼠血糖和血脂的药效作用,且可能与泛醌和其他萜类醌生物合成等通路有关。